UNIDAD REGIONAL SUR
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS
BIOQUIMICA
PRACTICA #5:
“PRECIPITACIÓN DE PROTEINAS”
PROFESOR:
BISHER ALVAREZ YAMIL MARCELINO
ALUMNA:
BALCAZAR VALDEZ IRAYDA DENYSSE
NAVOJOA, SONORA A 26 DE MARZO DE 2025
1. ¿que es una proteina y de que esta formada?
Se trata de moléculas de aminoácidos unidos en una secuencia muy específica que
produce una molécula funcional que puede plegarse y ser una enzima, o ser parte de
la estructura de la célula, o ser secretada y actuar como molécula señalizadora.
Son moléculas grandes y complejas que desempeñan muchas funciones críticas en
el cuerpo. Realizan la mayor parte del trabajo en las células y son necesarias para la
estructura, función y regulación de los tejidos y órganos del cuerpo
Las proteínas están formadas por aminoácidos, que son moléculas con:
• Grupo amino (-NH₂)
• Grupo carboxilo (-COOH)
• Cadena lateral (R), que varía entre los aminoácidos
Estos aminoácidos se unen mediante enlaces peptídicos para formar cadenas
llamadas péptidos o polipéptidos. La estructura tridimensional que adquieren estas
cadenas determina la función específica de cada proteína en el organismo.
2. ¿que proteinas contiene la clara del huevo?
La clara de huevo es una fuente rica en proteínas de alta calidad y contiene varias,
entre las que destacan:
• Ovalbumina: Es la proteína predominante, representando alrededor del 54% del
total.
• Ovotransferrina (conalbumina): Conocida por su capacidad de unirse al hierro,
constituye aproximadamente el 12–13%.
• Ovomucoide: Es la principal responsable de la actividad alergénica de la clara,
representando cerca del 11%.
• Ovomucina: Contribuye a la viscosidad de la clara.
• Lysozima: Con actividad antibacteriana, representa alrededor del 3–4%.
• Avidina: Una proteína que se une a la biotina, aunque se encuentra en menores
cantidades.
Estas proteínas, junto con otras en menor proporción, contribuyen a las propiedades
funcionales de la clara de huevo, como su capacidad para espumar, coagular y
formar geles, lo que es muy apreciado en diversas aplicaciones culinarias y
nutricionales.
3. ¿de que depende la solubilidad y precipitacion de las proteínas?
La solubilidad y la precipitación de las proteínas dependen de diversos factores que
influyen en sus interacciones con el medio. Entre los principales se encuentran:
• pH:
La carga neta de una proteína varía con el pH. Cerca del punto isoeléctrico, donde la
carga neta es mínima, la repulsión entre moléculas disminuye y tienden a agregarse
y precipitar. En pH alejados de este punto, la carga neta aumenta, lo que favorece su
solubilidad.
• Fuerza iónica:
La presencia de iones en solución puede estabilizar o desestabilizar las cargas de la
proteína. Concentraciones bajas pueden favorecer la solubilidad, mientras que
concentraciones elevadas pueden provocar la “salting out” o precipitación, ya que
los iones compiten con la proteína por la interacción con las moléculas de agua.
• Temperatura:
La temperatura afecta tanto la solubilidad como la estructura de la proteína. A
temperaturas muy elevadas, puede producirse desnaturalización, lo que cambia las
interacciones internas y con el solvente, llevando a la agregación y precipitación.
• Naturaleza del solvente:
La polaridad y las propiedades del solvente determinan cómo se interactúa con la
proteína. Solventes polares, como el agua, tienden a disolver mejor las proteínas,
siempre y cuando la estructura y carga de la proteína sean compatibles.
• Presencia de otros solutos o agentes químicos:
Sustancias como denaturantes, agentes reductores o cofactores pueden modificar la
conformación de la proteína y, en consecuencia, su solubilidad. Algunos agentes
pueden estabilizar la estructura nativa, mientras que otros pueden favorecer la
agregación.
En resumen, la solubilidad y la precipitación de las proteínas se regulan mediante la
interacción de sus propiedades intrínsecas (estructura, composición de aminoácidos)
con las condiciones externas del medio, como el pH, la fuerza iónica, la temperatura
y la naturaleza del solvente.
4. ¿Que es el punto isoeléctrico?
El punto isoeléctrico (pI) es el pH al que una molécula, como una proteína o un
aminoácido, tiene carga neta cero. Esto significa que en ese pH las cargas positivas
y negativas que posee se equilibran, lo que puede afectar propiedades como la
solubilidad y la interacción con otras moléculas. Por ejemplo, en el caso de las
proteínas, cerca del punto isoeléctrico suelen tener una solubilidad mínima, ya que
la repulsión electrostática entre moléculas disminuye y tienden a agregarse o
precipitar.
5. ¿Que solventes organicos se utilizan en la precipitacion de proteínas?
En la precipitación de proteínas se emplean comúnmente solventes orgánicos que, al
mezclarse con la solución acuosa, reducen la solubilidad de las proteínas y alteran
sus interacciones con el medio. Entre los solventes más utilizados destacan:
• Acetona: Es uno de los solventes más habituales debido a su alta capacidad para
reducir la constante dieléctrica del medio, lo que favorece la desestabilización y
agregación de las proteínas.
• Etanol: Se utiliza tanto solo como en combinación con otros solventes; reduce la
solubilidad de las proteínas al interferir con las interacciones hidrofóbicas.
• Isopropanol: Similar al etanol, se emplea para inducir la precipitación mediante la
alteración de las interacciones proteína-solvente.
• Metanol: En algunos protocolos también se utiliza, aunque con menor frecuencia.
Estos solventes actúan disminuyendo la interacción entre las moléculas de agua y
las proteínas, lo que conduce a la pérdida de solubilidad y a la formación de
precipitados proteicos. Cada solvente puede influir de forma distinta según las
características de la proteína y las condiciones específicas del experimento.
6. ¿Que funcion tiene el HCL, NAOH en la precipitacion de proteinas por
solventes orgánicos?
El HCl y el NaOH se utilizan principalmente para ajustar el pH de la solución
durante el proceso de precipitación con solventes orgánicos. Este ajuste es crucial
por varias razones:
• Modificación de la carga neta:
El pH determina el grado de protonación o desprotonación de los grupos
funcionales en la proteína. Ajustar el pH (usando HCl para acidificar o NaOH para
alcalinizar) permite modificar la carga neta de la proteína, lo que influye
directamente en su solubilidad. Cerca del punto isoeléctrico, donde la proteína tiene
carga neta cero, suele ser más propensa a agregarse y precipitar.
• Optimización de la interacción proteína-solvente:
Al modificar el pH, se alteran las interacciones electrostáticas y se mejora la
eficacia de los solventes orgánicos (como acetona, etanol, isopropanol) en la
desestabilización de la envoltura de agua que rodea a la proteína. Esto facilita la
pérdida de solubilidad y favorece la precipitación.
• Control de condiciones experimentales:
Mantener un pH específico es esencial para reproducir resultados en el laboratorio,
ya que cambios en el pH pueden llevar a diferentes grados de desnaturalización o
agregación de proteínas. Así, HCl y NaOH actúan como herramientas para
establecer las condiciones ideales para la precipitación deseada.
En resumen, la función de HCl y NaOH en este contexto es regular el pH, lo que a
su vez modula la carga y solubilidad de las proteínas, permitiendo que los solventes
orgánicos actúen de manera más efectiva en su precipitación.
7. ¿Qué sales son las más usadas para la precipitación de las proteínas, por
salación y por qué?
En la técnica de salting out, se utilizan sales que, al aumentar la fuerza iónica del
medio, reducen la solubilidad de las proteínas al competir por la hidratación. La sal
más empleada es el sulfato de amonio. A continuación, se explica el porqué:
• Sulfato de amonio ((NH₄)₂SO₄):
o Alta solubilidad: Permite disolver grandes concentraciones sin precipitar la
propia sal, lo que posibilita alcanzar niveles de fuerza iónica muy altos.
o Eficacia en la deshidratación: Al estar presente en altas concentraciones,
compite con las proteínas por las moléculas de agua, reduciendo la capa de
hidratación que recubre a la proteína y favoreciendo su agregación y
precipitación.
o Mantenimiento de la estructura: Su uso gradual permite separar las
proteínas de forma controlada sin causar desnaturalización abrupta,
preservando en muchos casos la actividad biológica.
• Otras sales:
Aunque el sulfato de amonio es la más común, en algunos casos se utilizan otras
sales como el cloruro de sodio (NaCl). Sin embargo, su eficacia es menor debido a
que, al tener una menor capacidad para elevar la fuerza iónica comparado con el
sulfato de amonio, el proceso de salting out es menos eficiente.
En resumen, el sulfato de amonio se utiliza por su capacidad para crear condiciones
de alta fuerza iónica sin precipitar la sal misma, permitiendo un control preciso en la
precipitación de proteínas y facilitando la separación según sus propiedades de
solubilidad.
8. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Biuret para determinar
cuantitativamente las proteínas?
La reacción de Biuret se fundamenta en la capacidad del ion cobre (Cu²⁺) de formar
complejos coloreados con los enlaces peptídicos de las proteínas en medio alcalino.
Esto se explica de la siguiente manera:
• Formación del complejo:
En medio básico, los grupos amida (–CONH–) presentes en los enlaces peptídicos
reaccionan con los iones de cobre, formando un complejo de coordinación que tiene
un color violeta o púrpura.
• Relación colorimétrica:
La intensidad del color que se desarrolla es proporcional a la cantidad de enlaces
peptídicos presentes en la muestra, lo cual se correlaciona directamente con la
cantidad de proteína. Por ello, midiendo la absorbancia a una longitud de onda
específica (generalmente alrededor de 540 nm), se puede determinar
cuantitativamente la concentración proteica.
• Aplicación analítica:
Se prepara una curva de calibración con estándares de proteína de concentración
conocida. Posteriormente, se compara la absorbancia de las muestras desconocidas
con esta curva para determinar su concentración proteica.
En resumen, el fundamento de la reacción de Biuret es la formación de un complejo
coloreado entre el ion Cu²⁺ y los enlaces peptídicos en condiciones alcalinas, lo que
permite cuantificar la proteína mediante análisis colorimétrico.
DESARROLLO Y RESULTADOS DE LA PRÁCTICA
PRECIPITACIÓN POR SALACIÓN
1. Comenzamos separando la clara de un huevo y lo colocamos
en un vaso de precipitado
2. Agitamos la clara obtenida
3. Pasamos a filtrar y el volumen del
filtrado fue de 20 ml
4. A este filtrado le añadimos la misma cantidad de solucion
saturada de sulfato de amonio. Agitamos suavemente y
dejamos reposar por unos 15 min.
5. Filtramos nuevamente. El precipitado contiene la ovoglobulina
y el filtrado contiene la ovoalbumina todavía en solución
6. Este filtrado ya está en solución a 50% de sulfato de amonio,
agregamos sulfato de amonio solido para saturarlo al 100%,
para esto, se le agregaron 6.9 gr de sulfato.
Agitamos suavemente para que se disuelva bien el sulfato de
amonio. Dejamos reposar por 15 min.
La fraccion que ahora precipita es la ovoalbúmina
7. Filtramos con papel filtro
REACCION DE BIURET
1. Colocamos tres tubos de ensaye de 13x100
• Tubo #1: 2 ml de agua destilada
• Tubo #2: 2.0 ml. de solucion de ovoalbumina
• Tubo #3: 2.0 ml. de solucion de ovoglobulinaal
2. Agregamos 2.0 ml. del reactivo de biuret a cada uno de
los tres tubos. Agitamos bien y dejamos reposar por 15
min
Obtuvimos estos resultados, se puede observar que el tubo #1 tiene un color azul
muy claro, el tubo #2 cambio su tonalidad un poco más a morado, pero en el tubo
#3 ya se puede observar un cambio más notable a un violeta, lo que nos da a
entender que tuvimos un resultado positivo, ya que este color se debe a la formación
de un complejo entre los iones Cu²⁺ y los enlaces peptídicos presentes en las
proteínas en medio alcalino, cuya intensidad es proporcional a la concentración de
proteína en la muestra.
SEGUNDA PARTE:
PRECIPITACION POR SOLVENTES ORGÁNICOS
1. Colocamos 4 tubos de ensaye de 15x150
• Tubo #1: 3.0 ml. de albúmina de hueho al 0.1 % + 1.0 ml. de acido
clorhidrico a 0.1 N + 5.0 ml. de etanol a 96%
• Tubo #2: 3.0 ml. de albúmina de hueho al 0.1 % + 1.0 ml. de hidroxido
de sodio a 0.1 N + 5.0 ml. de etanol a 96%
• Tubo #3: 3.0 ml. de albúmina de hueho al 0.1 % + 1.0 ml. de solucion
amortiguadora de acetato PH 4.7 + 5.0 ml. de etanol a 96%
• Tubo #4: 4.0 ml. de agua destilada + 5.0 ml. de etanol a 96%
En estos resultados podemos ver que: en el
tubo #1 se puede observar un precipitado casi
nulo, en el tubo #2 hubo un precipitado mucho
menor, en el caso del #3 se puede ver que la
solución se tornó un poco turbia y por último
en el tubo #4 no hubo cambios.
PRECIPITACION POR FORMACION DE SALES
1. Colocamos 6 tubos de ensaye de 13x100
• Tubo #1: 2.0 ml. de alvúmina del huevo al 0.1 % + 0.5 ml. de
cloruro de mercurio al 5%
• Tubo #2: 2.0 ml. de agua destilada + 0.5 ml. de cloruro de mercurio
al 5%
• Tubo #3: 2.0 ml. de alvúmina del huevo al 0.1 % + 0.5 ml. de nitrato
de plata al 1 %
• Tubo #4: 2.0 ml. de agua destilada + 0.5 ml. de nitrato de plata al 1%
• Tubo #5: 2.0 ml. de alvúmina del huevo al 0.1 % + 0.5 ml. de acido
tricloroacetico al 10 %
• Tubo #6: 2.0 ml. de agua destilada + 0.5 ml. de acido tricloroacetico
al 10 %
En el tubo #1 se observa precipitación de la
albúmina
En el tubo #2 no se observó ningún cambió
En el tubo #3 hay un precipitado blanco
En el tubo #4 no tiene cambios observables
En el tubo #5 la solución se tornó turbia
En el tubo #6 no tuvo cambios
En resumen, los tubos que contienen albúmina y
reactivos específicos (Tubo 1, 3 y 5) mostrarán
precipitación debido a la desnaturalización de la
proteína. Los tubos con solo agua destilada (Tubo 2, 4 y 6) no mostrarán cambios visibles.
CONCLUSIÓN:
La práctica evidenció que es posible separar y purificar las proteínas de la clara del huevo
mediante distintos métodos de precipitación. Con la salación usando sulfato de amonio se
logró diferenciar entre ovoglobulina y ovoalbúmina, mientras que la reacción de Biuret
confirmó la presencia y concentración de proteínas. Además, se observaron diferencias en
la precipitación al variar las condiciones con solventes orgánicos y reactivos formadores de
sales, resaltando la influencia del pH, la concentración iónica y la naturaleza del reactivo en
la estabilidad y solubilidad de las proteínas.