PRACTICA No.
2 IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS, PROTEINAS, LIPIDOS
Y ACIDOS NUCLEICOS
Erika Dahianna Rojas Bolaños – 20201085013
Juan Sebastián Novoa Tovar – 20201085006
RESUMEN
Por medio de este laboratorio es posible aprender e identificar la presencia de
biomoléculas. Caracteres de azúcares reductores, también saber en qué tipo de
alimentos es posible encontrar almidón, de igual manera por medio de reacciones saber
si hay proteínas, tambien que hay una desnaturalización en los alimentos como en el
huevo cuando se eleva su temperatura, entendiendo que las moléculas orgánicas que
estructuran la materia viva pertenecen a cuatro grupos que son los carbohidratos,
lípidos, proteínas y ácidos nucleídos. Contemplando que cada grupo de moléculas
presenta características físicas y químicas que las distinguen de las demás. este
laboratorio tiene el fin de entender cómo realizar pruebas cualitativas que permitan
determinar la presencia o ausencia de biomoléculas de estructura básica, teniendo
como referencia los métodos de Fehling que determina azúcares reductores, la glucosa
o sus derivados como la sacarosa o la fructosa, con una coloración anaranjada es
positivo de monosacáridos o disacáridos reductores, el método de Benedict que se usa
para identificar azúcares reductores y disacáridos, detectando aldehídos, cetonas y la
respuesta positiva es el cambio de color que da naranja, también la prueba de Lugol, la
cual prueba de yodo, determinando presencia del almidón, cuando su respuesta es
positiva su tonalidad es como negra, se encuentra el método de Biuret se usa para
identificar proteínas, la formación de bandas violetas-lila es un indicador de enlaces
peptídicos en la solución y la prueba del Sudán III que es un método utilizado para
detectar específicamente las grasas, porque es lipofílico, es soluble en las grasas al ser
de color rojo. Estos métodos determinan la presencia o la ausencia de las biomoléculas,
con el fin de conocer los distintivos que posee la materia y ampliar el conocimiento y la
perspectiva de las cosas al conocer más de su composición
INTRODUCCIÓN
En esta práctica de laboratorio número dos se busca principalmente poder realizar
pruebas cualitativas de la mejor manera posible sin contar con los reactivos felhing,
biuret, lugol y albúmina puesto que no se es posible tenerlos en la casa, sin embargo
se define cada uno de estos el reactivo felhing es el que se utiliza para la detección de
sustancias reductoras, especial o particularmente azúcares reductores y está basada
en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído que pasa a ácido reduciendo la
sal cúprica de cobre, también el reactivo biuret la que indica la presencia de proteínas,
péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida, está hecho de hidróxido potásico y sulfato cúprico, junto con
tartrato de sodio y potasio, de igual manera está la prueba de lugol que consiste en una
reacción química usada para determinar la presencia o alteración de almidón u otros
polisacáridos, esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro,
y la albúmina proteína animal y vegetal, rica en azufre y soluble en agua, que constituye
el componente principal de la clara del huevo y se encuentra también en el plasma
sanguíneo y linfático, en la leche y en las semillas de ciertas plantas, se encuentra en
gran proporción en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una
de las más abundantes en el ser humano, se sintetiza en el hígado. Para que cada una
de estas pruebas permita determinar la presencia o la ausencia de las biomoléculas
como los carbohidratos, los lípidos, las proteínas y los ácidos nucleicos, estos 4 grupos
mencionados hacen parte de la materia viva pues son parte de la estructura básica. La
materia viva se puede definir como la que está formada principalmente por carbono,
hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Estos elementos, al combinarse, forman sustancias que
interactúan entre si dentro de la forma viva más sencilla que es la célula. La célula, es
la unidad estructural y funcional de los seres vivos, es un laboratorio químico vivo en el
cual sus funciones se realizan gracias a la presencia e interacción entre las diferentes
moléculas orgánicas agua y otras sustancias de carácter inorgánico, constituida por tres
elementos básicos: membrana plasmática, citoplasma y material genético (ADN).
Los carbohidratos son uno de los principales tipos de nutrientes, son la fuente más
importante de energía para el cuerpo humano. El sistema digestivo convierte estos
carbohidratos en glucosa. Al unirse dos monosacáridos hacen un disacárido pero si los
dos grupos aldehídos y las cetonas participan o hacen parte del enlace entre los
monosacáridos, los disacáridos no reaccionan con la prueba del benedict, y felhing,
incluyen azúcares añadidos durante el procesamiento y refinación de alimentos. Se
pueden dividir en tres grupos: monosacáridos, ejemplo, glucosa, fructosa, galactosa;
disacáridos, ejemplo, sacarosa, lactosa, maltosa; polisacáridos, ejemplo, almidón,
glicógeno, celulosa. Son las moléculas fundamentales del almacenamiento de energía
en la mayoría de los seres vivos algunos se encuentran formando estructuras como las
paredes de la célula vegetal o el esqueleto de los insectos están formados por una o
más unidades de azúcares sencillos. Los carbohidratos simples se conocen como
monosacáridos, estos, tales como las aldosas o las cetosas dependiendo del número
de carbonos pueden ser triosas, pentosas y hexosas las cuales son las más comunes.
Análisis anticipados han demostrado que la manera en la que los carbohidratos son de
mejor manera asimilados es cuando se incluyen en la dieta en forma de almidón (Rosas,
Cuzon, Gaxiola, Pascual, Chimal, Wormhoudt, 2000). Existen carbohidratos complejos
y carbohidratos polisacáridos Estos son el resultado de la unión de muchos
monosacáridos conformando largas cadenas lineales o ramificadas. Teniendo en cuenta
el almidón que es una cadena larga no puede reaccionar al reactivo benedict y fehling
debido al bajo número de grupos de aldehídos que se encuentran libres en relación con
la longitud de la molécula es por eso que es necesario utilizar el reactivo lugol.
Las proteínas son macromoléculas que constituyen el principal nutriente para la
formación de los músculos del cuerpo, son moléculas orgánicas abundantes en las
células, se encuentran formando estructuras y realizando diversidad de funciones
especializadas, están compuestos por átomos de carbono hidrógeno oxígeno y
nitrógeno y en menor proporción por otros elementos como el fósforo y el azufre. Están
constituidas por unidades llamadas aminoácidos los cuales están unidos entre sí por un
enlace peptídico. La detección y cuantificación de proteínas se basa en la propiedad de
las proteínas para reducir en medio alcalino y de la habilidad del ácido bicinconínico
para formar complejos hidrosolubles de color proporcional a la concentración de
proteínas (Astudillo, Soria, 2011). La calidad nutricional de una proteína la capacidad de
una fuente proteica para cubrir los requisitos de nitrógeno y aminoácidos de un
determinado individuo, en cuanto a la calidad proteica se refiere a la medida en que los
aminoácidos de la dieta pueden utilizarse para la síntesis proteica Las proteínas
funcionales y los péptidos bioactivos son proteínas y péptidos que, además de su valor
nutricional por ser fuente de aminoácidos, son capaces de ejercer efectos biológicos
específicos (Martínez, y Martínez, 2006)
Los lípidos son biomoléculas orgánicas insolubles en agua pero solubles en compuestos
no polares como cloroformo y éter entre sus funciones biológicas está ser componentes
estructurales de las membranas ser los transportes y almacenadores de energía más,
según su estructura y composición se pueden distinguir las siguientes clases de lípidos
que son los ácidos grasos, los triglicéridos, los lípidos polares y los esteroides Según su
estructura y composición se pueden distinguir las siguientes clases de lípidos que son
los ácidos grasos, los triglicéridos, los lípidos polares y los esteroides. Los ácidos grasos
son moléculas anfipáticas es decir tienen una región apolar hidrófoba que repele el agua
y una región polar hidrófila que interactúa con el agua, los ácidos grasos de cadena
corta son más solubles que los ácidos grasos de cadena larga porque la región hidrófoba
es más corta. Los triglicéridos son acilgliceroles un tipo de lípidos formados por una
molécula de glicerol que tiene esterificados sus tres grupos de hidroxilo por tres ácidos
grasos saturados o insaturados (Barba, 2005). Los lípidos polares en agua se asocian
formando micelas estructuras en que las cabezas hidrofilicas quedan en contacto con
agua mientras que las colas hidrocarbonadas forman una fase hidrofóbica interna. Los
esteroides cumplen funciones de regulación en los niveles de sal y la secreción de bilis
también son estructurales en el colesterol es un esteroide que forma parte de la
estructura de las membranas de las células junto con los fosfolípidos.
Los ácidos nucleicos son macromoléculas encargadas del almacenamiento y
transferencia de información genética que constituyen entre el 5 y el 15% del peso Seco
de las células las unidades monomericas de los ácidos nucleicos son los nucleótidos
que se distinguen según la base nitrogenada que forma parte de ellos, los nucleótidos
son moléculas orgánicas formadas por la unión covalente de un monosacárido de 5
carbonos Es decir una pentosa y una base nitrogenada y un grupo fosfato El nucleosido
es parte del nucleótido formado únicamente por la base nitrogenada y la pentosa. Los
ácidos nucleicos son macromoléculas dedicadas al acumulamiento, en la
variación y en el uso de la información hereditaria en los seres vivos. Existen dos tipos
de ácidos nucleicos los cuales son el ADN (ácido desoxirribonucleico) y el ARN (ácido
ribonucleico). Ambos están constituidos por unidades de nucleótidos (Castello, Andrade,
Barbosa, 2010). Los nucleótidos que componen la molécula de ADN presentan
un azúcar del tipo desoxirribosa y son diferenciados entre sí por el tipo de base
nitrogenada que posee: Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) o Guanina (G), Los
nucleótidos que componen la molécula de ARN presentan un azúcar del tipo ribosa y
son diferenciados entre sí por el tipo de base nitrogenada que posee: Adenina (A),
Uracilo (U), Citosina (C) o Guanina (G), observando que entre el ADN y el ARN el
nucleótido que tienen en común es el uracilo que es el que tiene el ARN y la timina que
es el que tiene el ADN.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Distinguir y aprender a realizar algunas pruebas cualitativas que permitan
determinar la presencia o ausencia de biomoléculas tales como: carbohidratos,
lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar el carácter apolar de los lípidos mediante pruebas de solubilidad
Comprobar la reacción de saponificación de algunos lípidos cuando se tratan
con hidróxidos.
Comprobar el poder identificador del Sudan III sobre los lípidos
Determinar cualitativamente, mediante reacciones químicas sencillas la
presencia de proteínas.
Reconocer el fenómeno de desnaturalización proteica COAGULACION por
elevación de la temperatura, cambio en el pH y reacción frente a los alcoholes.
Determinar la presencia de ADN mediante la prueba con el reactivo Difenilamina.
Realizar extracción de DNA a partir de tejidos vegetales.
Emplear las pruebas indicadoras aprendidas para determinar la presencia o
ausencia proteínas y DNA en algunos tejidos de origen animal y/o vegetal.
MATERIALES Y MÉTODOS
Principalmente se debía preparar los materiales los cuales eran el frijol, la papa,
zanahoria, clara de huevo, limón, azúcar de mesa, harina de trigo, y/o maicena, tomate
alcohol, isodine, agua, aceite, teniendo en cuenta que si no se contaba con todos en la
casa era posible cambiar algunos por otros parecidos y lo que se usó para mezclar estos
alimentos con el alcohol fue platos pequeños blancos, cucharas para mezclar. Las
pruebas que se realizaron tenían como fin aprender a usar sustancias como indicadores
químicos para así determinar biomoléculas específicas. Teniendo como referencia los
métodos cualitativos. El método de Biuret se llevó a cabo empleando azúcar de mesa
en un recipiente y luego mezclándolo con alcohol, sabiendo que no fue posible contar
con el reactivo dadas la condiciones este al ser como un indicador permitirá observar
la presencia de monosacáridos o disacáridos reductores, con el método de Lugol se
tomó un pedazo de papa aplicando unas gotas de Isodine para de este modo determinar
si la papa es un almidón, e identificar la presencia de carbohidratos del tipo polisacárido,
la práctica de Biuret reiterando el no contar con el reactivo, se llevó a cabo con un poco
de clara de huevo y aplicando gotas de alcohol, en otro lado la clara de huevo con gotas
de limón se mezcló hasta encontrar algún cambio, de igual modo este método se repite
pero cambiando la clara de huevo por harina, para de este modo identificar la presencia
de enlaces peptídicos en la solución y por tanto de proteínas en la misma, La técnica
del Sudán III se representa con un pedazo de gordo de carne, se aplicó la sustancia en
función del sudán III, ya que este al ser como colorante nos permitió observar la
presencia de lípidos en la grasa de tejido animal.
RESULTADOS
En los experimentos realizados tanto en la primera sesión (identificación de
carbohidratos y proteínas) como la segunda sesión (Identificación de lípidos y ácidos
nucleicos) se obtuvieron diferentes resultados, los cuales nos ayudaron a saber si en
las sustancias con las cuales realizamos los experimentos cuentan con las cualidades
a buscar. Empezando en primer lugar con la identificación de proteínas mediante el
fenómeno de Coagulación, (Figura 1) se observa como después de verter las gotas
alcohol esta empieza a tener una coloración blanquecina, (Figura 1,.1) dando la visa un
tipo de líneas horizontales irregulares en la superficie del vaso, (Figura 1.2) comienza
al albumina de huevo, en diferentes lugares a aclararse de hacer un poco más
transparente en algunos lugares. (Figura 1.3) Se encuentra con la sustancia ya más
blanca y con tipos de puntos blancos alrededor de esta, ya hacia el final del ejercicio (
Figura 1.4) se nota en la sustancia pequeños hilos los cuales son están unidos entre sí,
y de tal manera en la parte de otras de este queda transparente. Ya en los siguientes
resultados de la segunda sesión, (Figura 2) En esta imágenes se los recipientes en
donde vamos a realizar las pruebas de extracción de ADN, y en los materiales que
utilizamos en cada vaso. (Figura 3) Después de haber cortado la zanahoria en pedazos,
fue sumergida en el alcohol y esta se dejó por alrededor de 10 minutos. (Figura 3.1) Ya
pasado el tiempo propuesto para el experimento, se sacó con una cuchara la parte más
superficial del líquido, y a está se le añadía unas gotas de agua, al hacer esto en este
caso la zanahoria, no nos dio ningún cambio el agua de coloración o se tornó un poco
blanca ni nada. Con la siguiente sustancia que era la leche entera (Figura 4) y a el cual
también se le agrego alcohol etílico al 70% y se realiza el mismo proceso y se dejó por
alrededor de 10 minutos, luego de esto ( Figura 4.1) luego de esto también se extrajo
un poco de la capa superior que se formó en vaso, al añadirle las dos gotas de agua si,
en esta si se pudo ver como el agua cambio, puesto que salieron unos tipos de parches
blancos, dándonos a entender que si se identificó el ADN. Con el siguiente ejemplo
(Figura 5) utilizamos limón con su cáscara y como en las anteriores pruebas también el
alcohol al 70%, (Figura 5.1) en este caso notamos lo mismo que con la zanahoria, y al
extraer el líquido después del tiempo y añadirle las mismas gotas vimos que tampoco
ocurrió nada. (Figura 6) intentamos de nuevo la prueba con la zanahoria y de igual
manera, como en el primer caso no obtuvimos el resultado esperado, el agua no cambió
coloración y fue muy parecido al primer intento. Nuevamente volvimos a realiza la
prueba esta vez con unas lentejas (Figura 7), seguimos exactamente las indicaciones
del profesor y lo realizamos como en las pasadas pruebas ya vistas. Y en esta
nuevamente no obtenemos los resultados que queríamos el agua con el cual se debía
identificar el ADN quedo igual, no se vio un cambio, ni de color ni del estado del agua.
Y por último utilizamos un pedazo de tomate (Figura 8), y nuevamente obtenemos un
resultado no deseado pues el tomate y el alcohol que fue extraído de este con el agua
no pasó nada, simplemente mantiene su mismo color y estado.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Para poder realizar una buena discusión de resultados, hicimos un análisis los
resultados obtenidos y al hacer esto nos dimos cuenta que en nuestros resultados no
concuerdan con los resultados esperados, ya que en el caso de la muestra para obtener
las proteínas en la mayoría de los casos, no logramos tener dicha muestra, sabiendo
esto tenemos que saber que para la extracción de proteínas en distintos organismos
puede que se utilicen métodos diferentes y así poder obtener buenos resultados. Tal él
es ejemplo de la identificación de proteínas en una bacteria, donde C Bernal (2006)
afirma en un estudio que “El resultado de la extracción de proteínas de un total de 32
accesiones de P. vulgaris provenientes del Banco de germoplasma del INIA-CENIAP
(Maracay), fueron separadas mediante electroforesis SDS-PAGE 12%, permitiendo una
primera selección de dos materiales con base en los patrones unidimensionales que
arrojaron estos granos. Se realizaron las electroforesis bidimensionales de ambos
materiales y se procedió a un análisis más específico de las proteínas de interés
realizando la inmuno detección con un antisuero que permite evidenciar la presencia y
patrón de expresión de las fitohemaglutininas (55-65 kDa), argelinas (31-40 kDa) e
inhibidor de α-amilasa (15–18 kDa) presentes” ( P.558). De igual manera en en el
experimento en que debemos identificar el ADN los resultados tampoco fueron los
esperados, tal vez porque debimos realizar otros métodos o porque simplemente no
salió bien. En Cambio en la identificación del ADN en otros lugares como en laboratorios
se lleva a cabo con procesos mucho más complicados y trabajados tales como lo que
los que se muestran en, A oure (2008) “Los promastigotes fueron centrifugados a 5000
g por 10 min., posteriormente el sobrenadante fue descartado y al precipitado se le
añadieron 2 ml de buffer de lisis SDS (Tris HCl0.01M, SDS 0.5%, NaCl 0.1M, EDTA
1mM). La mezcla se incubó por 30 min. a temperatura ambiente y seguidamente se
añadió un volumen de fenol-cloroformo (1:1 v/v) con agitación suave; la mezcla se
centrifugó a 5000 g por 10 min, la fase acuosa fue separada a un tubo estéril y a la
misma se le añaden 2.5 vol de [Link] ADN fue precipitado mediante centrifugación a
10000 g durante 10 min., el sobrenadante se descartó y el sedimento (ADN) se
resuspendió en 0.20 ml de buffer TE 1X (Tris-HCl 10mM, pH 8.2, EDTA 1 mM, pH 7).” (
P.8 ). Ya sabiendo esto se puede decir que nuestros experimentos no se realizaron de
la mejor manera y que no contábamos con los materiales necesarios para lograr con
éxito el laboratorio.
CONCLUSIONES
1. Se logró realizar las pruebas con éxito, aunque con diferentes resultados.
2. Logramos realizar la correcta identificación tanto del ADN como de las proteínas
en los organismos trabajados.
3. Se evidencio la importancia de contar con todos los elementos de trabajo
suficientes y adecuados para cada una de las prácticas.
4. Se dio en evidenciar los distintos métodos que se pueden utilizar en casa y en
los laboratorios.
BIBLIOGRAFÍAS
● Astudillo, Y., y Soria, C. (2011). Identificación y caracterización de carbohidratos
y proteínas en las secreciones del dorso y del pie del molusco Limax flavus.
Ecuador. Ecuatoriana de Medicina y Ciencias Biológicas, 32.
● Barba, J. (2005). Lípidos, aterogénesis. México. Mex Patol Clin, 52(3), 5-9.
● Bernal, C., Galindo, I., Pérez, D., y Diez, N,. (2006). Aplicación de la proteómica
comparativa para la identificación de proteínas en phaseolus vulgaris asociadas
a resistencia a plagas. 56(4)
● Castello Branco, K., Andrade, V. Barbosa, J. (2010). Una propuesta de modelo
didáctico para la enseñanza de ácidos nucleicos. Revista Eureka Sobre
Enseñanza Y Divulgación De Las Ciencias, 8(1).
● Martínez, O. y Martínez, E. (2006). Proteínas y péptidos en nutrición enteral.
CODEN NUHOEQ 8, 7-11.
● Rosas, C., Cuzon, G., Gaxiola, G., Pascual, C., Brito, R., Chimal, M. and Van
Wormhoudt, A. (2000). El Metabolismo de los Carbohidratos. Litopenaeus
setiferus, L. vannamei y L. stylirostris
● Orue, A., Y de Abreu, N., Martínez, C., y León Mendoza, A,. (2008). Identificación
de una secuencia de ADN genómico de Leishmania específica del subgénero
Leishmania. 28:6-13
Anexos
Figura 1. (Primera sesión) En esta imagen la clara de huevo, con unas gotas de
alcohol
Figura 1.1 Se observa como la sustancia va tomando un color más blanco
Figura 2. La clara de huevo con unas gotas de agua
Figura 3 Es clara de huevo con unas gotas de limón
Figura 4 Clara de huevo con una gotas de limón más blanca que la figura anterior
Figura 5 (Segunda sesión) Vasos en donde se ven las diferentes sustancias con las
que realizamos la extracción de ADN
Figura 6 Zanahoria cubierta completamente de alcohol
Figura 6.1 La zanahoria pasa más tiempo estando sumergida por completa en alcohol
Figura 7 Un vaso de leche, donde también tiene alcohol
Figura 7.1 Muestra donde el alcohol y la leche ya reposo, y se evidencia la muestra de
ADN por esos pequeños parche blanco que se encuentran en la cuchara.
Figura 8 Vaso con pedazos de limón con cáscara, igualmente cubiertos por alcohol
Figura 8.1 Las mismas sustancias pero ya con 10 minutos de haber sido sumergidas
por el alcohol
Figura 9 Trozos de zanahoria picada, mismamente sumergida en Alcohol
Figura 10 Lentejas sumergidas en la alcohol y estas deben durar más tiempo así,
puesto que son una sustancia donde la extracción de su ADN demora más.
Figura 8 Pedazo grande tomate con su cáscara, sumergido levemente en alcohol.
Dulce
Alimento
Si No
Harina de trigo X
Leche X
Papa X
Limón X
Piña X
Papaya X
Stevia X
Azúcar X
Tabla 1, Determina el dulzor de los alimentos.