LNCA PAOLA MARÍA LÓPEZ GÓMEZ
La cromatografía es una técnica de separación
utilizada en química analítica para identificar y
cuantificar componentes de una mezcla.
El término cromatografía fue introducido en 1906
por el botánico ruso Mikhalil Tswett, para hacer
referencia a la separación de los pigmentos
contenidos en los componentes a separar se
distribuyen en dos fases:
Por lo tanto,la cromatografía
comprende procesos en los que
los componentes de una mezcla,
disueltos en una fase móvil, se
Fase Fase móvil van desplazando con diferente
estacionaria
velocidad a través de una fase
estacionaria.
La imagen representa la separación de los componentes de una mezcla mediante
cromatografía en capa fina ascendente.
1. Fase móvil: Es el solvente que se mueve a lo largo de la
fase estacionaria.
2. Fase estacionaria: Material fijo (por ejemplo, una placa de
sílice) sobre el que ocurre la separación.
3. Mezcla a separar: Se coloca en un punto inicial y, a medida
Los compuestos con mayor
afinidad por la fase móvil se
que el solvente asciende, los componentes se separan.
desplazan más rápido, mientras que
4. Separación de componentes: Cada sustancia migra a una
los que interactúan más con la fase
velocidad distinta según su afinidad con la fase
estacionaria se mueven más lento.
estacionaria.
5. Frente del solvente: Indica hasta dónde ha avanzado el
solvente.
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Existen diferentes tipos de cromatografía según el mecanismo de separación y el estado físico de las fases.
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Cromatografía de adsorción → Basada en la
Cromatografía de gases (CG) → Fase móvil: gas adhesión de los compuestos a la fase estacionaria.
Cromatografía líquida (CL) → Fase móvil: líquido Cromatografía de partición → Separación por
diferencias de solubilidad entre fases.
Cromatografía de intercambio iónico → Utiliza
resinas con cargas para separar iones.
Cromatografía de exclusión por tamaño → Los
compuestos se separan según su tamaño
molecular.
Cromatografía de afinidad → Basada en la
interacción específica entre una molécula y un
ligando.
Puede ser sólido o líquido.
Es sólida no se plantea ningún problema conceptual,
pues se entiende que una fase móvil puede moverse
a través de una fase sólida más o menos porosa. Sin
embargo, cuando la fase estacionaria es líquida, la
fase móvil aun siendo inmiscible con ella, podría
arrastrarla. Esto se resuelve inmovilizando el líquido
que constituye la fase estacionaria por medio de
algún sólido que recibe el nombre de soporte, el cual
ejerce como matriz de retención frente al empuje
mecánico de la fase móvil
En la mayoría de las separaciones columna cromatográfica, y tales métodos
cromatográficas la fase estacionaria se clasifican como cromatografías en
está confinada dentro de un tubo a columna.
través del cual se alimenta la fase
móvil.
Alternativamente, la fase estacionaria puede distribuirse como una capa fina y
homogénea sobre un soporte plano de material inerte.
En este la fase estacionaria tiene forma
plana, llamado cromatografías planares. Otro
representante de este grupo es la
cromatografía en papel, donde el soporte
material es el papel, el cual constituye la fase
estacionaria,
Entre varias posibilidades la sorción es la más común.
Este término se aplica a una clase en la cual un material Los más importantes son alúmina, silicato de aluminio,
(en este caso el soluto) es atraído por otro (la fase silicagel, óxido, silicato y carbonato de magnesio, óxido,
estacionaria). Si el soluto está confinado a la superficie carbonato y fosfato de calcio, como inorgánicos; y
de la fase estacionaria, el fenómeno se llama adsorción, carbón, almidón y azúcares como orgánicos
y el método cromatografía de adsorción. Son muchos
los sólidos (adsorbentes) que se han utilizado como
fase estacionaria en cromatografía de adsorción
Normalmente deben ser some tidos a un proceso térmico
de activación superficial, Como eluyentes (solventes que
se emplean para preparar la fase móvil) se utilizan agua,
alcoholes, cetonas, ésteres, cloroformo, tetracloruro de
carbono, etc. Su capacidad de elución depende de su
polaridad, del adsorbente y de los componentes a eluir
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Polímeros y otras moléculas de alto
peso molecular pueden ser separados
según su tamaño usando materiales
porosos que cubran rangos de tamaño
específicos.
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interacciones específicas entre la fase
estacionaria y un tipo particular de
soluto. Este último método se suele
utilizar para aislar un único soluto de
una mezcla compleja, y no para separar
los componentes de una mezcla entre
sí.
Los componentes separados por
cromatografía deben poder ser visualizados
de alguna manera, hecho que no constituye
un problema para sustancias coloreadas
como los pigmentos, pero cuando los
componentes a separar no pueden ser
observados a simple vista es necesario
recurrir a diversas herramientas de detección,
las cuales se denominan reveladores
Lámparas que emiten luz UV, la cual permite visualizar componentes que por sus
características químicas son capaces de emitir fluorescencia (ej: compuestos fenólicos).
son sustancias químicas con reactividad, la cuala través de éstos es posible seleccionar qué tipo
de moléculas (componentes) queremos visualizar. Ejemplo: Ejemplos: para detectar
aminoácidos o péptidos pequeños se emplea ninhidrina, Lieberman-Bouchard para detectar
sustancias esteroides (tipo colesterol), anticuerpos unidos a cromóforos para visualizar
determinados antígenos presentes en muestras biológicas, etc
Dependiendo de la técnica cromatográfica considerada los detectores pueden constituir todo un
sistema instrumental, como por ejemplo los detectores másicos (espectrómetro de masas) que
se utilizan con mucha frecuencia en cromatografía gaseosa (CG-MS), y los detectores UV muy
empleados en cromatografía líquida de alta performance (HPLC).
L
La cromatografía es una ex
herramienta fundamental en
análisis químico y biológico,
permitiendo separar y analizar
compuestos con alta precisión.
Sgariglia, M. A., Soberón, J. R., Sampietro, D. A.,
& Vattuone, M. A. (2010). Cromatografía:
Conceptos y aplicaciones. Revista Arakuku, 2(1),
1-6. Facultad de Ciencias Naturales, Universidad
Nacional de Tucumán.
Absorción: es la retención de una especie química por parte de una masa y depende de la tendencia que
tiene ésta a formar mezcla o a reaccionar químicamente con la misma. Adsorbente: fase estacionaria en la
cromatografía de adsorción y de reparto.
Adsorción: es la retención de una especie química en los sitios activos de la superficie de un sólido,
quedando limitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial, esta retención
superficial puede ser física o química.
Disolvente o revelador: cualquier fase móvil.
Elución: proceso de extraer un soluto de la fase estacionaria.
Eluyente: la fase móvil una vez que se extrae de la columna.
Fase estacionaria: material que permanece dentro de la columna cromatográfica durante la cromatografía
y que retiene algún componente de la muestra, posee una gran área superficial y puede ser un sólido o un
líquido dispuesto sobre un sólido que actúa como soporte.
Fase móvil: es un fluido que puede ser líquido, gas o fluido supercrítico que se usa como portador de la
mezcla y que se hace pasar a través de la columna cromatográfica y la fase estacionaria.
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