Área Académica

Sección: 82

Profesor: Ángel Hernández

Estudiantes:
Ashley Bussi Reyes ( 1121821)
Raquel Zaglul-Manrique (1120747)

María José De La Mota ( 1120986)

Yahel Calderón Sánchez (1122981)

Título:
Caso Clínico Enzimas

Fecha:
Miércoles 02 de abril del 2025
Experimento #1. Determinación del pH óptimo de la enzima.

Objetivos
Comparar el funcionamiento de la α-amilasa salival en soluciones de pH distinto
para hipotetizar un rango de pH óptimo.

Materiales

• 3 tubos de ensayo
• 6 pipetas de 5 ml
• 1 pipeta de 10 ml
• Lápiz de cera
• Solución pH 5.0
• Solución pH 10.0
• Solución pH 7.0
• Almidón
• Solución de Yodo
• Espectrofotómetro

Procedimiento
1. Rotule tres tubos de ensayo con las letras “A”, “B” y “N” respectivamente.

2. Al tubo de ensayo rotulado como A agregue con una pipeta 1 ml de solución

pH 5.0.
3. Al tubo de ensayo rotulado como B agregue con una pipeta 1 ml de solución
pH10.0.
4. Al tubo de ensayo rotulado como N agregue con una pipeta 1 ml de solución
pH 7.0.
5. Utilizando una pipeta agregue 2 ml de la mezcla rotulada como “enzima” a
cada tubo de ensayo.
6. Utilizando una pipeta agregue 2 ml de almidón al 1% a cada tubo de ensayo.
Mezcle bien.
7. Repose por 5 minutos a temperatura ambiente.
8. Al finalizar el tiempo utilizando una pipeta agregue a cada tubo de ensayo 1
ml de solución de yodo y 5 ml de agua destilada.
9. Mezcle y coloque el tubo en el espectrofotómetro.
[Link] el valor de transmitancia (trans) y absorbancia (abs) en la tabla de
resultados (ver anexo #1 para ver el manejo del espectrofotómetro).
Tabla 1. Resultados

Tubo de Ensayo pH Cambio colorimétrico

A 5 De rosado a azul
oscuro
B 7 De amarillo a amarillo
más
N 10 Anaranjado

Cambio colorimétrico
El cambio de color observado en los tubos de ensayo se debe a la interacción
del yodo con el almidón. El yodo crea un complejo con las cadenas de amilosa
presentes en el almidón, produciendo una tonalidad de azul intenso. No
obstante, cuando la α-amilasa salival descompone el almidón en sus derivados
más reducidos (maltosa y dextrinas), la interacción con el yodo varía, originando
distintas tonalidades (1).
En el tubo A, de pH 5, se notó una transición de rosado a azul oscuro, lo cual
señala que el almidón continúa presente, lo que sugiere una actividad enzimática
reducida.
En el tubo B, de pH 7, se mantuvo amarillo, indicando una degradación completa
del almidón, lo que sugiere que este es el pH óptimo de la α-amilasa.
En el tubo N, de pH 10, se tornó anaranjado, lo que sugiere que hubo una
actividad enzimática parcial, pero no tan eficiente como en pH 7.

Limitaciones
En este experimento, uno de los problemas más significativos fue la ausencia de
un espectrofotómetro, lo que dificultó la cuantificación de la absorbancia y
transmitancia de las soluciones. Sin esta evaluación, solo se pudo valorar el
resultado de manera cualitativa (observando las variaciones de color), sin
obtener información numérica acerca de la degradación del almidón.
Imágenes del experimento

Ilustración 1- Antes.

Ilustración 2- Después.

Preguntas de reflexión
1. ¿Qué reacción queremos estudiar en este experimento?
El objetivo es analizar la actividad de la α-amilasa salival, una enzima que
hidroliza los enlaces α-1,4-glucosídicos del almidón con el fin de transformarlos
en productos de menor tamaño como la maltosa y las dextrinas. En este ensayo,
se examina la influencia del pH en la eficacia de esta reacción.

2. ¿Cuál de los sustratos o productos es la base para el cambio

colorimétrico?
El almidón es la sustancia que interactúa con el yodo, generando una tonalidad
de azul intenso. Conforme la α-amilasa lo transforma en maltosa y dextrinas, la
interacción con el yodo se altera, provocando cambios en el color que se percibe.
3. Relacione el cambio en la transmitancia con el cambio de concentración
de esta sustancia.
En un espectrofotómetro, la transmitancia aumenta cuando la solución se vuelve
más clara (menos absorbancia de luz), lo que indicaría una mayor degradación
del almidón. Si el almidón no se degrada, la solución retiene su color oscuro y la
transmitancia es menor. Como no se pudo medir con el espectrofotómetro, la
observación visual sugiere que el tubo con pH 7 tuvo la mayor degradación del
almidón, seguido por pH 10 y luego pH 5 (1).

4. Relacione sus hallazgos con el conocimiento existente sobre la cinética

enzimática y cambios de pH.
La actividad de las enzimas depende del pH óptimo, que en este caso es cercano
a 7, lo que concuerda con el ambiente fisiológico de la boca. A pH 5, la enzima
tiene baja actividad, lo que explica la coloración azul oscura. A pH 10, aunque
hay algo de actividad, esta disminuye debido a la desnaturalización parcial de la
enzima. Estos resultados confirman que las enzimas tienen un rango de pH en
el que funcionan mejor, y que desviaciones extremas pueden reducir su actividad
o incluso inactivarlas.
Experimento #2. Determinación de la temperatura óptima de la enzima.

Objetivos

Comparar el funcionamiento de la α-amilasa salival en soluciones a

temperatura distintas para hipotetizar un rango de temperatura óptima.

Materiales

• 3 tubos de ensayo
• 2 pipetas de 5 ml
• 1 pipeta de 10 ml
• 2 termómetros
• 22 estufas eléctricas
• Agua helada
• Lápiz de cera
• Solución pH 7.0
• Almidón
• Solución de Yodo
• Espectrofotómetro

Procedimiento

1. Rotule tres tubos de ensayo con las letras “D”, “E” y “F” respectivamente.
2. Al cada tubo de ensayo agregue 1 ml de solución pH 7.0.
3. Utilizando una pipeta agregue 2 ml de la mezcla rotulada como “enzima” a
cada tubo de ensayo.
4. Al tubo de ensayo rotulado como “D” deje reposar en agua helada a 0° C por
5 minutos.
5. Al tubo de ensayo rotulado como “E” deje reposar en baño maría calentado a
37° C por 5 minutos.
6. Al tubo de ensayo rotulado como “F” deje reposar en baño maría calentado a
100° C por 5 minutos.
7. Al finalizar el tiempo estipulado utilizando una pipeta agregue 2 ml de
almidón al 1% a cada tubo de ensayo. Mezcle bien.
8. Repose por 5 minutos a temperatura ambiente.
9. Al finalizar el tiempo utilizando una pipeta agregue a cada tubo de ensayo 1
ml de solución de yodo y 5 ml de agua destilada.
[Link] y coloque el tubo en el espectrofotómetro.
[Link] el valor de transmitancia y absorbancia en la tabla de resultados.

Imágenes del experimento

Ilustración 1- Después.

Resultados

Tubo de Temperatura Color

Ensayo
E 0°C Rojo
D 37° C Naranja
F 100°C Azul oscuro
Preguntas de reflexión

1. ¿Qué reacción queremos estudiar en este experimento?

Examinando la acción de la enzima α-amilasa salival en el almidón,
particularmente la manera en que cambia su actividad dependiendo del pH y la
temperatura. La α-amilasa produce la hidrólisis del almidón para convertirlo en
azúcares más sencillos como la maltosa. La meta es establecer el pH y la
temperatura ideales para dicha enzima.

2. ¿Cuál de los sustratos o productos es la base para el cambio

colorimétrico?

La alteración del color se fundamenta en la interacción entre el almidón y el yodo.

Cuando el almidón se encuentra presente, el yodo genera un tono azul pálido o
violeta. Conforme la α-amilasa descompone el almidón, su intensidad disminuye
(se torna naranja o rojo), o incluso se desvanece, lo que señala que existe menos
almidón disponible.

3. Relacione el cambio en la transmitancia con el cambio de concentración

de esta sustancia.
La transmitancia se incrementa cuando existe menos almidón, dado que el color
se torna más claro (menos absorción de luz).
Por otro lado, si el nivel de almidón es elevado (debido a que la enzima no lo
descompone), la mezcla se torna más oscura y la transmitancia se reduce,
mientras que la absorbancia se incrementa.
Así pues:

Elevada actividad enzimática → Disminución del almidón → Incremento en la

transmitancia.

Baja actividad enzimática → Incremento de almidón → Disminución de la

transmitancia.

4. Relacione sus hallazgos con el conocimiento existente sobre la cinética

enzimática y cambios de temperatura.

De acuerdo con la cinética enzimática, las enzimas poseen una temperatura

ideal, usualmente alrededor de los 37°C, donde su actividad catalítica se
intensifica. En condiciones de bajas temperaturas, como los 0 °C, la actividad se
reduce significativamente debido a la lentitud en el movimiento molecular, lo que
disminuye la frecuencia de choques entre la enzima y el sustrato. En cambio, a
altas temperaturas, como los 100 °C, la enzima experimenta un proceso de
desnaturalización, donde pierde su estructura tridimensional y, en consecuencia,
su capacidad de funcionamiento (1).

Experimento #3. Determinación de la concentración óptima de la enzima.

Materiales
• 3 tubos de ensayo
• 2 pipetas de 5 ml
• 1 pipeta de 10 ml
• 2 termómetros
• 2 estufas eléctrica
• Agua helada
• Lápiz de cera
• Solución pH 7.0
• Almidón
• Solución de Yodo
• Espectrofotómetro
• Agua destilada

Procedimiento
3. Tome la mezcla “enzima” y prepare una dilución al 100%, al 50% y al 5%.

4. Rotule tres tubos de ensayo con las letras “G”, “H” y “I” respectivamente.

5. Al cada tubo de ensayo agregue 1 ml de solución pH 7.0.

6. Al tubo de ensayo rotulado como “G” agregue 2 ml de la “enzima” al 5%.

7. Al tubo de ensayo rotulado como “H” agregue 2 ml de la “enzima” al 50%.

8. Al tubo de ensayo rotulado como “I” agregue 2 ml de la “enzima” al 100%.

9. Utilizando una pipeta agregue 2 ml de almidón al 1% a cada tubo de

ensayo. Mezcle bien.

10. Repose por 5 minutos a temperatura ambiente.

11. Al finalizar el tiempo utilizando una pipeta agregue a cada tubo de ensayo
1 ml de solución de yodo y 5 ml de agua destilada.

12. Mezcle y coloque el tubo en el espectrofotómetro.

 13. Registre el valor de transmitancia y absorbancia en la tabla de resultados.

Resultados

Tubo de Ensayo Concentración Cambio colorimétrico

G Enzima al 5% Ámbar
H Enzima al 50% Ámbar oscuro
I Enzima al 100% Marrón oscuro

Cambio colorimétrico
El cambio de color observado en los tubos de ensayo se debe a la interacción
de la enzima con el sustrato, lo que genera distintos productos y variaciones en
la coloración. A medida que aumenta la concentración enzimática, la intensidad
del color se oscurece, lo que sugiere una mayor actividad catalítica.

En el tubo G, con enzima al 5%, se observó un tono ámbar, lo que indica una
actividad enzimática moderada. En el tubo H, con enzima al 50%, el color se
tornó ámbar oscuro, lo que sugiere una mayor degradación del sustrato.
Finalmente, en el tubo I, con enzima al 100%, el cambio a marrón oscuro indica
una reacción más intensa, lo que podría deberse a una saturación del sustrato o
la formación de productos secundarios. Estos resultados permiten inferir la
concentración óptima de la enzima para maximizar su eficiencia sin llegar a
niveles que pudieran inhibir su función.

Preguntas de reflexión
1. ¿Qué reacción queremos estudiar en este experimento?
Por medio de este experimento de va a estudiar la actividad de la α-amilasa
salival, una enzima que descompone el almidón en azúcares más simples.
Siguiendo esa línea, lo que se busca analizar es cómo la concentración de la
enzima afecta la degradación del almidón en un pH de 7.0.

2. ¿Cuál de los sustratos o productos es la base para el cambio

colorimétrico?
El almidón es la base para el cambio colorimétrico. La solución de yodo
reacciona con el almidón y produce un color oscuro (marrón o azul-negro). A
medida que la amilasa degrada el almidón, la intensidad del color disminuye,
resultando en tonos más claros como ámbar.
 3. Relacione el cambio en la transmitancia con el cambio de
concentración de esta sustancia.
A mayor concentración de α-amilasa, se degrada más almidón, por lo que el color
oscuro disminuye y la solución se vuelve más clara. Esto significa que la
transmitancia en el espectrofotómetro aumentará en los tubos con más actividad
enzimática, ya que habrá menos almidón para reaccionar con el yodo (1).

4. Relacione sus hallazgos con el conocimiento existente sobre la

cinética enzimática y cambios de concentración de enzima.
Según la cinética enzimática, a mayor concentración de enzima, mayor será la
velocidad de reacción hasta que se alcance la saturación del sustrato. En este
experimento, el tubo con mayor concentración de α-amilasa 100% tiene la mayor
degradación de almidón, lo que se refleja en el color más claro. Sin embargo, el
hecho de que el tubo con 5% de enzima tenga un color más claro que el de 50%
sugiere que podría haber factores adicionales afectando la actividad enzimática,
como limitación de sustrato o posibles inhibiciones enzimáticas.

Conclusión

Los experimentos realizados permitieron evaluar la influencia del pH, la

temperatura y la concentración enzimática sobre la actividad de la α-amilasa
salival. En el primer experimento, se determinó que el pH óptimo para la actividad
enzimática es 7.0, ya que en este medio se observó una completa degradación
del almidón, evidenciado por la ausencia de coloración azul intensa con el yodo.
Valores de pH extremos, como 5.0 y 10.0, redujeron significativamente la
eficiencia de la enzima.
En cuanto al segundo experimento, se comprobó que la α-amilasa alcanza su
máxima actividad a 37°C, temperatura fisiológica del organismo humano. A
temperaturas bajas (0°C), la actividad enzimática se redujo notablemente debido
a la disminución de la energía cinética de las moléculas. A temperaturas elevadas
(100°C), la enzima se desnaturalizó, perdiendo completamente su función
catalítica.

Por último, el experimento sobre la concentración enzimática demostró que a

mayor concentración de α-amilasa, mayor degradación del almidón, hasta
alcanzar un punto de saturación en el que el aumento de enzima no genera una
diferencia significativa en la reacción. Esto concuerda con la teoría de cinética
enzimática, donde la velocidad de reacción se incrementa proporcionalmente a
la concentración enzimática hasta alcanzar un límite determinado por la
disponibilidad del sustrato.
A pesar de las limitaciones, como la ausencia de espectrofotómetro para la
cuantificación de absorbancia y transmitancia, los resultados obtenidos
concuerdan con la literatura sobre actividad enzimática. Esto resalta la
importancia del pH, la temperatura y la concentración enzimática como factores
críticos para la eficiencia catalítica de la α-amilasa salival en la hidrólisis del
almidón.
 Referencias Bibliográficas

(1) Science in School. Espectrometría en las escuelas: experimentos

prácticos – Science in School [Internet]. Science in School. 2010. Available
from: [Link]

(2) Cardella CJ. Bioquímica: Conceptos esenciales. 2da ed. México: El

Manual Moderno; 2013.

(3) Marks DB, Marks AD, Smith CM. Bioquímica médica básica. 3ra ed.
México: McGraw-Hill; 2013.