Docente: Lic.

Marlene Suxo Tejada

PRÁCTICA
DETERMINACION DE COLESTEROL
OBJETIVO GENERAL:
•Determinar mediante espectrofotometría concentración de colesterol en
suero.
OBJETIVO ESPECÍFICO:
• Reconocer la importancia clínica de la determinación de colesterol
• Describir las condiciones pre-analíticas necesarias para la
determinación de colesterol.

INTRODUCCIÓN:
El colesterol es una sustancia grasa natural presente en todas las células del
cuerpo humano necesaria para el normal funcionamiento del organismo.
El colesterol es una molécula lipídica, base de síntesis de los demás esteroides
como las hormonas masculinas, femeninas, gluco y mineralocorticoides, así como
las sales biliares y la vitamina D, con ellas comparte el núcleo ciclopentano
perhidrofenantreno.
Forma parte de las biomembranas regulando su fluidez. Tiene origen endógeno
por síntesis a nivel hepático, intestino y otros tejidos; y exógeno de la dieta (de
origen animal como la yema de huevo, carnes etc.). Se considera importante su
participación en la aterogénesis unida a la Lipoproteína de baja densidad o LDL,
por ello su determinación aislada o como parte del perfil lipídico es muy importante
para evaluar el riesgo coronario.
¿Qué es el colesterol bueno (HDL), el colesterol malo (LDL) y la lipoproteína de
muy baja densidad (VLDL)?
El colesterol bueno (HDL), malo (LDL) y lipoproteína de muy baja densidad (VLDL)
son lipoproteínas, es decir, una combinación de grasas (lípidos) y proteínas. Los
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GUÍA PRÁCTICA – CARRERA TECNOLOGÍA MÉDICA Aux.: Sol Ajhuacho Quiroga
MENCIÓN LABORATORIO CLÍNICO
ASIGNATURA: PATOLOGÍA CLÍNICA

lípidos necesitan estar unidos a las proteínas para moverse en la sangre. Los
diferentes tipos de lipoproteínas tienen distintos propósitos:
HDL significa lipoproteínas de alta densidad en inglés. En ocasiones se le llama
colesterol "bueno" porque transporta el colesterol de otras partes de su cuerpo de
vuelta al hígado. Su hígado luego elimina el colesterol de su cuerpo
LDL significa lipoproteínas de baja densidad en inglés. A veces se le llama
colesterol "malo" porque un nivel alto de LDL lleva a una acumulación de placa en
las arterias
Lipoproteína de muy baja densidad (VLDL en inglés). Algunos también la
califican como colesterol "malo" porque contribuye a la acumulación de placa en
las arterias. Pero la lipoproteína de muy baja densidad y el LDL son diferentes; la
lipoproteína de muy baja densidad transporta triglicéridos y el LDL principalmente
lleva colesterol

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA
Este método para la determinación de colesterol total en suero1,2 se basa en el
uso de tres enzimas: colesterol esterasa (CE), colesterol oxidasa (CO) y
peroxidasa (POD). En presencia de este último la mezcla de fenol y 4-
aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno,
formando una quinonaimina coloreada proporcional a la concentración de
colesterol en la muestra.
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PRINCIPIO DE REACCION

CE
Colesterol esterificado ----------------------→ Colesterol + Ácidos grasos
CO
Colesterol + O2 -------------------------→ Colestenona + H2O2
H2O2
4-AA + Fenol ----------------------------→ Quinonaimina + 4H2O
POD

FASE ANALITICA
REACTIVOS
Reactivo : PIPES 200 mmol/L pH 7,0, colato sódico 1 mmol/L, colesterol esterasa
> 250 U/L, colesterol oxidasa > 250 U/L, peroxidasa > 1 KU/L, 4-aminoantipirina
0,33 mmol/L, fenol 4 mmol/L, tensioactivos no-iónicos 2 g/L (p/v). Biocidas.
Patrón de Colesterol: Colesterol 200 mg/dL (5,18 mmol/L). Patrón primario de
matriz orgánica. El valor de concentración es trazable al Material de Referencia
Certificado 909b.

MATERIALES:
❖ Muestra de suero
❖ Tubos
❖ Papel absorbente
❖ Micropipetas
❖ Tips para micropipetas
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OTROS:
❖ Marcador indeleble o de vidrio
❖ Equipo de stat fax
ELEMENTO DE BIOSEGURIDAD:
❖ Guantes
❖ Lentes
❖ Bata
❖ Piyama
❖ Gorro

PROCEDIMIENTO:

BLANCO STANDARD MUESTRA

Standard 10ul

Muestra 10ul

Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC. Leer la absorbancia (A) de la muestra y el

VALOR DE REFERENCIA: <200 mg/dl

DESEABLE <170 mg/dl

LIMITROFE 170-199 mg/dl

ALTA >200 mg/dl

SIGNIFICADO CLÍNICO
Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación
de ateromas dado que las complicaciones arterioscleróticas prevalecen en
individuos hipercolesterolémicos.
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VALORES AUMENTADOS
• Condiciones fisiológicas: embarazo, edad avanzada
• Hipercolesterolemia familiar
• Procesos colestasicos
• Síndrome nefrótico
• Anorexia nerviosa
• Gota
• Lupus
• Alcoholismo
• Diabetes mellitus
¿Qué causa el colesterol alto?
▪ Hábitos alimenticios poco saludables, como comer muchas grasas dañinas.
Un tipo, la grasa saturada, se encuentra en algunas carnes, productos
lácteos, chocolate, productos horneados y alimentos procesados y fritos.
Otro tipo, la grasa trans, se encuentra en algunos alimentos fritos y
procesados. Comer estas grasas puede elevar su colesterol malo (LDL)
▪ Falta de actividad física, con mucho sedentarismo y poco ejercicio. Esto
reduce el colesterol bueno (HDL).
▪ Fumar, lo que reduce el colesterol bueno (HDL), especialmente en las
mujeres. También aumenta su colesterol malo (LDL)

VALORES DISMINUIDOS
• Insuficiencia hepática
• Hipertiroidismo
• Anemia hemolítica
• Desnutrición
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BIBLIOGRAFIA
❖ [Link]
❖ [Link]
❖ [Link]
❖ Valtueña, P. J. (2019). Balcells. La clínica y el laboratorio (23.a ed.).
Elsevier España, S.L.U.

CUESTIONARIO
1. ¿Qué es el colesterol?
2. Escriba los valores normales del colesterol
3. Escriba en sus palabras la diferencia entre HDL Y LDL
4. Escriba el principio de reacción del colesterol
5. ¿Qué alimentos nos ayuda a bajar el colesterol en sangre?