FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
● Tema:
Determinación de coliformes y Escherichia coli por la técnica de filtración de
membrana
● Objetivo
Realizar el control microbiológico de una muestra de agua obtenida de una quebrada
de la región amazónica utilizando la técnica de la membrana filtrante.
● Fundamento
Las bacterias coliformes, incluidas E. coli, son utilizadas habitualmente como
indicadores de contaminación fecal en cuerpos de agua. Su presencia señala una
posible introducción de microorganismos patógenos, lo que las convierte en un
parámetro clave para evaluar la seguridad y calidad del agua (Makuwa et al., 2020).
La técnica de filtración por membrana es un método ampliamente utilizado para la
detección y cuantificación de los microorganismos antes mencionados en muestras
de agua. Este procedimiento consiste en filtrar un volumen conocido de agua a
través de un filtro de membrana estéril, el cual tiene poros de tamaño adecuado para
retener las bacterias presentes en la muestra. Posteriormente, el filtro se incuba
sobre un medio de cultivo selectivo (Endress+Hauser, 2021; Condorchem Envitech,
2023).
El Agar chromocult facilita el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos
deseados, permitiendo su identificación y cuantificación, es un medio cromogénico
diseñado específicamente para la detección y diferenciación de bacterias coliformes
totales y E. coli en muestras de agua, en su formulación contiene dos sustratos
enzimáticos específicos que permiten la diferenciación visual de las colonias de las
bacterias (Vergine et al., 2016). El sustrato Salmon-GAL es hidrolizado por la enzima
β-D-galactosidasa, característica de los coliformes totales, generando un producto
que tiñe las colonias de color rojo. Por otro lado, el sustrato X-glucurónido es
descompuesto por la enzima β-D-glucuronidasa, exclusiva de E. coli, lo que produce
una coloración azul en las colonias positivas. Dado que E. coli posee ambas
enzimas, puede escindir tanto el Salmon-GAL como el X-glucurónido, resultando en
colonias de un color violeta-azul oscuro distintivo. Esto permite una diferenciación
clara de las colonias de E. coli frente a las de otros coliformes, que se presentan
únicamente de color rojo (MDM Científica, 2020).
El monitoreo de estos microorganismos ofrece información clave sobre el estado
sanitario del agua y permite identificar el impacto de actividades humanas, como la
descarga de aguas residuales, en el equilibrio y la salud del ecosistema acuático .
● Materiales, equipos y reactivos
Materiales Reactivos Equipos
Frasco esteril de orina Membrana filtrante de Equipo de filtración
Lámparas de alcohol 0.45um de tamaño de Incubadoras
Pinza poro Autoclave
Agar Chromocullt Cocineta
Tabla 1. Materiales, reactivos y equipos
● Flujograma
● Cálculos y Resultados
○ Muestra: Agua de vertiente tratada por filtración (uso doméstico, no
consumida)
○ Conteo de colonias
Coliformes totales E. coli
Nº de colonias 8 41
Coloración Rojas Azules
Tabla 2. Conteo de colonias.
○ Cálculos de colonias a examinar de las cajas seleccionadas
Nº colonias
C= ∗V filtración
V total ❑
Coliformes:
8
C= ∗100
100∗1∗1 ❑
C= 8 NMP/100mL
E. coli:
41
C= ∗100
100∗1∗1 ❑
C= 41 NMP/100mL
● Discusión
El agua es un recurso esencial para la vida y desempeña un papel crucial en
diversas actividades humanas, incluido su uso para el consumo. Por esta razón, el
análisis microbiológico es un parámetro clave en la evaluación de la calidad del
agua, ya que permite identificar microorganismos patógenos, como las bacterias
coliformes, cuya presencia puede ser indicativa de contaminación. Entre estos
microorganismos, se encuentran los coliformes totales y los coliformes fecales, estos
últimos representados principalmente (en un 95%) por Escherichia coli y Klebsiella .
Estas bacterias suponen un riesgo significativo para la salud humana, llegando
incluso a ocasionar enfermedades graves (Aroca & Toapanta, 2023).
Según el Instituto Nacional de Estadísticas y Censos del Ecuador (INEC, 2019), el
67,8% de la población accede a fuentes de agua clasificadas como tipo A (tuberías,
pozos protegidos o agua embotellada) en cantidad suficiente y libre de
contaminación fecal, por Escherichia coli. Sin embargo, un 1,9% de las personas
recibe agua de estas fuentes en cantidades insuficientes, mientras que el 21,5%
accede a agua tipo A con contaminación fecal. Además, un 8,8% de la población
utiliza agua de fuentes no protegidas, como acequias, ríos o pozos, las cuales
presentan un alto riesgo de contaminación.
La norma técnica ecuatoriana NTE INEN 1108-2020 establece que los valores
permisibles para coliformes totales y fecales ( E. coli ) en agua de consumo deben
ser ausencia o <1,1 NMP/100 mL. En el presente análisis, una muestra de agua de
vertiente sometida únicamente a filtración y utilizada exclusivamente para limpieza y
riego de plantas mostró valores de 41 NMP/100 mL para E. coli y 8 NMP/100 mL
para coliformes totales, excediendo ampliamente los límites. permisibles. Esta
discrepancia se explica por la ausencia de tratamientos avanzados que se aplican al
agua destinada para consumo humano, aunque, incluso con estos procesos,
algunas fuentes no logran cumplir con los estándares establecidos.
Un estudio realizado por Poveda Cárdenas et al. (2022) en la ciudad de Durán
evidenció que el agua potable analizada presentó 9 y 20 NMP/100 mL para
coliformes fecales y totales, respectivamente, superando los límites normativos. Esto
confirma que a nivel nacional persisten fuentes de agua que no cumplen con los
parámetros microbiológicos requeridos, lo cual pone en riesgo la salud de los
consumidores. Aunque la muestra analizada en este caso no está destinada al
consumo humano, estos resultados resaltan la importancia de tomar precauciones
con el agua que utilizamos, dado que la contaminación microbiológica puede
aumentar el riesgo de Enfermedades de Transmisión Alimentaria (ETA).
Este análisis destaca la relevancia de implementar sistemas de tratamiento
adecuados y monitorear la calidad del agua para garantizar su seguridad, ya sea
para consumo directo o para otras actividades.
● Conclusión
En conclusión, el agua es un recurso vital para la vida humana, por lo que es
fundamental garantizar su calidad mediante el control de microorganismos
patógenos, dado el riesgo que estos representan para la salud pública. Los
resultados evidenciaron que el agua de la fuente analizada no cumple con los límites
microbiológicos establecidos por la norma ecuatoriana, superando ampliamente los
valores permisibles para coliformes totales y fecales (E. coli). Esta situación refleja
deficiencias en el sistema de tratamiento, lo que expone a la población a riesgos
sanitarios considerables, incluso en casos como este, en donde el agua no está
destinada al consumo humano.
● Bibliografía
Aroca, S. A. S., & Toapanta, V. H. G. (2023). Calidad Microbiológica del Agua de Consumo
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Endress+Hauser. (2021). Filtración por membranas en el tratamiento de aguas.
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Makuwa, S., Tlou, M., Fosso-Kankeu, E., & Green, E. (2020). Evaluation of Fecal Coliform
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Poveda Cárdenas NL, Sánchez Baidal KE. Análisis Microbiológico De Agua Potable Según
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Vergine, P., Salerno, C., Barca, E., Berardi, G., & Pollice, A. (2016). Identification of the
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● Anexos
Figura 1. Agar Chromocult con colonias de coliformes (rojas) y E. coli (azuladas)
Figura 2. Parámetros microbiológicos del agua para consumo humano según NTE INEN 1108-2020