Instituto Politécnico Nacional Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología
Ciencias Básicas Academia de Microbiología Ingeniería Farmacéutica Semestre 25-1
Unidad de Microbiología Farmacéutica
aprendizaje:
Nombre del alumno: Pulido viveros jonathan Fecha:23/11/24 Grupo: Equipo:7
Práctica No 8. Pruebas para identificar bacterias (Parte I)
[Link]
Objetivos generales
Identificar bacterias de interés farmacéutico, a través de su metabolismo microbiano
Objetivos específicos:
Realizar pruebas para determinar la actividad enzimática sobre los carbohidratos y sales
orgánicas como principales fuentes de carbono.
Realizar pruebas de hidrolisis para aminoácidos y proteínas para demostrar su actividad
enzimática.
Realizar pruebas para demostrar actividad enzimática en los procesos de oxido
reducción.
2. Resultados:
a.- Anota los resultados obtenidos: observaciones de la morfología microscópica
señalando la forma, agrupación y resultado del Gram
Al realizar nuestra tinción de Gram obtuvimos la presencia de bacilos
largos Gram positivos.
Se concluyo que la bacteria es Gram positiva ya que al realizar la
tinción de Gram, las células se tiñen de color morado.
b.- Tabla de resultados de las pruebas bioquímicas
Al realizar nuestras pruebas bioquímicas no se obtuvieron los resultados esperados en
la prueba de catalasa, por lo que probablemente realizamos una mala inoculación de la
bacteria.
Se analizará la prueba de catalasa como una prueba positiva, ya que para bacillus debió
de experimentar burbujeo en la prueba.
pruebas bioquímicas resultado
almidón positivo
KCN negativo
NO3 positivo
7.5 NaCl positivo
MR-VP negativo
SIM negativo
MIO negativo
glucosa negativo
glucosa y aceite negativo
catalasa positivo
TSI negativo
citrato negativo
gelatina nutritiva negativo
LIA negativo
oxidasa negativo
Tabla 1.1 resultados de pruebas bioquímicas
d.- Con los resultados obtenidos, realiza una identificación de las bacterias con ayuda
de las tablas de Cowan y Steel.
Al ser una bacteria Gram positiva utilizamos la tabla siguiente y se determino que nuestra
bacteria era bacillus.
3. Discusión:
a.- Argumenta los resultados obtenidos de acuerdo a lo abordado en la sesión de
discusión en el laboratorio.
pruebas Argumento del resultado
bioquímicas
KCN negativo
NO3 Al tener la presencia de ácido sulfilico y a-naftilamida obtuvimos un color
rojo en el medio el cual nos indica un resultado positivo ya que se obtuvo
un color rojo en el medio lo que nos dice que nuestra bacteria utiliza el
oxígeno del nitrato y el oxigeno actúa como aceptor de hidrógenos
reduciendo a si el NO3 a NO2 y posteriormente el NO2 a gases como lo
son en NH3 y N2
7.5 NaCl De acuerdo con nuestro resultado en el cual obtuvimos turbidez en nuestro
medio obtuvimos que la bacteria es halófila debido a que tiene adaptaciones
fisiológicas en la que la bacteria retiene el agua sin importar la
concentración osmótica.
MR-VP Bacillus no es capaz de producir acetoina en el medio ya que al no0
fermentar la glucosa, la acetoina no es producida, la cual es el resultado del
metabolismo
SIM No se observo movilidad en el medio, además de que el medio permaneció
de color amarillo transparentoso.
MIO Se obtuvo un resultado negativo en la descarboxilación de la ornitina,
además de que al agregar el reactivo de kovacs este no presento un aro
rojo en el medio, por lo que ambas pruebas fueron negativas
O/f Nuestro medio permaneció del mismo color verde, el cual nos indica que la
bacteria no es capaz de oxidar ni fermentar.
catalasa El peróxido de hidrogeno es un producto final oxidativo en la degradación
aerobi9a de azucares, la flavoproteína reducida reacciona con el oxigeno
gaseoso para la formación de H2O2 .las catalasas ,peroxidasas eliminan
de forma catalica la reducción de oxigeno. En este caso observamos
burbujeo al agregar peróxido de hidrogeno,el cual nos indica la formación
de O2
TSI Obtuvimos un resultado negativo ya que se presenta un color rojo en el
medio, lo cual nos indica que es una bacteria no fermentadora de algún tipo
de azúcar esto es debido a que las bacterias no pueden obtener sus
nutrientes a partir de los hidratos de carbono.
malonato Se obtuvo una prueba negativa ya que bacillus no es capaz de utilizar el
malonato como fuente de C y por ende no tiene nutrientes para realizar su
metabolismo, inhibiendo el ciclo de kreps y ocasionando la muerte celular.
Caldo rojo de No es capaz de utilizar la glucosa para la formación de ácidos y por ende
metilo nuestro medio nos da un color amarillo
LIA El medio lia no indica ningún tipo de reacción, ya sea la descarboxilación
de la Lisina desaminación de la lisina o la producción de sulfuro de hierro
por lo que nuestro resultado es negativo y nos da un color amarillo nuestro
medio.
urea Resultado negativo ya que nacillus no produce enzimas que hidrolizen a la
urea para la producción de carbonato de amonio y por ende nuestro medio
sigue teniendo el mismo color
Placa de agar sangre, aislamiento por estria cruzada.
En agar sangre determinamos que bacillus es una bacteria
B-hemolítica ya que el medio presentaba transparencia el
cual es causado por la destrucción de los glóbulos rojos
causadas por la hemolisina la cual es generada por la
bacteria. Alrededor se observa un halo transparente y claro.
Agar almidón
En la prueba de almidón al agregar Lugol de igual manera
observamos un halo transparente en el cual el yodo reacciona
con el almidón hidrolizado. (capacidad de la bacteria de
secretar la enzima amilasa)
En la imagen podemos observar la capacidad de hidrolisis del
almidon.
d.- Importancia de realizar pruebas bioquímicas, no sólo en la identificación de
microorganismos.
Las pruebas bioquímicas nos pueden ayudar a identificar mecanismos de resistencia a
antibióticos.
• Nos ayudan a seleccionar microorganismos para la producción de un producto de
interés
• Nos ayudan a comprender el metabolismo bacteriológico
• Degradación de contaminantes
• Evaluación de fármacos
[Link] el cuestionario de la práctica.
Llenar los siguientes cuadros y con la ayuda de la bibliografía en la información
obtenida durante el desarrollo de la práctica menciona el género y si es posible la
especie del microorganismo
nombre del microorganismo: bacillus
explica el significado de la presencia ausencia de un halo claro, al agregar el Lugol ,en
las pruebas de hidrólisis de almidón
Nos indica la presencia de enzimas amilo líticas las cuales son capaces de hidrolizar el
almidón una vez que agregamos el Lugol a la placa en la gran mayoría se va a teñir de
color café pero al tener el almidón hidrolizado se formará un Halo de color transparente
alrededor de la colonia además de que la bacteria posee enzimas capaces de romper
los enlaces glucosídico de almidón convirtiéndolo en azúcar más simples que pueden
ser utilizadas como fuente de carbono y energía.
Explica por qué en las pruebas de fermentación de azúcares en tubos con campana
de Durham se emplea un indicador de PH cuál es el indicador y cuál es su intervalo
de sensibilidad
El indicador de ph utilizado es el rojo de fenol el cual vira al color amarillo en medio ácido
lo que permite detectar la producción de ácidos por parte del microorganismo.
El intervalo de sensibilidad del rojo de fenol es de 6.8 y 8.
¿Qué otros azúcares se pueden utilizar en la fermentación de azúcares?
Lactosa,xilosa,manosa y arabiosa
¿Cuál es el indicador de ph que se emplea en las pruebas de utilización de sales
orgánicas y cuál es su intervalo de sensibilidad?
se emplea el rojo de fenol como indicador de ph este indicador cambia de color en función
del ph en el que su sensibilidad está por encima de 7.6 y vibra a un color azul.
5. Elabora tus conclusiones con base a los objetivos y resultados obtenidos, recuerda
que éstas deben ser puntuales.
Se identificaron bacillus como posible patógeno encontrado por las pruebas bioquímicas
realizadas ya que comparten características similares con nuestros microorganismos
analizados. La prueba de catalasa fue crucial para la identificación del microorganismo
dándonos como prueba positiva. Las pruebas bioquímicas son de suma importancia ya
que nos ayudan a identificar el tipo de metabolismo que se está llevando a cabo en la
célula y de esta manera poder observar si nuestra bacteria puede fermentar u oxidar los
componentes del medio además utilizar como nutrientes diferentes tipos de fuentes de
energía y transformarlas durante su metabolismo. Todo lo anterior se llevó a cabo para
identificar la presencia de en de actividad enzimática por parte de nuestra batería que en
este caso nuestra conclusión fue que teníamos a bacillus.
6. Anota las referencias bibliográficas en formato APA, al menos tres referencias.
• MacFaddin, J. F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica. Ed. Médica Panamericana.
• Moreno, L., Crespo, S., Pérez, W., & Melgarejo, L. M. (2010). Pruebas bioquímicas
como herramientas para estudios en fisiología. Experimentos en Fisiología
Vegetal; Melgarejo, LM, Ed.; Universidad Nacional de Colombia: Bogotá,
Colombia, 187-248.
• Romero, E., Melendres, K. P., & Polo, L. Á. T. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.