Descomposición catalizada del peróxido de hidrógeno

Jessica Carolina Garcı́a Chaparro

Universidad Nacional de Colombia

Resumen
En este trabajo se estudió la cinética de la descomposición catalı́tica del peróxido de hidrógeno (H2 O2 ) utilizando
catalasa extraı́da de papa criolla como catalizador. Se evaluaron cinco concentraciones diferentes de H2 O2 (0.18 %,
0.36 %, 0.91 %, 1.8 % y 2.7 % v/v) manteniendo constante la cantidad de enzima. La progresión de la reacción se
monitoreó mediante el seguimiento de la presión generada por el oxı́geno liberado durante 1000 segundos. Los
resultados mostraron un comportamiento cualitativo consistente con el modelo de Michaelis-Menten, evidenciando
una relación inicial casi lineal entre la velocidad de reacción y la concentración de sustrato a bajas concentraciones,
y una tendencia a la saturación a concentraciones más altas. Si bien el comportamiento general se ajusta al modelo
teórico, las limitaciones en el número de puntos experimentales y la naturaleza del extracto enzimático crudo no
permitieron una determinación cuantitativa confiable de los parámetros cinéticos (Vmáx y Km ).
Palabras clave: cinética enzimática, catalasa, peróxido de hidrógeno, Michaelis-Menten, descomposición catalı́tica

1. Introducción enzima y su sustrato. Predijo y explicó la velocidad de

reacción, es decir, la cantidad de sustrato que reacciona
1.1. Cinética enzimática con la enzima por unidad de tiempo, ası́ como los factores
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reac- que estimulan o inhiben dicha velocidad de reacción.
ciones catalizadas por enzimas, proporcionando informa- Demostró que las sucesivas adiciones de sustrato al medio
ción del mecanismo de reacción y de la especificidad de de la reacción provocan un abrupto incremento de la
la enzima. La cinética permite estudiar el efecto de la velocidad de reacción hasta un cierto punto en el que la
concentración inicial de sustrato [S0 ] sobre la velocidad enzima se satura y la adición posterior de sustrato ya no
inicial de la reacción, manteniendo la concentración de afecta a la velocidad; Nicolás y Carmona (2015)
la enzima constante. Cuando S0 es pequeña, la velocidad
inicial es directamente proporcional a la concentración La reacción catalizada por una enzima (E) y un sustrato
de sustrato, y por tanto, la cinética es de primer orden. (S) se puede representar como:
Cuando S0 es alta, la enzima se satura de sustrato, y la k1 k
velocidad ya no depende de S0 , pasando a cinética de E + S ⇌ ES →2 E + P
k−1
orden cero y siendo la velocidad igual a la Vmax . Serrate
(2020) Donde:
E: Enzima
1.1.1. La ecuación de Michaelis-Menten
La ecuación de Michaelis-Menten es capaz de describir S: Sustrato
el cambio sufrido por la velocidad de una reacción
ES: Complejo enzima-sustrato
catalizada por una enzima al variar la concentración del
sustrato. La reacción que se establece entre la enzima y P : Producto
su sustrato va precedida de la formación de un complejo,
hipótesis que no pudo comprobarse experimentalmente k1 : Constante de velocidad de formación del complejo
hasta cincuenta años después del establecimiento de ES
la ecuación gracias a la aplicación de las técnicas k−1 : Constante de velocidad de disociación del com-
espectroscópicas. plejo ES
Michaelis determinó la denominada constante de k2 : Constante de velocidad de formación del producto
Michaelis (Km ) que establece la afinidad entre una a partir del complejo ES

Preprint submitted to Laboratorio de Fisicoquı́mica II 22 de febrero de 2025

 Se asume que la concentración del complejo ES per- 1.3. Peróxido de hidrógeno
manece constante en el tiempo (estado estacionario), es El peróxido de hidrógeno (H2 O2 ) es una molécula po-
decir, la tasa de formación de ES es igual a la tasa de su lar cuyas propiedades difieren significativamente de las
descomposición: del agua. Aunque es relativamente estable a temperatura
ambiente, se descompone fácilmente en oxı́geno y agua me-
d[ES] diante calentamiento o exposición a la luz solar. Además,
= k1 [E][S] − (k−1 + k2 )[ES] = 0
dt diversas sustancias pueden actuar como catalizadores de
La velocidad inicial de la reacción (v) depende de la su descomposición Muñoz y Torres (2011).
formación del producto, que está determinada por la
concentración de ES: 1.4. Descomposición catalı́tica del H2 O2
La descomposición catalı́tica del peróxido de hidrógeno
v = k2 [ES] es un proceso clave que permite su uso como agente
desinfectante. Durante esta reacción, el oxı́geno liberado
Utilizando la suposición de estado estacionario, se puede oxida y elimina microorganismos, lo que resulta en su
expresar [ES] en función de [Etotal ] y [S]: efectividad como desinfectante. Sin embargo, la eficacia
de este proceso depende en gran medida de la velocidad
[Etotal ][S] de descomposición Muñoz y Torres (2011).
[ES] =
Km + [S]
1.4.1. Catalasa como catalizador
Donde Km es la constante de Michaelis-Menten, defini- Las enzimas son proteı́nas especializadas en catalizar
da como: reacciones biológicas, aumentando la velocidad con la que
se alcanza el equilibrio de la reacción. Este incremento
k−1 + k2 en la velocidad se debe a la reducción de la energı́a libre
Km =
k1 de activación requerida para transformar el sustrato en
el producto correspondiente, sin afectar la constante de
Sustituyendo [ES] en la expresión de la velocidad, se equilibrio Cedillo Jiménez y Hernández López (2011).
obtiene la ecuación de Michaelis-Menten: La catalasa es una enzima presente en organismos vivos
que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno
Vmáx · [S] dP −dS (H2 O2 ) en oxı́geno y agua. Dado que el peróxido de
v= = =
Km + [S] dt dt hidrógeno es un subproducto tóxico del metabolismo
celular, su rápida transformación en compuestos menos
Donde Vmáx = k2 [Etotal ] es la velocidad máxima de
peligrosos es esencial. La catalasa cumple esta función al
la reacción cuando la enzima está saturada de sustrato.
acelerar su descomposición en agua y oxı́geno.
Nicolás y Carmona (2015)
El mecanismo de acción de la catalasa implica la escisión
heterolı́tica del enlace O-O del peróxido de hidrógeno. Los
1.2. Lineweaver-Burk sitios activos de esta enzima contienen cadenas laterales de
aminoácidos que facilitan la separación de cargas durante
La representación gráfica de Lineweaver-Burk permi- la escisión heterolı́tica Bertini et al. (1994).
te identificar la Km (constante de Michaelis-Menten) y La reacción catalı́tica ocurre en dos etapas. En la pri-
Vmax (velocidad máxima); el punto de corte con el eje de mera, una molécula de peróxido de hidrógeno oxida el
ordenadas es el equivalente a la inversa de Vmax , y el de grupo hemo, generando una especie de oxiferrilo y un
abscisas es el valor de –1/ Km ası́ de fácil. Es cierto que radical catiónico de porfirina (reacción 1). En la segunda
la representación de Lineweaver-Burk presenta algunos etapa, una segunda molécula de peróxido de hidrógeno
inconvenientes ya que, al requerir de dobles inversos, pe- reacciona con el compuesto I (Enz(Por+∗ − FeIV = O))
queños errores experimentales pueden conducir a grandes para regenerar la enzima en su estado de reposo, liberando
errores. Además, el hecho de que a altas concentraciones agua y oxı́geno (reacción 2). Milek (2018)
los puntos se aglutinen al principio de la gráfica puede
dar lugar a cálculos erróneos. Sin embargo, si los expe-
rimentos se plantean correctamente desde el punto de Enz(Por−FeIII )+H2 O2 −→ H2 O+Enz(Por+∗ −FeIV = O)
vista metodológico, los resultados son totalmente fiables. (2)
Nicolás y Carmona (2015)

1 Km 1 Enz(Por+∗ −FeIV = O)+H2 O2 −→ H2 O+O2 +Enz(Por−FeIII )

= + (1) (3)
v Vmáx [S] Vmáx

2
2. Metodologı́a

Se llevó a cabo el montaje experimental mostrado en

la Figura 1 con el objetivo de evaluar la descomposición
del peróxido de hidrógeno en función de su concentración,
utilizando una cantidad fija de catalasa. Para ello, se
empleó zumo de papa criolla como fuente de la enzima.
Los detalles especı́ficos de los reactivos y las condiciones
experimentales se presentan en la Tabla 1.
Una vez preparado el montaje para cada solución, se mi-
dió la presión durante 1000 segundos, registrando datos
cada 10 segundos. Este procedimiento permitió monito-
rear la variación de la presión en función del tiempo, lo
que está directamente relacionado con la descomposición
del peróxido de hidrógeno y la liberación de oxı́geno. A
partir de estos datos, se estimaron las velocidades inicia-
les de descomposición del peróxido de hidrógeno, lo que Gráfico 2. Variación de la presión a través del tiempo en cada
variación experimental H2 O2 .
permitió realizar un análisis cinético basado en el modelo
de Michaelis-Menten.
se obtuvieron a partir de las pendientes de los tramos
iniciales de las curvas de presión en función del tiempo,
las cuales presentan un buen ajuste lineal. Los resultados
obtenidos se presentan en los gráficos 3-7.

Figura 1. Montaje utilizado para evaluar la descomposición de

H2 O2 .

H2 O2 (mL) H2 O (mL) Catalasa (mL) [H2 O2 ] ( % v/v)

10 10 2 1.8
5 15 2 0.91
15 5 2 2.7
2 18 2 0.36
1 19 2 0.18
Tabla 1. Volúmenes de reactivos utilizados en cada variación del
experimento y concentración de H2 O2 en %v/v.
Gráfico 3. Velocidad inicial de descomposición del peróxido de
hidrógeno al 1,8 %.

3. Datos experimentales Posteriormente estas velocidades iniciales se grafican

vs la concentración, para observar como es su relación
Con base en las variaciones del experimento planteadas obteniendo el Gráfico 8
en la tabla 1 se obtuvieron los datos de variación de la
presión a través del tiempo del Gráfico 2
5. Análisis de resultados

4. Resultados El análisis de la descomposición catalı́tica del peróxido

de hidrógeno mediada por catalasa reveló un comporta-
Se analizaron los experimentos realizados con distintas miento caracterı́stico que se ajusta al modelo cinético de
concentraciones de peróxido de hidrógeno (sustrato) para Michaelis-MentenNicolás y Carmona (2015). Este compor-
determinar las velocidades iniciales de reacción en pre- tamiento se refleja en distintos aspectos de los resultados
sencia de una cantidad fija de catalasa. Estas velocidades experimentales.

3
Gráfico 4. Velocidad inicial de descomposición del peróxido de Gráfico 6. Velocidad inicial de descomposición del peróxido de
hidrógeno al 0,91 %. hidrógeno al 0,36 %.

Gráfico 5. Velocidad inicial de descomposición del peróxido de Gráfico 7. Velocidad inicial de descomposición del peróxido de
hidrógeno al 2,7 %. hidrógeno al 0,18 %.

5.2. Análisis de Velocidades Iniciales

5.1. Comportamiento Cinético
Los gráficos de presión versus tiempo para cada concen-
tración (Gráficos 3-7) muestran una excelente linealidad
La relación entre la velocidad inicial y la concentración en sus tramos iniciales, lo que valida la metodologı́a em-
del sustrato (Gráfico 8) exhibe el patrón caracterı́stico de pleada para la determinación de velocidades iniciales.
la cinética enzimática Serrate (2020), donde se identifican Este comportamiento es consistente con el mecanismo de
dos regı́menes diferenciados: dos etapas Milek (2018), donde la formación del complejo
enzima-sustrato es seguida por la liberación de productos.
A bajas concentraciones (0.18 % y 0.36 % v/v), la
velocidad de reacción muestra una dependencia apro- 5.3. Parámetros cinéticos
ximadamente lineal con la concentración del sustrato, Si bien los datos experimentales obtenidos muestran
indicando una cinética de primer orden. una tendencia cualitativamente ajustada al modelo de
Michaelis-Menten, como se evidencia en la curva hiperbóli-
A concentraciones más elevadas (1.8 % y 2.7 % v/v), ca de velocidad inicial versus concentración de sustrato
se observa una tendencia hacia la saturación, ca- (Gráfico 8), la determinación cuantitativa de los paráme-
racterı́stica de la cinética de orden cero, donde la tros cinéticos mediante linearización no resulta adecuada
velocidad se aproxima a Vmáx . en este caso. Esta limitación se debe a varios factores:

4
 Una relación directa entre la presión final alcanza-
da y la concentración inicial de H2 O2 , lo cual es
coherente con la estequiometrı́a de la reacción de
descomposición.

5.5. Implicaciones Mecanı́sticas

Los resultados obtenidos son consistentes con el meca-
nismo de escisión heterolı́tica del enlace O-O Bertini et al.
(1994). La liberación progresiva de oxı́geno, evidenciada
por el aumento de presión, confirma la efectividad del
proceso catalı́tico y su importancia en la descomposición
del H2 O2 .

5.6. Consideraciones Experimentales

La utilización de zumo de papa criolla como fuente
Gráfico 8. Velocidades iniciales vs concentración.
de catalasa introduce variables adicionales que podrı́an
afectar la reproducibilidad del experimento, incluyendo:

Variabilidad en la concentración enzimática entre

El número reducido de concentraciones evaluadas
diferentes muestras de papa.
(cinco puntos experimentales) resulta insuficiente pa-
ra establecer una correlación estadı́sticamente sig- Presencia de otros componentes celulares que podrı́an
nificativa en la transformación de Lineweaver-Burk, interferir en la reacción.
donde se requieren tı́picamente entre 8 y 10 puntos
experimentales con sus respectivas réplicas Serrate Potencial inactivación enzimática durante el proceso
(2020). de extracción y experimentación.

La transformación de los datos a la forma linearizada 6. Conclusiones

(1/v vs. 1/[S]) amplifica los errores experimentales,
especialmente en las concentraciones más bajas de 1. Se verificó cualitativamente que la descomposición
sustrato, como señalan Nicolás y Carmona (2015). del H2 O2 catalizada por la enzima presente en el
extracto de papa criolla sigue el modelo cinético
El uso de extracto crudo de papa como fuente de ca- de Michaelis-Menten, evidenciado por el comporta-
talasa introduce variables no controladas que podrı́an miento hiperbólico observado en la relación entre
afectar la actividad enzimática, como la presencia de velocidad inicial y concentración de sustrato.
otros componentes celulares o la posible inactivación 2. El método experimental de seguimiento de la presión
parcial de la enzima durante el proceso experimental generada por el O2 resultó efectivo para monitorear
Cedillo Jiménez y Hernández López (2011). el progreso de la reacción, permitiendo obtener datos
consistentes y reproducibles para las diferentes con-
Por tanto, aunque se puede confirmar cualitativamente centraciones de sustrato evaluadas (0.18 % a 2.7 %
el comportamiento michaeliano de la reacción, la deter- v/v).
minación precisa de Vmáx y Km requerirı́a un diseño 3. Se observó una clara dependencia entre la velocidad
experimental más exhaustivo, con un mayor número de inicial de reacción y la concentración de sustrato, con
puntos experimentales y condiciones más controladas. una tendencia hacia la saturación a concentraciones
más altas, caracterı́stico de los sistemas enzimáticos.
5.4. Progresión de la Reacción 4. La utilización de extracto crudo de papa criolla como
El seguimiento de la presión generada (Gráfico 2) per- fuente de catalasa, si bien es una alternativa práctica
mite observar: y accesible, introduce variables no controladas que
pueden afectar la precisión en la determinación de
Un incremento inicial rápido en la presión, consis- los parámetros cinéticos.
tente con la alta actividad catalı́tica de la enzima 5. El número limitado de concentraciones evaluadas
Cedillo Jiménez y Hernández López (2011). (cinco puntos experimentales) resultó insuficiente pa-
ra realizar una determinación cuantitativa confiable
Una desaceleración gradual, que sugiere el agotamien- de los parámetros cinéticos Vmáx y Km mediante
to del sustrato o la posible desactivación enzimática. métodos de linearización.

5
Referencias Muñoz, M. L. A. y Torres, C. D. (2011). Quı́mica re-
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