PRUEBAS TREPONÉMICAS Y NO TREPONÉMICAS

PARA SÍFILIS

Realizado por:

- Pita Altamirano Lyndsey Nayely

- Rivas Arévalo Marjhuri Lisdey
 ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN...................................................................................................3

II. OBJETIVOS............................................................................................................3

2.1. Objetivo general................................................................................................3

2.2. Objetivos específicos.........................................................................................3

III. MARCO TEÓRICO.............................................................................................4

3.1. ¿Qué es la sífilis?...............................................................................................4

3.2. Manifestaciones clínicas...................................................................................4

3.2.1. Sífilis primaria...........................................................................................4

3.2.2. Sífilis secundaria........................................................................................5

3.2.3. Sífilis tardía o terciaria..............................................................................5

3.2.4. Sífilis congénita..........................................................................................5

3.3. Prueba rápida OnSite Sífilis Ab Combo.........................................................6

3.4. Pruebas treponémicas.......................................................................................8

3.4.1. FTA-ABS (Absorción de Anticuerpos Fluorescentes de Treponemas) 8

3.4.2. TPHA (Hemaglutinación de Treponema pallidum)..............................10

3.4.3. ELISA.......................................................................................................12

3.4.4. Western-Blot.............................................................................................14

3.5. Pruebas no treponémicas................................................................................16

3.5.1. VDRL (Laboratorio de Investigación de Enfermedades Venéreas). . .16

3.5.2. RPR (Reagina Plasmática Rápida)........................................................17

IV. CONCLUSIONES...............................................................................................19

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.................................................................20

2
 I. INTRODUCCIÓN

La sífilis es una infección de transmisión sexual (ITS) causada por la bacteria Treponema
pallidum, conocida por generar una significativa carga de morbilidad y mortalidad a
nivel global. A pesar de los avances en su diagnóstico y tratamiento, la enfermedad
sigue siendo un desafío de salud pública, especialmente en contextos donde los recursos
para la detección temprana y el manejo adecuado son limitados. Su impacto no solo se
restringe a los individuos afectados, sino que también tiene repercusiones en la salud
materno- infantil a través de la sífilis congénita.

El cuadro clínico de la sífilis es diverso y complejo, a partir de la aparición de lesiones

ulcerativas indoloras en su fase primaria hasta complicaciones severas en etapas
avanzadas como la sífilis terciaria. Este informe se centra en analizar las
manifestaciones clínicas y los métodos de diagnóstico disponibles para esta enfermedad,
destacando tanto las pruebas treponémicas como las no treponémicas.

El diagnóstico de la sífilis requiere precisión y sensibilidad, ya que muchas de sus

manifestaciones clínicas pueden ser inespecíficas. Por ello, las pruebas de laboratorio,
como el VDRL, el RPR y las técnicas treponémicas como FTA-ABS o Western-Blot,
juegan un papel importante en su detección y monitoreo. Este informe detalla los
procedimientos e interpretación de resultados de estas pruebas, destacando su
importancia en la prevención de complicaciones graves.

II. OBJETIVOS
2.1. Objetivo general

Analizar los métodos de diagnóstico empleados para la detección de la sífilis, con el fin de
destacar su relevancia en el diagnóstico y manejo oportuno de esta enfermedad.

2.2. Objetivos específicos

- Describir las manifestaciones clínicas de la sífilis en sus diferentes etapas
primaria, secundaria y terciaria.
- Identificar los principios, procedimientos e interpretación de las pruebas
treponémicas y no treponémicas.

3
III. MARCO TEÓRICO
3.1. ¿Qué es la sífilis?

La sífilis es una infección bacteriana causada por Treponema pallidum que da lugar a
una morbilidad y mortalidad sustanciales. Se trata de una infección de transmisión
sexual (ITS) que se transmite entre humanos mediante el contacto de úlceras
infecciosas presentes en los genitales, el ano, los labios o la boca. También se
puede transmitir de la madre al bebé durante el embarazo (sífilis congénita)(1).

3.2. Manifestaciones clínicas

3.2.1. Sífilis primaria

Después de un período de incubación de entre 3 y 4 semanas (intervalo entre 1 y 13

semanas), aparece una lesión primaria (chancro) en el sitio de la inoculación. La
pápula eritematosa inicial se convierte en un chancro, que en general está
constituido por una úlcera indolora con base firme que, cuando se fricciona,
produce un líquido transparente con gran cantidad de espiroquetas(2).

Los chancros pueden localizarse en cualquier parte del cuerpo, pero son más
frecuentes en las siguientes áreas:

 Pene, ano y recto en los hombres

 Vulva, cuello uterino y periné en las mujeres
 Labios o boca

4
3.2.2. Sífilis secundaria

En esta etapa se producen lesiones mucocutáneas generalizadas, hinchazón en los

ganglios linfáticos y con menor frecuencia. Los síntomas típicos aparecen entre 6
y 12 semanas después de la identificación del chancro, a menudo el paciente
presenta fiebre, náuseas, anorexia y cansancio. También pueden presentarse dolor
de cabeza, perdida de la audición, problemas de equilibrio y trastornos
visuales(2).

3.2.3. Sífilis tardía o terciaria

La sífilis terciaria benigna gomosa suele aparecer dentro de los 3 a los 10 años
siguientes a la infección y puede afectar la piel, los huesos y los órganos internos.
Los gomas son tumores blandos, inflamatorios y destructivos que se localizan en
áreas características, aunque pueden invadir órganos o tejidos en forma
generalizada. Crecen y se curan lentamente y dejan cicatrices. Una tercera parte
de los pacientes no tratados presenta sífilis tardía(2).

La lesiones se pueden clasificar en términos clínicos como:

 Sífilis terciaria benigna

 Sífilis cardiovascular
 Neurosífilis
3.2.4. Sífilis congénita

La sífilis congénita es una infección multisistémica causada por el

germen Treponema pallidum y transmitida al feto a través de la placenta. Los
signos tempranos son lesiones cutáneas características, linfadenopatías, retraso de
crecimiento, secreción nasal sanguinolenta, fisuras peribucales, hidrocefalia,
convulsiones, discapacidad intelectual, pseudoparálisis (atrofia de Parrot del
recién nacido), entre otros. Los signos más tardíos consisten en úlceras gomosas,
5
paresia,

6
 atrofia óptica, queratitis intersticial, sordera neurosensorial y malformaciones
dentales(3).

3.3. Prueba rápida OnSite Sífilis Ab Combo

La Prueba Rápida OnSite Syphilis Ab Combo es desarrollada para la detección de

los anticuerpos (IgM, IgG e IgA) contra los antígenos recombinantes de Tp en
suero, plasma o sangre total humana.

Es un inmunoensayo de cromatografía de flujo lateral. La prueba de casete consiste

en:

1. Una almohadilla que contiene el conjugado coloreado con los antígenos

recombinantes de Tp (47, 17 y 15 KDa) con oro coloidal (conjugado Tp) y
un control de anticuerpo conjugado con oro coloidal.
2. Una membrana de nitrocelulosa que contiene una línea de prueba (línea T),
y una línea de control (línea C). La línea T es revestida previamente con
antígenos recombinantes no conjugados de Tp, y la línea C está pre-
recubierta con un control de anticuerpo.

Cuando un volumen adecuado de muestra es dispensado en el pozo de muestra del

casete, la muestra migra por acción capilar a través del casete. Los anticuerpos
Anti- Tp si están presentes en la muestra se unirán con el conjugado Tp. El
inmunocomplejo es entonces capturado en la membrana recubierta por el antígeno
Tp, formando la línea T coloreada, indicando anticuerpos Tp positivos en el
resultado de la prueba. La ausencia de la formación de la línea T sugiere un
resultado negativo.

 Materiales y reactivos
- Un dispositivo de casete
- Un diluyente de muestra (REF SB-R0031, 5 mL/botella)

7
- Control Positivo

8
 - Control Negativo
 Muestra
- Suero, plasma o sangre total
 Procedimiento
- Abra el paquete y saque el dispositivo. Colóquelo sobre una superficie
limpia y plana.
- Asegúrese de marcar el dispositivo con la identificación del paciente.
- Llene la pipeta con la muestra.
- En posición vertical, agregue 1 gota (30-45 µL) de muestra o 1 gota de
sangre total (40-50 µL) dentro del pozo de muestra. Asegurándose de que
no haya burbujas de aire.
- Inmediatamente agregue 1 gota (35-50 µL) de diluyente de muestra con
la botella en posición vertical.
- Leer los resultados a los 15 minutos.

 Interpretación de resultados
- RESULTADO NEGATIVO: Si solo se desarrolla color en la línea C, la
prueba indica que no hay anticuerpos detectables de anti-Tp presentes en
la muestra.

- RESULTADO POSITIVO: Ambas líneas C y T desarrollan color, la

prueba indica la presencia de anticuerpos anti-Tp en la muestra.

9
 - RESULTADO INVALIDO: Si la línea C no se colorea, el ensayo se
considera inválido a pesar de que las otras líneas se tiñan. Se debe
realizar nuevamente la prueba en otro casete.

3.4. Pruebas treponémicas

Las pruebas treponémicas detectan los anticuerpos anti-treponémicos en términos

cualitativos y son muy específicas para detectar sífilis.

3.4.1. FTA-ABS (Absorción de Anticuerpos Fluorescentes de Treponemas)

El sistema de pruebas FTA-ABS está diseñada para la determinación cualitativa de

anticuerpos contra Treponema pallidum. Se utiliza para confirmar los resultados
positivos de las pruebas no treponémicas de detección de reagina para la sífilis.

La reacción sucede en dos pasos:

1. Paso uno; las células del sustrato se hacen reaccionar con sueros de
pacientes tratados especialmente en el primer paso. Si el suero del paciente
contiene anticuerpos treponémicos, se produce una reacción antígeno-
anticuerpo entre las células del sustrato y los anticuerpos anti-treponémicos
circulantes en el suero del paciente.
2. Paso dos; se añade antiinmunoglobulina humana de cabra marcada con
isotiocianato de fluoresceína (FITC) a las células del sustrato T. pallidum.
Las células de sustrato se examinan con un microscopio de fluorescencia.
La intensidad de la tinción se clasifica en una escala de 1+ a 4+ o como
negativo (ausencia de fluorescencia)(5).
 Materiales y reactivos
- Control positivo
- Control negativo
- Dilución
- Buffer solución salina tamponada con fosfato (PBS)
- Medio de montaje (glicerol tamponado)
- Agua destilada

10
 Muestra
- Suero
 Procedimiento
- Caliente todos los sueros de prueba y los controles durante 30 minutos en
un baño de agua ajustado a 56 °C antes de la prueba.
- Diluya los controles reactivo y no específico 1:5 en PBS y absorbente
(por ejemplo: 50 µl de suero + 200 µl de absorbente o PBS). Prepare el
control mínimamente reactivo 1+ directamente desde la alícuota de
control reactivo calentada. El factor de dilución recomendado aparece
indicado en el vial de control reactivo.

La dilución se realiza en PBS:

Ejemplo:

1+ = 1:400 o 1+ = 1 parte de suero reactivo + 399 partes de PBS, o

100 µl de suero + 39,9 ml PBS = dilución 1:400

Esto representaría el control mínimamente reactivo 1+.

- Preparar diluciones 1:5 de todas las muestras de prueba en

absorbente. Añada 200 μl de absorbente a los tubos debidamente
etiquetados. Añada 50 μl de muestra de suero desactivada por calor.
Mezcle bien.
- Reserve 2 pocillos en el portaobjetos de control. Uno para el control de
absorbente, el otro para el control de PBS (conjugado).
- Añada 10 μl de los sueros de prueba y de control a cada pocillo del
portaobjetos de sustrato debidamente identificado. Incluya 10 μl de
absorbente y 10 μl de PBS en los pocillos respectivos.
- Incube a 35 - 37 °C durante 30 minutos.
- Enjuague brevemente los portaobjetos con PBS. Para obtener los mejores
resultados, se aconseja que incline ligeramente el portaobjetos e inunde
los múltiples pocillos con un chorro de PBS dirigido entre las filas
superior e inferior del portaobjetos. Incline el portaobjetos en la dirección
opuesta y repita el enjuague. La posición escalonada de los pocillos de
prueba reduce al mínimo la posible contaminación cruzada (consulte la
sección Precauciones).
11
 - Lave los portaobjetos durante dos intervalos de 5 minutos, cambiando el
PBS entre lavados.
- Enjuague los portaobjetos durante 5 - 10 segundos con un chorro suave
de agua destilada como en el paso 8, y déjelos secar al aire. Los
portaobjetos deben estar completamente secos antes de añadir el
conjugado.
- Agregue 10 µl de conjugado en cada pocillo.
- Repita los pasos 7 a 10.
- Añada una pequeña cantidad (4 - 5 gotas) de medio de montaje entre las
dos filas de pocillos desplazados y coloque el cubreobjetos.
- Lea los portaobjetos en la oscuridad con un microscopio de fluorescencia
correctamente montado.
- Estudie cada pocillo al microscopio con un objetivo de gran aumento
(seco fuerte). Se ha observado que la combinación de un filtro de
excitación BG12 (grosor no > 3 mm), más un filtro de barrera OG1, o su
equivalente, resulta satisfactoria para su uso rutinario.
- Compruebe los frotis no reactivos bajo una iluminación de campo oscuro
de luz blanca con el fin de verificar la presencia de treponemas, o
alternativamente, valore el uso del sistema de pruebas FTA-ABS.
- Utilizando el control mínimamente reactivo 1+, así como el estándar de
lectura, registre la intensidad de fluorescencia de las treponemas en todos
los pocillos de control y de paciente desconocidos, según la tabla de
patrón de control que se incluye a continuación.
 Interpretación de resultados

Lectura inicial Lectura repetida

Informe
de la prueba de la prueba
4+, 3+, 2+ Reactivo (R)
>1+ Reactivo (R)
1+ 1+ Mínimamente reactivo (RM)
<1+ No reactivo (NR)
<1+ No reactivo (NR)
No± No reactivo (NR)

3.4.2. TPHA (Hemaglutinación de Treponema pallidum)

Es una prueba de hemoaglutinación indirecta en microplaca para la detección

cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos específicos anti-Treponema pallidum

12
en suero humano o plasma. Los hematíes de ave estabilizados y sensibilizados con

13
una solución antigénica de T. pallidum, aglutinan en presencia de anticuerpos anti-
T. pallidum mostrando unos patrones de aglutinación característicos(6).

 Materiales y reactivos
- R1: Células Test (TC)
- R2: Células control (CC)
- R3: Diluyente (DIL)
- Placas de microtitulación con fondo en “U”
- Pipetas de 25-75µL.
 Muestra
- Suero o plasma
 Procedimiento
- Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
- Preparar una dilución 1:20 de la muestra en Diluyente (10 µL suero +
190 µL Diluyente).
- Pipetear en pocillos adyacentes de una placa de microtitulación (Nota 1):

Muestra 1/20 (µL) 25 25

Células Control (µL) 75 ---
Células Test (µL) --- 75

- Agitar suavemente la placa hasta la completa homogenización de las

mezclas.
- Cubrir la placa e incubar a temperatura ambiente durante 45-60 min.
- Examinar macroscópicamente los patrones de aglutinación de las células.
 Lectura e interpretación
Grado de aglutinación Lectura Resultado
Capa de células lisas que recubre por completo el 4+ Reactivo
fondo del pocillo, algunas veces con los bordes
replegados
Capa de células cubriendo parte del fondo del 3+ Reactivo
pocillo
Capa de células rodeada por un círculo rojo 2+ Reactivo
Capa de células cubriendo menos área y rodeadas 1+ Reactivo
por un círculo rojo
Botón de células con un pequeño orificio en el ± Límite
centro
Botón compacto y definido de células, a veces con - Negativo
un pequeño orificio en el centro

14
3.4.3. ELISA

Los pocillos de la policubeta están recubiertos con antígenos recombinantes de la

bacteria Treponema pallidum (p15, p17 y p47). La muestra diluida se incuba en los
pocillos. Si los anticuerpos contra la bacteria están presentes en la muestra, éstos se
unen a los antígenos del pocillo. El material no unido es removido por lavado. En
el paso siguiente se agrega el conjugado, que consiste en un anticuerpo monoclonal
anti-IgG humana conjugado con peroxidasa. Este se une a los complejos antígeno-
anticuerpo, formados previamente. El conjugado no unido se remueve por lavado.
Posteriormente, se agrega una solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido
de hidrógeno. Las muestras reactivas desarrollan color celeste que vira al amarillo
cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico(7).

 Materiales y reactivos
- Policubeta sensibilizada
- Diluyente de Muestra
- Conjugado Concentrado
- Diluyente de Conjugado
- Revelador
- Stopper
- Buffer de Lavado Concentrado
- Control Positivo
- Control Negativo
- Micropipetas
- Material volumétrico
- Hipoclorito de sodio
 Muestra
- Suero o plasma
 Procedimiento
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras antes de
iniciar la prueba.
- Preparar el volumen necesario de buffer de lavado diluido.
- Colocar en el soporte de tiras, el número de pocillos requeridos para la
cantidad de determinaciones a realizar, incluyendo 2 pocillos para el
Control Positivo (CP) y 3 para el Control Negativo (CN).

15
- Dispensar el Diluyente de Muestra, luego la muestra (M) y los controles
según el siguiente esquema:
M CP CN
Diluyente de Muestra 100 µL 100 µL 100 µL
Control Positivo --- 20 µL ---
Control Negativo --- 20 µL
Muestra 20 µL --- ---

- Homogeneizar por carga y descarga de la micropipeta. Al adicionar la

muestra, el Diluyente de Muestra virará de color, de acuerdo a la tabla
siguiente:
Tipo de Sin Suero o CN CP
muestra muestra plasma
Color Violeta Celeste Verde Naranja

- Para evitar la evaporación, cubrir la placa con la cinta autoadhesiva

provista, e incubar 60 ± 2 minutos a 37o C ± 1ºC. En forma paralela,
preparar el conjugado diluido (ver Tabla en PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS).
- Después de la incubación eliminar el líquido de cada pocillo por
completo. Lavar 5 veces según instrucción de lavado (ver Procedimiento
de Lavado).
- Agregar el Conjugado:
Conjugado diluido 100 µL 100 µL 100 µL

Para evitar la evaporación cubrir la policubeta con cinta autoadhesiva.

- Incubar 30 ± 2 minutos a 37o C ± 1o C.
- Lavar 5 veces según instrucción de lavado.
- Dispensar el Revelador. Para ello, trasvasar a un recipiente limpio
solamente el volumen de Revelador que se requiera.
Revelador 100 µL 100 µL 100 µL

- Incubar 30 ± 2 minutos a temperatura ambiente (18- 25o C), protegido de

la luz.
- Agregar el Stopper:
Stopper 100 µL 100 µL 100 µL

16
 - Leer absorbancia en espectrofotómetro en forma bicromática a 450/620-
650 nm o a 450 nm.
 Interpretación de resultados
a) Con instrumental óptico:
La presencia o ausencia de anticuerpos anti-Treponema pallidum se
determina relacionando la absorbancia de la muestra respecto al valor del
Cut-off.
Cut-off = CN + 0,160
CN: promedio de las D.O. del Control Negativo
Ejemplo: 0,017 + 0,160 = 0,177
- Muestras No Reactivas: se consideran aquellas con absorbancias
menores al Cut-off
- Muestras Reactivas: se consideran aquellas con absorbancias mayores
o iguales al Cut-off.
b) Interpretación visual:
Si se opta por este tipo de interpretación, debe considerarse No Reactiva
toda muestra que no presente una coloración mayor que la de los
Controles Negativos. Por el contrario, una muestra netamente amarilla se
considera Reactiva.
3.4.4. Western-Blot

También denominado inmunoblot, es una técnica que detecta anticuerpos para

epítopes específicos en antígenos, previamente separados por electroforesis de alta
resolución. La electroforesis separa los componentes antigénicos por sus diferentes
pesos moleculares. Luego estos son transferidos a una membrana de nitrocelulosa
reteniendo su posición electroforética y reaccionan con el suero del paciente. Esta
técnica se utiliza para confirmar los anticuerpos detectados previamente por alguna
otra prueba serológica de despistaje(8).

 Materiales biológico y reactivos

COMPONENTE PRESENTACIÓN PREPARACIÓN

Listas para usar. Abrir la envoltura hasta
que se alcance la temperatura ambiente
Tiras blot Tiras individuales
para evitar que se humedezcan las tiras.
con antígenos de T. 16 x 1 24 x 1
Asegurarse que la designación del lote en
pallidum separados
el envase con las tiras blot y el de la
plantilla
de evaluación coincidan.

17
Plantilla de evaluación con
tiras blot de control Tiras de 1 1
---
ensayo incubadas con suero plantilla plantilla
de control positivo
Para una tira blot, diluir 0.15 ml del
Conjugado enzimático IgG o concentrado de IgG ó IgM antihumano en
IgM antihumana (cabra) 1.35 ml de solución tampón universal
1 x 3 ml 2 x 3 ml
marcada con fosfatasa diluida. El conjugado enzimático diluido
alcalina, concentrado 10x debe utilizarse el mismo día de su
preparación.
Para una tira de prueba, diluir 1.5 ml del
Tampón universal, 1 x 100 buffer concentrado con 13.5 ml de agua
1 x 50 ml
concentrado 10x ml destilada. El buffer diluido debe utilizarse
el mismo día de su preparación.
Solución sustrato Cloruro de
nitroazul de tetrazolio/5- Listas para usar. Cerrar el frasco
bromo-4-cloro-3- fosfato de 1 x 30 ml 1 x 50 ml inmediatamente después de utilizarse,
indolil (NBT/BCIP), lista debido a que la solución es sensible a la
para usarse luz.
- Control Positivo Anti-Treponema (Sífilis) Serie 5000. Almacenarse entre
2 a 8 °C. (Para IgG).
- Control Positivo IgM. Plasma Positivo para anticuerpos IgM sífilis.
Almacenarse a -20 °C. (Para IgM)
 Procedimiento
- Dejar que las muestras y los reactivos alcancen la temperatura ambiente
(entre 18 y 25 °C), aproximadamente 30 minutos antes de su uso.
- Preparar el tampón universal y el conjugado enzimático, conforme al
número de muestras a analizar.
- Homogeneizar las muestras y los controles con el agitador vórtex
- Preparación de Reactivos: Tampón universal 1:10 y Conjugado
enzimático 1:10
- Pre-tratamiento de las tiras: Poner las tiras en los canales y colocar 1.5
mL de tampón universal, agitar durante 15 min.
- Incubación de las muestras: Aspirar los canales, dispensar 1.5 mL de
Tampón universal y 30 L de muestra y/o control (Dilución 1:51). Agitar
por 30 min.
- Lavar: Aspirar el líquido de los canales, realizar 3 lavados con 1.5 mL de
tampón universal, agitando durante 5 min en cada uno.
- Conjugado: Aspirar los canales, pipetear 1.5 mL de conjugado
enzimático. Agitar por 30 min.
- Lavar: Aspirar el líquido de los canales, realizar 3 lavados con 1.5 mL de
tampón universal, agitando durante 5 min en cada uno.

18
 - Sustrato: Aspirar los canales, pipetear 1.5 mL de solución de sustrato.
Agitar por 10 min.
- Parar la reacción: Aspirar el líquido de los canales, lavar 3 veces durante
1 min en agitación con agua destilada.
- Evaluar
 Interpretación de resultados
- Negativo: Ninguna banda con antígenos específicos.
- Dudoso (Zona Gris): Una banda de antígenos ténue con los antígenos
específicos: p15 kDa, p17 kDa, p45 kDa y p47 kDa
- Positivo: Al menos una banda de antígenos intensa con los antígenos
específicos: p15 kDa, p17 kDa, p45 kDa y p47 kDa(9).

3.5. Pruebas no treponémicas

Son pruebas reagínicas que utilizan antígenos lipídicos (cardiolipina bovina), para
detectar reagina (anticuerpos humanos que se unen a los lípidos). A parte que son
pruebas rápidas y económicas para la búsqueda sistemática de infectados, pero no
son completamente específicas.

3.5.1. VDRL (Laboratorio de Investigación de Enfermedades Venéreas)

Es una prueba no específica que se utiliza para la detección inicial de la sífilis y

para el seguimiento de la enfermedad antes y después del tratamiento. La base de
la prueba VDRL es que el cuerpo produce anticuerpos cuando se infecta, y en esta
prueba el anticuerpo se detecta al someter el suero a un antígeno (solución
alcohólica incolora de cardiolipina, colesterol y lecitina). Es una prueba cualitativa
para la detección de la sífilis, y actualmente todas las pruebas no treponémicas son
pruebas de floculación. Desafortunadamente en esta prueba, el anticuerpo detecta
antígenos, que no son específicos, por lo que se producen muchas reacciones
positivas falsas(10).

 Materiales y reactivos
- Suspensión antigénica
- Solución salina al 0,9%
- Rotador
- Pipetas serológicas

19
 - Placa excavada
 Muestra
- Suero o plasma
 Procedimiento
- Pipetear 50 µl de la muestra en los pocillos de la placa excavada.
- Agregue 20 µL de la suspensión antigénica homogeneizada a los pocillos
que contienen las muestras. No es necesario mezclar estos dos
componentes.
- Agite la cuchilla durante 4 minutos a 180 rpm.
- Inmediatamente después de 4 minutos, observar al microscopio.
 Lectura e interpretación de resultados.
- Reacción negativa: Ausencia de agregados (grumos). Suspensión de
aspecto homogéneo.
- Reacción débilmente positiva: Presencia de pequeños agregados
dispersos.
- Reacción positiva: Presencia de agregados medianos y grandes.

3.5.2. RPR (Reagina Plasmática Rápida)

La RPR es una prueba semicuantitativa y los títulos de anticuerpos se pueden

monitorear para evaluar la respuesta al tratamiento. Las “reaginas” presentes en el
suero de individuos infectados con Treponema pallidum, se detecta por acción de
las mismas con antígeno de cardiolipina, lecitina y colesterol absorbido sobre
partículas de carbón. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de
antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no es
necesario inactivar la muestra. (Manual_CSJ)

 Materiales y reactivos
- Tarjetas de reacción
- Gotero metálico para dispensar el reactivo
- Goteros plásticos descartables para dispensar y diluir las muestras
- Agitador rotativo de 100 rpm
 Muestra
- Suero o plasma

20
 Procedimiento
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la muestra antes de realizar
el ensayo. En cada uno de los círculos de la tarjeta de reacción colocar
con un gotero plástico
Provisto:
- Muestra o Controles 1 gota (50 ul) Con el extremo cerrado del gotero
distribuir la muestra uniformemente en todo el circulo.
- Con el gotero metálico provisto, en posición vertical, agregar en el centro
del círculo: Reactivo A 1 gota (17 ul) SIN MEZCLAR, hacer rotar
horizontalmente la tarjeta de reacción en forma manual o con agitador
rotativo a 100 rpm durante 8 minutos.
- Observar la presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo.
Tiempos de lectura mayores pueden dar lugar a falsos resultados.
Prueba semicuantitativa
- Efectuar diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8, hasta 1:64 empleando solución
fisiológica y proceder de la misma manera que en la técnica cualitativa.
El titulo estará dado por la inversa de la última dilución que se observe
reactiva.
 Interpretación de resultados
- Reactivo: Presencia de aglutinación visible en forma de grumos negros
sobre el fondo claro que indica presencia de “reaginas” en la muestra.
- No reactivo: Aspecto gris homogéneo que indica ausencia de “reaginas”
en la muestra.

21
 IV. CONCLUSIONES

El análisis de los métodos de diagnóstico para la detección de la sífilis resalta su

importancia en el manejo oportuno de esta enfermedad. Las pruebas treponémicas y no
treponémicas son esenciales para identificar la infección en sus distintas fases,
permitiendo iniciar tratamientos eficaces y prevenir complicaciones graves, como la
sífilis terciaria y la sífilis congénita.

La sífilis presenta manifestaciones clínicas variadas según su etapa evolutiva. En la fase

primaria, destaca la aparición de chancros indoloros; en la secundaria, lesiones
mucocutáneas y síntomas sistémicos como fiebre y linfadenopatías; y en la terciaria,
complicaciones graves como gomas, neurosífilis o afectaciones cardiovasculares.
Reconocer estos signos clínicos es fundamental para sospechar el diagnóstico y actuar
de manera temprana.

Los métodos diagnósticos para la sífilis se clasifican en pruebas treponémicas, como

ELISA y FTA-ABS, que detectan anticuerpos específicos contra Treponema pallidum, y
pruebas no treponémicas, como VDRL y RPR, útiles para el seguimiento y evaluación
de la actividad de la enfermedad. Ambas pruebas son complementarias y desempeñan
un papel importante en el diagnóstico de la sífilis.

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V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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