A A I R MUY B

V I EN
¡L ES !

MONITORIA
INMUNOLOGIA MODULO 3
 CONTENIDOS
1. VACUNAS

2. REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD

3. PRUEBAS CELULARES

4. PRUEBAS HUMORALES

5. PREGUNTAS
VACUNAS
 VACUNAS
INMUNIDAD ADQUIRIDA EN FORMA PASIVA
Es el uso de anticuerpos preformados de individuos (plasma de animales
hiperinmunizados) contra infecciones o toxinas.
La protección de estos anticuerpos adquiridos se pierde con el tiempo.
Actualmente se usa contra venenos y profilaxis del citomegalovirus (CMV) y la rabia.
Van a ser remplazados por el uso de anticuerpos monoclonales.

ANTICUERPOS ADQUIRIDOS A PARTIR DE IA MADRE

La protección del feto se da por los anticuerpos IgG de la leche materna.
Principal inmunoglobulina es la IgA secretoria (SigA), NO LA ABSORBE EL BEBE, pero
se queda en el intestino protegiendo la mucosa, y ayudando a desarrollar
tolerancia.
Los anticuerpos SigA van contra antígenos bacterianos y virales intestinales.
 VACUNAS
lnmunoglobulina intravenosa (IgIV)
Es un preparado de IgG obtenido por fraccionamiento de plasma
de donantes.
Se administra en inmunodeficiencias que presentan niveles
reducidos o ausentes de anticuerpos circulantes. Tambien, se
utiliza en el tratamiento de algunas enfermedades infecciosas,
como el síndrome de shock tóxico postestreptocócico.
Transferencia adoptiva de células T citotóxicas
Es un proceso complicado que se limita a células autólogas o
casos en los que el donante comparte un alelo del CMH tipo I.
Se usa SOLO para reforzar las respuestas inmunitarias
específicas contra el virus de Epstein-Barr (EBV).
 VACUNAS
CONCEPTOS
VACUNA: Es un componente proveniente INMUNIDAD: para que exista una vacuna
de un microorganismo que induce una debe haber una inmunidad demostrada
respuesta inmune adaptativa (humoral y contra el microorganismo, una menoria
celular). inmune establecida.

INMUNOPROFILAXIS: Se busca aumentar la Inmunidad comunitaria: Cuando una

actividad del sistema inmune al estimular enfermedad depende de la transmisión
inmunidad adaptativa. Disminuyendo la humana, la inmunidad en una parte de la
presencia de la enfermedad. población puede beneficiar a toda la
comunidad al reducir la tasa de
Correlato de protección: Es el mecanismo reproducción (casos adicionales) a
del sistema inmune que se esta activando menos de uno—> lleva a la erradicación.
para protegerme.
 VACUNAS
CORRELATO DE PROTECCIÓN
CORRELATO ADAPTATIVO HUMORAL:
INNATOS: Producción de igG sistemica. Producción de igA mucosas
Produce INF-I. (fecal).
Produce peptidos AC neutralizantes (virus)
antibioticos VIH, de AC neutralizantes de la toxina.
mucosas (tambien en AC que mejoran la fagocitosis (opzonizacion, IgG1- IgG3).
rotavirus y polio). AC que fijan el complemeto AC que fijan neutrofilos
Activan ciertos TLRs. (heterofilios).
Inmunidad entrenada
CORRELATO ADAPTATIVO CELULAR:
de macrofagos.
TCD4 en bacterias: va a producir INF gama y IL17, o tambien
Celulas dendriticas
ThF?.
maduras.
TCD4 Viral: ThF?. TCD8--> Bacterias--> produce INFgama.
TCD8: Viral citotoxicos y INF- gama.
T polifuncionales en viral, cronica y tumores--> productores
de IL2, TNFa, RANTES (CCL5) y INF-gamma.
VACUNAS
CORRELATO DE PROTECCIÓN
 VACUNAS
¿COMO ACTUAN LAS
VACUNAS?
Son efectivas gracias a la inmunidad
adaptativa y a la memoria inmunológica.
La memoria de los anticuerpos existe: 1.
sangre y tejidos y 2. células B de memoria.
Las células T memoria: 1. células T de
memoria efectoras en tejidos periféricos y
2. células T de memoria centrales en
ganglios linfáticos.
El mejor correlato de protección es la
producción de anticuerpos.
El primer contacto con el antígeno durante la
vacunación no debe ser perjudicial (no debe
inducir daño al receptor de la vacuna).
 VACUNAS
Una vacuna debe cumplir con condiciones como ser fácil de obtener,
estable, económica y segura.
 VACUNAS
ELABORACION DE LA VACUNA:
1. Conocer al microorganismo.
2. Selección del antígeno
a. Debe ser un epitope
IMNUNOGENO.
b. No puede ser inocuo.
c. Puede ser un factor de
¿Que tiene una vacuna?
virulencia pero
1. Antigeno.
atenuado.
2. Coadyudante.
3. Saber de la epidemiologia y
3. Conservante
clinica del microrganismo.
4. Estabilizante.
5. Sustancia tensoactiva.
6. Producto residual.
7. Diluyente.
VACUNAS
SELECCIÓN DEL ANTIGENO
¿Cómo se identifica un epítope?
Se hacen librerías de antígenos.
Con el antígeno completo, hago uso
de enzimas de restricción para
cortarlo.
Tengo como resultante un antígeno
fragmentado.
 VACUNAS
SELECCIÓN DEL ANTIGENO

Una vez, tengo a mis antigenos

candidatos, busco que este sea
reconocido por el CMH y AC.
SI CUMPLE CON ESTAS DOS
CONDICIONES PUEDE SER MI
ANTIGENO
 VACUNAS
FASES DE ELABORACIÓN

Fase 1--> seguridad e

inmunogenicidad.
Fase 2--> eficiencia de
vacuna en grupo (en una
situación ideal).
Fase 3--> eficiencia de
vacuna en la población en
general.
 VACUNAS
¿contra qué hay
vacunas?
Bacterias: encapsuladas, bacilos gram +,
cocobacilos gram -, BCG, etc.
Virus: sarampión, rubeola, varicela,
dengue (para no endemicos y niños <4
años), viruela y COVID19.
Parasitos: Malaria (niños en Africa y
soldados USA), contra uncinariasis,
esquistosomiasis y chagas.
Tumores: terapia personalizada
PERO NO HAY CONTRA HONGOS!!
 VACUNAS
MICROORGANISMOS MUERTOS COMO VACUNAS/
VACUNAS NO VIVAS, NO SE REPLICAN
La forma más sencilla de neutralizar la virulencia de un microorganismos y
conservar sus antigénos, es evitar que se repliquen.
Los helmintos y los protozoos, tienen dificultades para crecer en grandes
volúmenes y desarrollar este tipo de vacunas.
En muchos virus y bacterias, donde los microorganismos inactivados
proporcionan antígenos seguros.
Se debe evitar que los antígenos protectores sean destruidos al inactivarse.
Microorganismos completos: Bacterias: Antrax, v. colera, B. pertussis.
Virus: Hepatitis A, influenza, polio. Parasitos: en animales.
REACCIONES EN HUMANOS--> ES EL MICROORGANISMO COMPLETO.
 VACUNAS
LOS MICROORGANISMOS VIVOS
ATENUADOS/ VIVAS QUE SE REPLICAN
Se atenua para que el patógeno imite el comportamiento natural sin causar
una enfermedad
Tiene mayor inmunidad que las vacunas muertas.
En microorganismos vivos la respuesta inmune tiene lugar en el sitio de la
infección, como pasa en el polio oral IgA, ya que crea anticuerpos locales.
Hay más interés en la inmunización en mucosas, ya que confiere protección
local con anticuerpos SigA.
VACUNAS: BCG ([Link]), polio oral, fiebre amarilla, sarampión y varicela.
¿Como se atenua?--> irradiación, mutaciones que eliminan factores de
virulencia, huevos embrionarios.
 VACUNAS
LOS MICROORGANISMOS VIVOS
ATENUADOS/ VIVAS QUE SE REPLICAN
Ventajas:
Activan la inmunidad innata y adaptativa. Proteccion de larga duración-->
SIN REFUERZO.
Menor costo (replican).
Facil de administrar.
Otros beneficios, NO especificos.
Desventajas:
Mutaciones secundarias. Reversión a cepa salvaje. Disemina en pacientes
inmunosuprimidos.
Dificil trasporte, cadena de frio.
CI--> embarazadas o inmunosuprimidos y alérgicos al huevo.
 VACUNAS
VECTORES MICROBIANOS COMO VACUNAS/
VACUNAS VIVAS QUE NO SE REPLICAN
Permite desarrollar vacunas utilizando vectores virales: SE HACE USO DEL
ADENOVIRUS 5 y 26 humano, y el de chimpances.
Aprovecha la capacidad los virus, para transportar genes que codifican
proteínas de interés (antígenos).
Los vectores virales recombinantes atenuados pueden ser diseñados para
expresar una amplia variedad de antígenos: Proteínas virales de la
cubierta, antígenos de superficie o Antígenos de otros patógenos.
Estos antígenos son procesados y presentados por el CMHI, lo que
desencadena respuestas humorales y celulares.
Se ha usado en: SARS: AztraZeneca, hepatitis C, Influenza, ebola, rabia y
Malaria.
 VACUNAS
Vectores microbianos como vacunas/
Vacunas vivas que no se replican
El código genético del
antígeno, se pone en un virus
vivo sin genoma--> esto para
que el virus entre a la celula y
produzca Ag, el virus no se
replica.
Si alguien ya esta inmunizado
por el adenovirus NO sirve, se
va a neutralizar ese virus-->
La vacuna, ya no funcionaria
 VACUNAS
Vectores microbianos como vacunas/
Vacunas vivas que no se replican
VENTAJAS:
Seguras y fáciles de producir.
Se dan en inmunosuprimidos o embarazadas. Facil transporte y
almacenamiento.
DESVENTAJAS:
Menos duración de inmunidad--> necesita refuerzo. Induce inmunidad
adaptativa.
Mayores dosis y uso de adyudantes.
 VACUNAS
Componentes purificados como vacunas/Carbohidratos
purificados (anticapsulares) / proteínas purificadas
Las exotoxinas bacterianas se utilizan como
antígenos.
Deben ser detoxificadas con el con formaldehído .
Inducen anticuerpos que neutralizan la toxina.
Los toxoides se dan con hidróxido de aluminio, como
adyuvante.
Proteinas purificada: C. tetani, C. diphteria, B.
pertussis.
Carbohidratos purificados (anticapsulares): el AC
se pega a la capsula activando el complemento, es
contra: H. influenza, S. pneumonie y N. meningitidis.
MUY IMPORTANTE EN PERSONAS SIN BAZO
 VACUNAS
Una vacuna de subunidades/Proteinas recombinantes

Las partículas antigénicas se aislaron del

plasma de personas con hepatitis B.
Se desarrolló una vacuna de subunidad contra
el VHB utilizando tecnología de ADN
recombinante.
Dado que el VHB se asocia con el cáncer
hepático, la vacuna anti-VHB se considera una
medida preventiva contra el cáncer.
HEPATITIS B Y VPH.
 VACUNAS
Vacunas ADN y ARN

Una inyección de ADN actúa

como un antígeno, induciendo
respuestas inmunitarias
intensas.
Se usa ADN desnudo, al que se
le inserta en un plásmido con un
promotor y una secuencia
bacteriana como adyuvante.
VACUNAS
CANCER
 ADYUVANTE
Los adyuvantes son sustancias que potencian la respuesta inmue cuando
se dan junto con el antígeno en la vacuna. Esto lo hacen por medio de:
Inmunoestimulación: aumenta la respuestas inmunitarias.
Provisión del antígeno: ayudan a la presentación del antígeno y facilita la
liberación lenta del mismo.

Tan importante como el antigeno. Funciones:

Proteccion del ag y le da tamaño para que la CD, lo fagocite.
Entrega lenta y prolongada.
Estabiliza la vacuba.
Le da inmunogenicidad: aumenta TLR, MOLECULAS
COESTIMULADORAS Y PRESENTACIÓN DEL AG.
 ADYUVANTE
Tipos de adyuvantes
Sales minerales--> hidroxido de aluminio y calcio.
Emulsiones y a. sulfactante (MF59 y derivados de la saponina
QS21, ASO2, montatide, ISA-59 y 70)--> entrega lenta y
prolongada.
Particulas adyudantes: virosomas, liposomas, iscoms y PLG.
Derivados microbianos (MPL, motivos CPG de inmunidad).
Inmunomoduladores (citocinas): HGM-CSF o HIL-12.
 ERSENSIBILIDA
HIP D
 CONCEPTOS BÁSICOS
ALERGIA FENOTIPO
Reacción de hipersensibilidad Es la expresión visible de las características de un
mediada por mecanismos inmunes organismo, es decir, los rasgos físicos, bioquímicos y
alergeno-específico. conductuales que se pueden observar y medir.

ATOPIA
Tendencia a producir un exceso de
IgE a bajas dosis. ANAFILAXIA
Anafilaxia es consecuencia de la atopia y
de la alergia pero es reacción seria,
GENOTIPO sistémica -> muerte del paciente

Se refiere a la constitución genética

(combinación de genes) del individuo
 HIPERSENSIBILIDAD
Hipersensibilidad: lesión tisular mediada por el sistema inmune.

1. Reacciones de hipersensibilidad tipo I (alergias)

2. Reacciones de hipersensibilidadtipo II (anticuerpos)
3. Reacciones de hipersensibilidad tipo III (complejos inmunes)
4. Reacciones de hipersensibilidad tipo IV (celulas, retardada)
 ALERGIAS TEORIA DE LA
NO ALÉRGICAS ALÉRGICAS
HIGIENE
Localizadas Mediada por IgE -
Intolerancia a súbito
alimentos No mediada por IgE
Toxicidad - demorada
 Anafilaxia
mediada por IgE (FcεRI)

¿QUIENES ACTUAN?
- Linfocitos Th2
- IgE
- Mastocitos

- Deficiencia de T reg (CD4+,

CD25+,Foxp3+) -> Alergia.
Anafilaxia
mediada por IgE
SENSIBILIZACION AL ALERGENO

- Alérgeno
- Fagocitado por las CD y presentado a las células T.
- El linfocitos T se convierte en Th2
- Liberación de IL-4, IL-5, IL-6, IL-13
- Linfocitos B se diferencia a plasmocito -> secreción
de IgE.
- IgE se pega a los receptores de mastocitos.
Anafilaxia
mediada por IgE
LUEGO DE LA ATOPIA

- Alergeno se une a la IgE.

- Activación de mastocitos.

- Liberación de mediadores de la alergia.

Aminas vasoactivas (histamina) y mediadores
lipídicos = inmediata [minutos]
Citocinas (interleucinas, quimiosinas,
proteasa, triptasas) = tardía [2-24 horas]
 Mediadores de la alergia
FASE INMEDIATA - MINUTOS FASE TARDÍA - 2 A 24 HRS
No se mide memoria celular Se mide memoria celular

Histamina: Citocinas
Contrae el músculo liso - bronquial. IL - 5 -> mantenimiento de los
Dilata los vasos sanguíneos - eosinofilos (sobreexpresión de
inflamación. receptor, iApoptosis y reclutamiento)
Aumenta la permeabilidad vascular. IL-4 -> aumenta actividad Th2
Aumenta secreción de moco. (liberación de CCL-11)
Leucotrienos (LTC4 y LTD4) CCL21, CCL5, CCL11, CCL12 -> atraen
Prostablandina D2: Broncoespasmo y eosinófilos - Quimiocinas.
liberación de moco. IL-2 -> inflamación.

Otros: Heparina, triptasa, neutrofilos, monocitos, carboxipeptidasa, serotonina

Alérgenos
Alérgeno

Formación de complejos
inmunes
Activación del complemento
Degranulacion directa de
mastocitos y basófilos.
MANIFESTACIONES
Al inicio de la vida.

1. Gastrointestinal
2. Piel - dematitis atópica.
3. Pulmón - asma
4. Nariz - rinitis

En edad adulta.

1. Nariz - rinitis
2. Pulmón - asma
3. Piel - dermatitis atópica
4. Gastrointestinal.
 ASMA
ASMA OCUPACIONAL.
ASMA EXTRINSECO
ASMA INTRÍNSECO

Biopsia y lavado broncoalveolar -

mastocitos y eosinófilos.

Remodelamiento de la vía aérea (IL-11)

Engrosamiento de las paredes.
Aumento de la adventicia, el tejido
de la submucosa, y el músculo liso.
Fenotipo alérgico y no alérgico. (IL-3)
Aumento en la secreción de moco.
Asma crónico -> reacción tardía y
acumulación de esinófilos
 Respuesta inmunológica
La presencia de GATA-3, c-maf y prostaglandina
E2 estimulada respuesta Th2.

Factores en la disfunción de la vía aérea

1. Leucotrienos - broncoconstrictor que daña las celulas del musculo liso.
2. Edema.
3. Unión de MBP y receptores M2 -> ACh.
4. Descamación de celulas epiteliales.
5. Hipersecresión de moco.
6. FGF, TGF, PDGF, colágeno, cicatrización, hipertrofia del músculo liso y tejido
fibroso -> estrechamiento dr la vía aerea.
 TRATAMIENTO

1. Evitar el alérgeno.
2. Inyecciones subcutánea.
Omalizumab (anti IgE)
3. Isoprenalina Inhalado ó Cromoglicato de sodio VO.
4. Antihistamínicos H1 (Loratadina), Antrileucotrieno (Montelukast), SABA/LAMA.
5. Antihistamínicos H2 (Cetirizina), Anti IL-5 (Mepolizumab), Corticoesteroides.
 OTROS
ALERGIA A ALIMENTOS
DERMATITIS
Se da mayormente en el
ATÓPICA
RINITIS ALERGICA intestino -> diarrea y vómito
Similar al Asma. -> permeabilidad intestinal
Fiebre del heno
Infiltrado de mastocitos, -> complejos Alerg-Ac ->
basófilos, eosinófilos y articulaciones, piel o
células T (80-90%). pulmones.
ANAFILAXIA POR
CD -> complejo alegeno- FÁRMACOS
IgE -> procesamiento del
Penicilina: acoplamiento
CMH-II -> Th2.
covalente con proteínas
haptenos.

Tx: Adrenalina
 HIPERSENSIBILIDAD II
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE
DE ANTICUERPOS

II-a -> citoxicidad directa

(opsonizacion y fagocitosis,
complemento - C8 y C9, NK.
IIb -> reacciones contra
receptores:
Ac bloquea receptor de ACh -
Miastenia gravis.
Ac bloquea TSH - Enf. de
Graves.
 HIPERSENSIBILIDAD II
CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE
DE ANTICUERPOS

Formación de autoanticuerpos:

1. Genética.
2. Infecciones:
Por coestimulación.
Mimetismo molecular

Ejem: Transfusiones sanguíneas.

 HIPERSENSIBILIDAD III
Esta reacción de hipersensibilidad ocurre
cuando hay una exposición a un exceso
de antígenos en un periodo prolongado,
que puede ocurrir por:

Infecciones Contacto repetitivo con

persistentes Autoinmunidad agentes ambientales
MECANISMOS

 Estos complejos
agregan plaquetas,
produciendo trombosis o
aminas vasoactivas

Estado inflamatorio
permantente -
fagocitosis frustrada

1. Aflujo de neutrófilos 2. Secreción de

granulos del neutrofilo

 La liberación de las anafilotoxinas C3a y C5a

del complemento van a provocar la liberación
de los mediadores del mastocito (histamina,
prostaglandina y leucotrienos)
 LA PRECIPITACIÓN DE LOS
COMPLEJOS ANTÍGENO ANTICUERPO
DEPENDEN DE LAS PROPORCIONES
DE CADA UNO DE ESTOS

PRECIPITACION NO PRECIPITACION

Exceso alto o moderado

Hay una alta cantidad de de antígenos los
anticuerpos un exceso complejos son solubles
leve de antígenos por ende no precipitan.
 LESIONES INFLAMATORIAS DEBIDO A
COMPLEJOS FORMADOS LOCALMENTE.

Reacciones a antígenos EXOGENOS Reacciones a antígenos ENDOGENOS

Reacción de Arthus GLOMERULONEFRITIS
En este caso la unión de los inmunocomplejos
La rapidez de la precipitación del se van a depositar en un sitio de importancia
antígeno con el anticuerpo no permite en la filtración que es el glomérulo, esto se
que la via clásica del complemento lo observa cuando la enfermedad es
evite, en consecuencia, el complejo PERSISTENTE, como en infecciones crónicas o
anticuerpo-antígeno-complemento se autoinmunitarias.
precipita

Inmunocomplejos que
contienen antígenos de
Hepatitis B en poliartertis
 TRATAMIENTO

Se utiliza el cromoglicato de sodio, la heparina y los salicilatos,

estos últimos que son estabilizadores de plaquetas y potentes
agentes antiinflamatorios . Se usan corticosteroides que son
particularmente usados para los procesos de inflamación y son
inmunosuprimidores.
 HIPERSENSIBILIDAD IV
MEDIADA POR CÉLULAS (LINFOCITOS)
Tipo IV a1 -> Th1 ->IFNgamma, TNFalfa.
(Pruebas: Tuberculina, lepra y leishmania)
Tipo IV a2 -> Th2 -> IL-4, IL-5, IL-6
Tipo IV b -> Linfocitos T CD8+ (Rechazo a
trasplante, HB, Diabetes tipo I)
 EBAS CELULAR
RU ES
P
 PRUEBAS CELULARES

son menos comunes que las

pruebas humorales

dependen mucho de la
viabilidad de las celulas

se evaluan las celulas que

pueden existir
participan tanto en la inmunidad diferentes
innata como específica tecnicas que
evaluen la
misma función
tecnicas que evaluan según

cantidad funciones y mecanismos

(cuantitativas) efectores
 CITOMETRÍA DE FLUJO

es una forma de cuantificar la

expresion de un marcador

si queremos evaluar en
un grupo de celulas

cuantas resultan cuantas resultan

positivas para CD4 cuantas resultan positivas para CD8 y
positivas para CD8 para CD4

no solo evalua si es
positiva, sino QUE TAN
POSITIVA ES PARA ESE
MARCADOR O ANTIGENO
 CITOMETRÍA DE FLUJO

¿Qué queremos evaluar ? cuantitativa

grado de
tamaño granularidad
fluorescencia

negativa para un
ligeramente positiva
marcador positiva

¿CÓMO?

grado de fluorescencia

ILUMINADA POR
UN LASER DETECTOR(fotom
FILAS DE CELULAS ultiplicador)
QUE FLUYEN EXCITACION DEL
FLUORCROMO
celula de
flujo cuantificar de la
fluoresencia
asociada a la
celula
 ¿CÓMO?

tamaño granularidad

ILUMINADA POR
UN LASER
FILAS DE CELULAS
dispersión y
QUE FLUYEN
reflexión del
la cantidad de laser
celula de
marcadores que flujo
se evaluan

depende de

la cantidad de
lasers que se
dispongan

y su relación
laser-detecor
 CITOMETRIA DE
FLUJO
A MAYOR CANTIDAD DE
FLUOROCROMOS
POBLACIONES PODEMOS
ESTUDIAR

CÓMO ESTRAMOS HABLANDO

DE CELULAS DEL TIMO, DONDE
TIMOCITOS OCURREN LA SELECCIÓN
TIMICA Y LOS LINFOCITOS
ADQUIEREN SU ESTADO
SIMPLE POISITOV HAY
MUCHOS CD4 Y CD8

TENEMOS MÁS CELULAS

DOBLES NEGATIVAS PORQUE
PODRIAMOS ESTAR HABLANDO
BAZO DE LINFOCITOS B, QUE
SABEMOS QUE AQUÍ
INTERACTUAN PARA PRODUCIR
ANTICUERPOS CON LA
INTERACCIÓN DEL LINFOCITO
T
CITOMETRIA DE
FLUJO

PODEMOS VER LA INHIIBICIÓN

DE REGULACIÓN DEL CICLO DE
LAS CELUALS TUMORALES
 1. Funciona con los mismos principios de la citometría de flujo
2. Anticuerpos marcados con Lantánidos
CITOMETRÍA DE MASAS 3. TODOS SUS ISOTOPOS SON RADIOACTIVOS
4. Lo que se mide son los lantánidos, no las células (se
pulverizan)
5. se evaluan Múltiples marcadores al mismo tiempo
APLICACIONES
CD8+,CD3-
SEPARACIÓN Y
SORTING
CELULAR
 SEPARACIÓN DE CELULAS Y SORTING CELULAR POR CITOMETRÍA

SEPARACIÓN MAGNÉTICA DE CELULAS

se quiere buscar
la depleción o
separación de las
poblaciones
celulares con
marcadores
especificos
CITOTOXICIDAD

PERLAS
CD4+ CD45RO+
MAGNÉTICAS

SEPARACIÓN POR linfocitos T de

FLUORESCENCIA memoria

ENFRENTAMIENTO CD45RO+
DE PLACAS

Ig anti
CD45RO

anti Ig anti
CD45RO

perla
 SEPARACIÓN O SORTING
CELULAR
FACS

POR CARGA

FLUJO LAMINAR CON CELULAS

MARCADASY NO MARCADAS (MEZCLA
HETEROGENEA)
CADA UNA EMITE UNA LUZ DIFERENTE Y EL
FOTO MULTIPLICADOR RETRANSMITE ESA
SEÑAL QUE RECIBIO PARA SEPARARLA
SEGÚN SU CRGA QUE ADQUIRIO

SI EMITE X SEÑAL LA GOTA VA PARA LA

DERECHA Y SI EMITE Y SEÑAL VA PARA LA
IZQUIERDA
 EVALUACIÓN DE
POLIMORFONUCLEARES
EVALUACIÓN DE POLIMORFONUCLEARES
 [Link]ÍMICA
ANTI CD68 QUE SON
MACROFAGOS

ANTI CD21 - CELULAS B O

CELUASL DENDRITICAS ANTI CD68 QUE SON
FOLICULARES MACROFAGOS

ANTI- CD3 QUE NO ESTAN EN ANTO CD20 SON CELUALS B

EL CENTRO SINO EN LA
PERIFERIA COMO LOS B-
LINFOCITOS T
 EVALUACIÓN DE POLIMORFONUCLEARES

EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD
propio de la OXIDATIVA
EVALUACIÓN DE LA QUIMIOTAXIS granulomatosis crónica
LOS NEUTROFILOS FAGOCITAN MÁS NO DESTRUYEN

ulas por evaluar

c5a

Reducción del azul Quimioluminiscencia

de tetrazolium o Citometría de flujo
NBT con rodamina luminol

se puede ver azul cuando hay oxidación

Ensayo de Boyden chamber
(cristales de formazan)

madre - no fenotipo , genotipo 50 y 50 poca fluoresencia con rodamina a

comparación del control por el deficit de
hijo - granulomatosis crónica
oxidación
(inmunodeficiencia primaria)
 EVALUACIÓN DE POLIMORFONUCLEARES

Fagocitosis y muerte intracelular EVALUACIÓN DE LOS MARCADORES

mieloperoxidasa
DE SUPERFICIE

mieloperoxidasa en los granulocitos

el rojo (R2) son los granulocitosr

mayor grado de dispersión (lateral)
lo que indica mayor granularidad en
CF
 EVALUACIÓN DE MARCADORES MARCADORES ENZIMATICOS

inmunohistoquímica

CD14 + CD16++ NO CD14 + +CD16-

CLASICOS CLASICOS
 EVALUACIÓN de linfocitos B IN VITRO

MARCADORES
ACTIVIDAD DE LOS LINFOCITOS

evaluación de las celulas formadoras de anticuerpos

linfocitos B

celuasl previamente inmunizadas

eritrocitos de carnero

lisis mediadas por complemento

PLACAS VISIBLES

50% DE CADENA LAMDA

50% DE CADENA kAPPA
En el humano la proporción κ/λ en la inmunoglobulina de superficie de los linfocitos B maduros es 1.5:1
 EVALUACIÓN DE LINFOCITOS T

PRODUCCIÓN DE CITOCINAS

FASE AGUDA
CELULAS
SECRETORAS DE
IFN

ren realidad la marca que queda no es la celula sino una

“huella”. que es el inmunocomplejo de citocina-
anticuerpo- anticuerpo
 EVALUACIÓN DE LINFOCITOS T

EVALUACIÓN DE LINFOCITOS T

MARCADORES ESPECÍFICOS

PRINCIPALMENTE POR
CITOMETRIA DE FLUJO
 EVALUACIÓN DE LINFOCITOS T CD8+
In vitro

EVALUACIÓN DE
CITOTOXICIDAD POR Tetrámeros del CMH clase I
LIBERACIÓN DE CROMO solubles

LA CITOTOXICIDAD ES
PROPORCIONAL A LA CANTIDAD
DE CROMO LIBERADA
 EVALUACIÓN DE MONONUCLEARES in vivo

hipersensibildiad tipo 4 o
retardada hiperesensibilidad inmediata
1. PPD
2. Candidina.
3. Leishmanina.
4. Histoplasmina.
24-48 horas despues

mediada principalmente por Th1 dirigida

a patógenos intracelular de dificil
erradicación
 BAS HUMORA
UE LES
PR
LA RESPUESTA CARACTERISTICAS REACCIÓN ANTIGENO
HUMORAL Es reversible. ANTICUERPO
Mediada por Se unen por fuerzas Se miden en las pruebas
anticuerpos hidrofobias e ionicas. serologicas, esto para el
(inmunidad Union depender: estudio, identificación y
adquirida), la Afinidad y la clasificación de
cual confiere concentracción. antígenos de
protección. Que tan especifico es microorganismos se
el AC y el Ag. denomina
serotipificación.

NOTA: PUEDO HACER ANTICUERPOS CONTRA CASI TODO—> Flagelos,

LPS. RECORDAR: Reaccion AG-AC: es especifica!!!!
LAS REACCIONES AG-AC
NO SON VISIBLES

SIEMPRE PARA EVALUAR

ANTICUERPOS, DEBO USAR UN
MARCADOR QUE ME PERMITA
EVIDENCIAR EL RESULTADO
 LAS REACCIONES AG-AC SON

ESPECIFICIDAD: SITIOS DE RECONOCIMIENTO

ESPECÍFICOS PARA CADA EPÍTOPE.

AFINIDAD DE LA REACCIÓN AG-

AC: MIDE LA FUERZA DE LA
INTERACCIÓN (AG-AC) ENTRE EL
EPÍTOPE Y EL SITIO DE UNIÓN
DEL ANTICUERPOS.
LAS REACCIONES AG-AC SON
AVIDEZ: LA SUMA DE
LAS AFINIDADES DE
CADA REGIÓN FAB
(MONO O
MULTIVALENTE G VS M).

REACCION CRUZADA: LA
CAPACIDAD DE UN AC
PARA RECONOCER UN AG
NO RELACIONADO.
 VARIAS REACCIONES EN AG-AC

AGLUTINACIÓN:
PRECIPITACIÓN: SI EL ANTÍGENO
SI EL ANTÍGENO SON
ES SOLUBLE. PARTÍCULAS
(MC), NO ES
SOLUBLE

FIJACION DEL NEUTRALIZACIÓN

COMPLEMENTO: DE TOXINAS:
OPSONIZACIÓN INHIBICIÓN DEL
—> LISIS EFECTO CELULAR
CELULAR COMO DE LA TOXINA (NO
DETECTOR SIRVE)
 APLICACIONES DE LA REACCIÓN AG-AC

DIAGNOSTICO TERAPÉUTICA
– PRUEBAS SEROLÓGICAS INDIRECTAS – TRANSFERENCIA PASIVA DE
– SEROTIPIFICACIÓN SUEROS POLICLONALES
– IDENTIFICACIÓN DE BLANCOS – USO DE ANTICUERPOS
DIAGNÓSTICOS MONOCLONALES

APLICACIONES DE LA REACCIÓN AG-AC

PRESENCIA DE ANTÍGENO AVIDEZ DE LOS ANTICUERPOS.
(PRUEBAS DIRECTAS). ANTICUERPOS TOTALES.
PRESENCIA DE ANTICUERPOS ISOTIPOS DE ANTICUERPOS.
(PRUEBAS INDIRECTAS). UBICACIÓN DE LOS AGS.
AVIDEZ DE LOS ANTICUERPOS. UBICACIÓN DE LOS ACS.
 ¿A QUE SE DEBE EL DESARROLLO DE LAS PRUEBAS
HUMORALES?
1. SON PROTEÍNAS SOLUBLES QUE PUEDEN SER PURIFICADOS POR
DIFERENTES MÉTODOS.
2. SE PUEDEN PRODUCIR ANTICUERPOS EN MODELOS ANIMALES
RELATIVAMENTE FÁCILES DE MANEJAR (RATONES, RATAS, CONEJOS, CABRAS
ETC.).
3. SE PUEDEN PRODUCIR ANTICUERPOS ANTI-ISOTIPOS EN DIFERENTES
ESPECIES.
4. SE PUEDEN PRODUCIR GRANDES CANTIDADES DE ANTICUERPOS SEAN DE
ORIGEN POLICLONAL O MONOCLONAL.
5. LOS ANTICUERPOS PUEDEN SER MARCADOS CON ALGUNA MOLÉCULA QUE
PERMITA SU DETECCIÓN (CONJUGADO—> FC—> DETECTAR).
6. LA CONJUGACIÓN DEL ANTICUERPO NO ALTERA SU ESPECIFICIDAD (NO SE
ALTERA LA REGIÓN FAB).
 ANTICUERPOS MONOCLONALES

PURIFICACION DE
ANTICUERPOS:
1. PRECIPITACIÓN CON
SULFATO DE MAGNESIO.
2. CROMATOGRAFÍA
POR EXCLUSIÓN DE
TAMAÑO. 3.
CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD DEL
ANTICUERPO (PROTEÍNA
A DE S. AUREUS).
4. CROMATOGRAFÍA
POR AFINIDAD DEL
ANTÍGENO.

LOS TITULOS DE AC AUMENTAN CON

EL USO DE ADYUDANTES
ANTICUERPOS MONOCLONALES
TIPOS DE ANTICUERPOS MONOCLONALES
TIPOS DE ANTICUERPOS MONOCLONALES
MURINO:TODO ES DE RATON--> MOMAB.
QUIMERICOS: FC HUMANA, Y FAB DE RATON—>
XIMAB.
HUMANIZADOS: TODO ES HUMANO, MENOS REGION
DETERMINANTE DE COMPLEMENTARIEDAD—> ZUMAB.
HUMANOS: SOLO EN PACIENTES CON EBV--> MUMAB.
 EVALUACION DE LA INMUNIDAD HUMORAL

Anticuerpos totales Isotipos de anticuerpos

Concentración IgG, IgA e IgD en la

IgM superficie
de proteínas
especificos de los
Perfil de linfocitos B
IgE maduros
proteínas por especificad
cromatografía en alergia
PERFIL DE PROTEÍNAS POR CROMATOGRAFÍA

Valores
normales de
proteinas
1. Albumina.
2. Ig- g
3. Ig-B
4. Ig- a2
5. Ig-a1
CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS

Valores
normales de
proteinas
1. Albumina.
2. Ig- g
3. Ig-B
4. Ig- a2
5. Ig-a1
 FENOMENO PROZONA

La concentración de antígeno y anticuerpo, deben estar en una

zona de equilibrio. Los reactivos vienen en una concentración
estándar 8elevada concentración del AC). Por lo que, se deben
titularse para que lleguen al equilibrio. Cuando hay exceso y poco
de alguno—> prueba no concluyente o negativa.

Anticuerpos conjugados

Ya que la reaccion antigeno,

aticuerpo no es visible, un anticuerpo
puede ser conjugado en la región FC.
 ANTICUERPOS CONJUGADOS

AGLUTINACÍON: Isotopos radiactivos

Partículas de latex, (RIA, Gamagrafías):
betonita, carbono. I132 Tec 99

Enzimas (ELISA, Western Fluorocromos (IF y citometría

blot y ELISPOT): de flujo): Fluoresceina,
Peroxidasa, fosfatasa ficoeritrin, peridin proteína,
alcalina aloficocianina
Biotina: Sistema
biotina/avidina que
permite cualquiera de las
pruebas mencionadas
ANTICUERPOS CONJUGADOS
 ANTICUERPOS TIPOS DE PRUEBAS

Pruebas directas Pruebas indirectas

Puebas de
competición y las Se puede tener pruebas:
BUSCA pruebas en BUSCA Cualitativas:
“sándwich”. presencia o no de
antígeno antícuerpo reacción.
Semi-cuantitativas:
Niveles de un titulo de
medicamento anticuerpos.
Detección de Medir Acs Cuantitativas:
depósitos o hormona totales concentración.
detección
detecciónde
de
antígeno
antígeno Medir isotipos
de anticuerpos
 HEMOAGLUTINACIÓN
Se hace con eritrocitos.
AC se unen a los
eritrocitos y forman
complejos.
 INHIBICIÓN DE LA HEMOAGLUTINACIÓN

Se hace con eritrocitos.

Esta técnica utiliza
anticuerpos específicos
contra el
microorganismo en
cuestión. De tal
manera, que los
anticuerpos se unen al
organismo bloqueando
las uniones del mismo a
los eritrocitos.
INMUNODIFUSIÓN

Está basada en una

reacción
inmunoquímica mediada
por anticuerpos, que
forman inmunocomplejos
con las proteínas a
determinar y se pueden
ver como precipitados de
forma circular.
 MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS

ELISA
Cuantificación de antígenos y anticuerpos.
Alta sensibilidad y especificidad.
Se basan en la medición de moléculas indicadoras (con lo que
conjugo el anticuerpo).
La cuantificación se realiza por medio de espectrofotometría,
que mide que tanto se colorea la reacción.
MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS
MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS
MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS
 MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS

Interpretación de los [Link] lectura se realiza en un

fotómetro donde el color obtenido de cada prueba se da en
absorbancia a determinada longitud de onda.
MÉTODOS INMUNOENZIMÁTICOS
 QUIMIOLUMINISCENCIA (CLIA)

Basicamente una elisa con

inmunofluorecencia
Anticuerpo marcado con una
sustancia quimioluminiscente.
Una alta sensibilidad
CLIA directa y indirecta.

INMUNOFLUORECENCIA
 QUIMIOLUMINISCENCIA (CLIA)

Basicamente una elisa con

inmunofluorecencia
Anticuerpo marcado con una
sustancia quimioluminiscente.
Una alta sensibilidad
CLIA directa y indirecta.

INMUNOFLUORECENCIA
INMUNOFLUORECENCIA
 RADIO-INMUNOANÁLISIS

La concentración de antígeno ó de anticuerpo se mide por

radioisótopos, muy sensible
En desuso por peligro por la radiación, la disposición de los
deshechos, la inestabilidad de compuestos radio marcados y el
costo del equipo empleado.

EL INMUNO-BLOT
Es una electroforesis con la especificidad de la detección
inmuno-química. A partir de un microorganismos.
Fija proteínas de interes en un gel de poliacrilamida y se fijan a
la membrana de nitrocelulosa y por una serie de reacciones
sucesivas que permita identificación y cuantificación del Ag o del
Ac.
EL INMUNO-BLOT