Evaluación del Estado
Inmunológico
Inumidad Innata y Adquirida.
Reacciones Serológicas
11/0 /2020 1
Evaluación de la Inmunidad Innata
Se evalúa la respuesta quimiotáctica, la
fagocitosis, la inflamación, las células
asesinas naturales y el sistema de
complemento.
Evaluación de la quimiotaxis
Se mide la locomoción direccional de los
neutrófilos hacia diversos estímulos quimiotácticos
Pruebas de laboratorio: Cámara de Boyden,
Prueba de Agarasa, Prueba de Orientación.
(Rojas, 2007)
11/0 /2020 2
Evaluación de la Fagocitosis
Se mide la función y número de
macrófagos y PMN
Pruebas de laboratorio: Recuento de glóbulos
blancos y diferencial
Captura de Staphylococcus aureus marcado
con C 14 radioactivo
Actividad bactericida
Quimioluminiscencia
11/0 /2020 3
Evaluación de la Inflamación y del
Complemento
Evaluación de la inflamación
Eritrosedimentación
Cuantificación de la Proteína C reactiva
Prueba de la liberación de la histamina
Cuantificación de factores del complemento
Evaluación de las células NK
Evaluación del Sistema del Complemento
Actividad hemolítica total
Cuantificación de factores del complemento
11/0 /2020 4
Evaluación de la Inmunidad
Adquirida
Evaluación de los linfocitos
Frotis sanguíneo
Recuento total de linfocitos en sangre
Estudio de subpoblaciones de linfocitos
Clasificación del grado de desarrollo de los linfocitos
Evaluación de la inmunidad preexistente
Sensibilización activa
Transformación de linfocitos
Estudio de las citoquinas y su cuantificación
11/0 /2020 5
Evaluación de la Inmunidad
Humoral
Medición de las Inmunoglobulinas
Electroforesis
Inmunoelectroforesis
Cuantificación de IgA, IgG, IgM
Evaluación de la reacción Antígeno-Anticuerpo
Precipitación
Aglutinación
Floculación
Inmunodifusión
Hemaglutinación
Fijación de Complemento
Radioinmunoanálisis (RIA)
ELISA . Inmunoenzimático
Anticuerpos fluorescentes
11/0 /2020 6
Evaluación del estado alérgico
Dosificación de IgE
Intradermorreacciones
Identificación de IgE específica
Recuento de eosinófilos
11/0 /2020 7
Evaluación de los antígenos del
MHC y de grupos sanguíneos
Serología
Reacción en cadena de polimerasa
Clasificación de los grupos sanguíneos
Evaluación de Problemas autoinmunes
Evaluaciones Génicas. Microarreglos
11/0 /2020 8
Proteína C reactiva
¿Qué es la proteína C reactiva
¿Cuál es su utilidad diagnóstica
Qué es el látex-antiproteína C reactiva
¿Cómo actúa en la reacción?
11/0 /2020 9
Proteína C Reactiva
Proteína de fase aguda de la inflamación sintetizadas por los
hepatocitos
Es inducida por la acción de la IL-1 y la IL-6
liberadas por los macrófagos en respuesta a
un proceso infeccioso sobre diferentes
células, tejidos y órganos que coordinan la
respuesta inmune global del huésped
Proteína de fase aguda de la inflamación:
Proteína C reactiva
Lectinas
11/0 /2020 10
Proteína C reactiva
La proteína C reactiva se une a los grupos
fosfatidilcolina (compuesto del polisacárido C
del Streptococcus pneumoniae) o de cualquier
otra bacteria
Se sintetiza en el hígado en respuesta a
cualquier estímulo que provoque la liberación de
IL-6
La proteína se unen a microorganismos y
provocan la activación de la vía clásica del
complemento contribuyendo a la opsonización
de los microorganismos
11/0 /2020 11
Determinación de Proteína C
reactiva
Fundamento de la prueba
La prueba de PCR látex . Técnica de Sanger, et al.
(1957).
Las moléculas biológicamente inertes de poliestireno
látex son sensibilizadas con anti PCR obtenida de
animales por medio de inmunizaciones
La proteína C reactiva del suero del paciente es el
antígeno
Partículas de poliestireno cubiertas de anti PCR son
los anticuerpos
Cuando se mezclan suero del paciente y latex annti
PCR se produce una aglutinación detectable
macroscópicamente
11/0 /2020 12
Proteína C Reactiva
La proteína C reactiva se ha asociado a una
gran variedad de enfermedades infecciosas,
procesos inflamatorios no infecciosos y ciertos
procesos malignos
La prueba se usa en el seguimiento de
pacientes con fiebre reumática y artritis
reumatoide
La proteína C reactiva es positiva virtualemnete
en todas las infecciones agudas bacterianas, en
algunos estados neoplásicos y en varios tipos de
destrucción de tejidos como el infarto al miocardio. Ref.
Instructivo casa comercial. Bio Rad.
11/0 /2020 13
Factor reumatoide
La artritis reumatoide es un síndrome crónico de
etiología desconocida caracterizado por una inflamación
inespecífica y generalmente simétrica de las
articulaciones, que a veces evoluciona hacia la
destrucción de las estructuras articulares y
periarticulares
En las articulaciones dañadas se observa un
engrosamiento de la membrana sinovial con una
formación de pliegues y proliferación de linfocitos, estas
células que forman folículos linfoides son las
responsables de la síntesis de factores reumatoides
(FR) y otras inmunoglobulinas
11/0 /2020 14
Factor Reumatoide
Los FR son generalmente de tipo IgM antiIgG,
es decir reaccionan con las fracciones Fc de la
IgG
Los FR de tipo IgM están presentes en 85 al 90
% de los adultos con artritis reumatoide, aunque
no es específico de la enfermedad, ya que se ha
encontrado en el 3 al 5 % de personas sanas
También se han encontrado FR de tipo IgG pero
en mucha menor proporción
11/0 /2020 15
Fundamento del Método
El factor reumatoide de tipo IgM se
detecta en presencia de gama globulinas
o fracción II de Cohn (que en caso es el
antígeno), adsorbida sobre un soporte
inerte de látex poliestireno. Este antígeno
se une a los FR (antiIgG) produciendo una
aglutinación de las partículas de látex-
poliestireno, visible macroscópicamnte
11/0 /2020 16
Reacciones Febriles
Los antígenos febriles se usan para
detectar anticuerpos en el suero de
pacientes contra: Salmonella, Brucella y
Rickettsia (Rickettsia presenta reacción
cruzada con Proteus OX19).
Estas infecciones bacterianas inducen
fiebre en los pacientes, (Reacciones
febriles)
Aglutininas. Son anticuerpos que aglutinan
11/0 /2020 17
Reacciones Febriles
Reacción Widal: reacción de aglutinación
directa en la cual las bacterias son los
antígenos particulados que reaccionarán
con los anticuerpos presentes en el suero
de los pacientes
Reacción de Widal es útil en el
diagnóstico de fiebre tifoidea
11/0 /2020 18
Reacciones Febriles
Interpretación de Resultados:
Títulos de anticuerpos mayores o iguales
1:160 contra el antígeno O en Salmonella
typhi sugieren infección activa
Títulos mayores o iguales de 1:160 contra el
antígeno H sugieren infección pasada o
inmunización pasada
Titulos mayores de 1:160 contra el antígeno
Vi sugieren estado de portador
11/0 /2020 19
Reacciones Febriles
Reacción de Weil-Félix
Diagnóstico de tifo por Rickettsia typhi
Antígeno es una cepa de Proteus OX19
Reacción indirecta. Reacción cruzada
Reacción de Huddleson
Diagnóstico de Brucelosis
Antígeno Brucella abortus
Reacción cruzada
11/0 /2020 20
RPR. Prueba Rápida para el
diagnóstico de Reaginas
Fundamento
Es una prueba de floculación que se realiza en
suero o en plasma con un antígeno de
cardiolipìnas para la detección y titulación de
reaginas, (anticuerpos circulantes producidos
como resultado de daño al tejido causado por la
enfermedad
El antígeno se encuentra unido a partículas de
carbón activado. (Reacción visible
macroscópicamente)
Es una prueba inespecífica de diagnóstico en la
sífilis
11/0 /2020 21
Diagnóstico de una Enfermedad
Infecciosa
Enfermedades infecciosas como causa de
morbilidad y mortalidad
Los pacientes con sospecha de una
enfermedad infecciosa se realiza su
diagnóstico en base a:
Su historia clínica.
Diagnóstico por laboratorio
Diagnóstico clínico
11/0 /2020 22
SEROLOGÍA
RPR. P eba ida a a la
de e i aci de fili .
S e e la a
C ali a i a c a i a i a
F cil lec a
1
Fundamento de la técnica
¿Cuál es el antígeno?
¿ Cuál es el anticuerpo a detectar?
¿Qué son las reaginas?
¿ Qué es la floculación?
2
Proteína C Reactiva
¿ Qué es la proteína C reactiva ? Y cuál
es su utilidad diagnóstica?
¿ Qué es el antilátex proteína C
reactiva?, cómo actúa en la reacción
¿ Qué es la aglutinación?
3
Factor reumatoide
Q e el fac e a ide?
C l e el a ge c l el
a ic e e e a eacci ?
C l e la ilidad diag ica del
fac e a ide?
C l e el f da e de la eba?
4
Reacciones febriles.
U ilidad diag ica de la eacci e
feb ile
A ge ili ad
C e e a la eacci e
feb ile
Q ig ifica l de a ic e
C abe i e a i fecci ac i a
ec e d i l gic ?
5
Diagnóstico de una enfermedad
Infecciosa
Enfermedad infecciosa como causa de
morbilidad y mortalidad
Paciente con sospecha de una
enfermedad infecciosa se realiza un
diagnóstico basado en:
Historia clínica
Resultados de laboratorio
6
Serología
Los resultados del laboratorio son:
Informativos
Son válidos cuando son correctamente
interpretados
Cuando es útil la serología
Cuando el microorganismo no se puede cultivar
Cuando se han administrado antibióticos
previamente
Microorganismos difíciles de cultivar
Serología
Los métodos serológicos están basados en
que cuando una persona se infecta por un
microorganismo se produce una respuesta
inmune específica, (habitualmente producción
de anticuerpos)
Las técnicas serológicas están diseñadas para
detectar o cuantificar esta respuesta inmune
específica y así detectar e identificar al
microorganismo infectante
8
Serología
La c ica de diag ic e l gic
a ella e diag ica a e fe edad
i fecci a ili a d la e ecificidad de la
eacci e a ge -a ic e . E
c j ec ce c e l ga
La eacci e e l gica ie e e
ba ada e la de ecci de c lej
a ge -a ic e
El e del e fe e hace eacci a c
a ge cede e de dife e e
ic ga i , ech de la i fecci 9
Serología
Diferentes tipos de reacciones
serológicas
Aglutinación
Floculación
Precipitación
ELISA (Enzimoinmunoensayo)
Inmunofluorescencia
Inmunoelectroforesis
10
Serología
El resultado de una reacción antígeno
anticuerpo se expresa como título de
anticuerpos
Título de anticuerpos es la cantidad de
anticuerpos presentes en el suero del
paciente, es la más alta dilución del suero
que da reacción positiva, o lo que es lo
mismo , el inverso de la mayor dilución o
menor concentración del suero del enfermo
que presenta reacción positiva
11
Serología
Pa a a a eba e l gica c
diag ic debe de a e l
e d e a de e
La i e a d a e la fa e ac i a de la
e fe edad
La eg da d a e la c alece cia
U i ce e de c a ece el
l de a ic e i dica e c e i
ea diag ic de la e fe edad
12
Serología
O a a licaci de la e l g a e c a d e
ie e c ce i el acie e ha e ad e
c ac c ic ga i . E al aci
del e ad i l gic del h ed.
Fal i i : Reacci e c ada
U de la eacci e c ada . P e OX19
a a de e i a Ricke i i , diag ic de
fili RPR, diag ic de cle i
i fecci a
13
Pruebas cutáneas
Mide Linfocitos T sensibilizados.
Desencadenan en el huésped una respuesta
inmune celular, presentan la existencia de
una hipersensibilidad celular o tardía
Tuberculina
Brucealergeno
Genética Molecular en el diagnóstico de
infecciones.
14
Cultivo faríngeo
Objetivos de la
práctica
1. Obtener un exudado
faríngeo.
2. Aislamiento de colonias
bacterianas en medios
enriquecidos y selectivos.
3. Conocer la flora normal de
faringe
4. Identificar bacterias
patógenas de la muestra.
Utilidad diagnóstica del cultivo
faríngeo
Realizar diagnóstico de enfermedades infecciosas:
Puede ayudar a establecer los focos infecciosos en caso de:
Escarlatina
Fiebre reumática
Glomerulonefritis aguda
Se puede utilizar para detectar portadores de :
Streptococcus pyogenes
Neisseria meningitidis
Corynebacterium diphtheriae
Staphylococcus aureus
Flora de faringe
Flora normal Flora patógena
Streptococcus viridans Virus respiratorios
Lactobacillus Streptococcus pyogenes
Neisseria flava Corynebacterium diphtheriae
Staphylococcus coagulasa negativa Candida albicans
Veillonella Neisseria gonorrhoeae
Bacteroides, Fusobacterium Bacteroides-Fusobacterium-espitoquetas
(Angina de Vincent)
Peptostreptococcus, Peptococcus Neisseria gonorrhoeae
Micrococcus, Enterococos, espiroquetas, Neisseria meningitidis
bacilos difteroides
S. pneumoniae Haemophilus influezae tipo b
Neisseria meningitidis Staphylococcus aureus
Candida albicans Actinomicetos
Muestra • Inocular:
• Agar sangre
• Agar chocolate
Frotis Caldo
• Agar Vogel-
TyS
Johnson
Toma de la Aislamiento
muestra primario
• AS: Morfología de colonias y tipo de
hemólisis, frotis al Gram, resultados de
pruebas de bacitracina y optoquina,
prueba de catalasa.
• ACH: Morfologia de colonias, frotis al
gram y prueba de oxidasa.
• VJ: Morfologia de colonias, frotis al
Gram y prueba de coagulasa
Identificación
Obtención de la muestra
1. Utilizando un hisopo estéril frote firmemente la faringe, amígdalas y
cualquier área de inflamación, exudación o ulceración, sin tocar lengua ,
saliva u otra porción bucal.
2. Inocule un tubo con caldo de tripticaseína y
soya e incube a 37°/24 horas.
3. Con otro hisopo tome una nueva muestra
y extiéndala en un portaobjetos para teñir al
Gram y observar las bacterias y células del paciente.
Aislamiento primario
• Inocular una placa de Agar sangre y colocar
los discos de bacitracina y optoquina.
• Inocular una placa de agar chocolate.
• Inocular una placa de agar Vogel-Johnson.
• Incubar las placas a 37°C por 24 horas.
Pruebas de identificación
• Agar sangre:
- Morfología de colonias y
tipo de hemólisis.
- Frotis al Gram.
Sensibilidad a la bacitracina
Se utiliza como una prueba de
identificación de Streptococcus
pyogenes .
El crecimiento de los estreptococos
del Grupo A es inhibido por una
pequeña cantidad de bacitracina,
por lo que alrededor del disco se
produce una zona de inhibición del
desarrollo de un diámetro mayor a
15mm.
Prueba de la susceptibilidad al optoquín
-El hidrocloruro de etilhidrocupreína (optoquín), un derivado de la
quinina, se utiliza para diferenciar el neumococo de los
estreptococos alfa-hemolíticos, por su habilidad para inhibir
selectivamente su desarrollo en placas de agar sangre en
concentraciones de 5μg/ml.
- Los neumococos que rodean el disco son lisados por cambios de
la tensión superficial, creando un halo de inhibición.
Se considera una prueba positiva
cuando el halo de inhibición es
mayor a 14 mm.
Prueba de la catalasa
Se utiliza para comprobar la presencia de la enzima catalasa que se
encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas que contienen citocromo. La principal excepción es
Streptococcus.
Esta prueba se utiliza para diferenciar entre los siguientes géneros:
Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).
En un portaobjetos colocar una o dos colonias con el asa estéril y
agregar una gota de peróxido de hidrógeno.
Si se produce efervescencia por la
conversión del peróxido en agua y oxígeno,
la prueba es positiva.
Agar chocolate
- Morfología de las colonias
- Frotis al Gram
Morfología de las colonias de Neisseria sp. en agar chocolate
Microorganismo Colonia
Moraxella catarrhalis Grande, no pigmentada o gris, opaca, suave, consistencia
friable, puede moverse la colonia completa en la superficie del
agar.
Neisseria gonorrhoeae Pequeña, blanca grisácea, convexa, translúcida, con borde
entero o irregular.
N. meningitidis Mediana, suave, circular, húmeda, gris a blanca, las cepas
encapsuladas son mucoides.
N. cinerea Pequeña, blanca grisácea, translúcida, ligeramente granular.
N. flavescens Mediana, amarilla, opaca, suave.
N. lactamica Pequeña, no pigmentada o amarillenta, suave, transparente.
N. mucosa Grande, blanca grisácea a amarilla clara, translúcida, mucoide
por la cápsula.
N. polysaccharea Pequeña, blanca grisácea a amarilla clara, translúcida, elevada.
N. sicca Grande, no pigmentada, rugosa, seca, adherente
N. subflava Mediana, amarilla verdosa a amarilla, suave, borde entero.
Agar chocolate
Prueba de la oxidasa: Esta prueba sirve
para demostrar la presencia de la enzima
indofenol-oxidasa.
Durante la prueba la enzima oxidasa en
presencia de oxígeno, citrocromo C y una
solución de tetrametil-p-fenilendiamina al
1%, produce un compuesto púrpura llamado
indofenol.
Es positiva en el
género Neisseria.
Agar Vogel-Johnson
Staphylococcus aureus:
- Produce beta-hemólisis en agar sangre
- Pigmentación dorada es frecuente
- Coagulasa-positiva
-Fermentación de Manitol
- Reducción de telurito
- Catalasa positivo
-En agar Vogel-Johnson :
-Morfología de las colonias: Negras por la
reducción de telurito y el medio amarillo
por la fermentación del manitol.
-Frotis al Gram: cocos Gram positivos
en racimos
Prueba de la coagulasa
Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del
resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos).
La técnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada.
Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima
extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente
en el plasma sanguíneo similar a la protrombina,
dando lugar a un complejo análogo a la trombina
(coagulasa propiamente dicha) que reacciona con
fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en
ausencia de Ca2+.
La coagulasa ligada o factor de agregación actúa
directamente sobre el fibrinógeno y lo convierte
en fibrina. No requiere la presencia de
activadores plasmáticos.
1
CULTIVO FARINGEO
Introducción 13/08/2020
2
13/08/2020
CULTIVO FARINGEO
[Link]
3
13/08/2020
Cultivo Faríngeo
• Cultivo de muestra faríngea
▫ Es una prueba de laboratorio que se realiza para
aislar e identificar microorganismos que puedan
causar infección en la garganta
▫ Toma de Muestra
Indicaciones al paciente: Llegar en ayunas al
laboratorio sin aseo bucal
No estar tomando antibióticos
L a muestra se toma asépticamente
4
13/08/2020
Cultivo Faríngeo
• Se le solicita al paciente inclinar su cabeza
• Utilizar hisopo estéril y abatelenguas
• Se frota con el hisopo estéril a lo largo de la
parte posterior de la garganta cerca de las
amígdalas
• Se inocula primero en caldo y después en los
medios de cultivos seleccionados, se incuban por
24 horas a 37°C
5
13/08/2020
Cultivo Faríngeo
• Microscópico directo
▫ Diagnóstico preliminar: Se toma la muestra con
hisopo estéril y se hace rodar sobre un
portaobjetos, se deja secar al aire , se fija y se tiñe
al Gram
▫ Observar al microscopio
▫ Forma de reportar:
Se observaron escasas, moderadas o abundantes
células epiteliales. Escasos, moderados o
abundantes polimorfonucleares. Cocos o bacilos ,
(agrupación y reacción al Gram)
6
13/08/2020
Cultivo de Exudado Faríngeo
• El cultivo faríngeo se realiza en el laboratorio
cuando el médico sospecha de una infección en
la garganta. (faringitis por Streptococcus
pyogenes).
• Determinar el antibiótico de elección
• La presencia de flora bacteriana normal es un
hallazgo normal
• Presencia de bacterias patógenas generalmente
se trata de una infección
7
13/08/2020
Reporte del Cultivo faríngeo
• Datos del paciente: Nombre, edad, sexo, dirección,
teléfono.
• Nombre del examen solicitado
▫ Cultivo faríngeo
• Nombre del médico solicitante:
• Resultado:
• En el examen microscópico directo se observaron:
• En el cultivo se aisló:
▫ Streptococcus pyogenes beta hemolítico del grupo A
▫ Se aisló Flora bacteriana normal de la región
▫ Antibiograma
8
13/08/2020
Cultivo faríngeo
Nombre del paciente: Juan Pérez López
Edad 15 años Sexo: Masculino
Dirección Teléfono
Dr.____________________
Examen Solicitado. Cultivo faríngeo
Microscópico directo_______________
Cultivo: ________________________
Antibiograma
9
13/08/2020
AMIGDALITIS POR S. pyogenes
[Link]
10
13/08/2020
Cultivo
[Link]
11
13/08/2020
Diagrama de Flujo
[Link]
12
13/08/2020
S. pyogenes
13
13/08/2020
S. pyogenes
14
Aislamiento de S. aureus 13/08/2020
Muestra inicial. Caldo Tripticaseína y Soya.
Agar Vogel Johnson
Incubar a 37º por 24 hrs.
Colonias negras
Prueba de la coagulasa Gram.
positiva
S. aureus Cocos en racimos
Gram positivos
15
13/08/2020
Staphylococcus aureus
[Link]
.edu/courses/bio141/l
abmanua/lab15/msasa
.html
[Link]
icrobiologia/2008/02/23/85217
[Link]
mas_noticias/Infecciones_hospitalarias
16
13/08/2020
Cultivo faríngeo
[Link]
17
13/08/2020
Staphylococcus aureus
[Link]
ocs/111Review/Unit2Reviews/neisseriaceae_answers.h
tm
18
13/08/2020
Aislamiento de Neisseria sp
Muestra inicial.
Caldo
Tripticaseína y
Soya
Incubar a 37º por 24 hrs.
Agar chocolate
Prueba de la Fermentación de
Gram
oxidasa carbohidratos
Identificación de
Diplococos Gram
Positiva especies de
negativos
Neisserias
19
13/08/2020
[Link]
ct/images/[Link]
20
Neisseria sp 13/08/2020
[Link]
BI_Bacteriology/NS_Neisseria/M_BI_NS
_07small.jpg
21
S. pneumoniae 13/08/2020
Muestra
original
Agar sangre
Azida de
Sodio Incubar a 37º por 24 hrs.
Taxo PN
Taxo A. Gram
(optoquin).
Diámetro de Dm. De
inhibición de inhibición 18 Diplococos
15 mm. mm. Gram
positivos
S.
S. pyogenes
pneumoniae
22
13/08/2020
S. pneumoniae
Infecciones del
aparato
gastrointestinal
Coprocultivo
Flora normal intestinal
Intestino delgado Colon
Estreptococos Anaerobios: Bacteroides,
Lactobacilos, Clostridium, Peptostreptococcus,
Levaduras Bifidobacterium y Eubacterium
101-103/ml
Aerobios: Escherichia coli, otras
enterobacterias, enterococos,
Ileon: 106-107/ml estreptococos.
Enterobacteriaceae 1011-1012 ufc/g de heces
Bacteroides spp.
PRINCIPALES AGENTES DE LAS INFECCIONES
ENTÉRICAS
Microorganismo Presentación clínica Mecanismo patogénico Leucocitos
fecales
Bacillus cereus Intoxicación: vómito Ingestión de toxina -
o diarrea preformada
Clostridium botulinum Parálisis Ingestión de toxina -
neuromuscular preformada
Staphylococcus aureus Intoxicación: vómito Ingestión de toxina -
preformada
Clostridium Diarrea Ingestión del organismo -
perfringens y producción de toxina
Aeromonas Diarrea o disentería ?Enterotoxina -
?Citotoxina
Campylobacter spp. Disentería ?Invasión +
?Citotoxina
Clostridium difficile Disentería Enterotoxina y +/-
citotoxina
PRINCIPALES AGENTES DE LAS INFECCIONES
ENTÉRICAS
Microorganismo Presentación Mecanismo patogénico Leucocitos
clínica fecales
Escherichia coli:
Enteropatógena Diarrea Adherencia/?Invasión -
Sin multiplicación
Enterotoxigénica Diarrea Enterotoxina -
Enteroinvasiva Disentería Invasión, enterotoxina +
Enterohemorrágica Diarrea acuosa Citotoxina -/+
con sangre
Plesiomonas shigelloides ?Disentería ?Enterotoxina +/-
Salmonella spp. Disentería Invasión +
Salmonella typhi Fiebre entérica Penetración +
(monocito)
Shigella spp. Disentería Invasión +
Shigella dysenteriae Intoxicación: Ingestión de toxina -
vómito o diarrea preformada
PRINCIPALES AGENTES DE LAS INFECCIONES
ENTÉRICAS
Microorganismo Presentación clínica Mecanismo patogénico Leucocitos
fecales
Vibrio cholerae Diarrea Enterotoxina -/+
Citotoxina
Yersinia enterocolitica Diarrea y/o fiebre ?Invasión -
entérica ?Penetración
Giardia lamblia Diarrea acuosa Ingestión de toxina -
preformada
Cryptosporidium Diarrea Ingestión del organismo -
parvum y producción de toxina
Entamoeba histolytica Disentería Enterotoxina -/+
Citotoxina
Rotavirus Diarrea Enterotoxina -
Citotoxina
Norovirus Diarrea Enterotoxina y -
citotoxina
COPROCULTIVO
• Inocular la muestra en: caldo de tetrationato y en agar EMB y SS.
Aislamiento • Incubar a 37°C por 24 horas.
primario
• Del agar SS o EMB seleccionar las colonias no fermentadoras de la
lactosa e inocular el sistema de reacciones bioquímicas.
Selección de • Del caldo de tetrationato inocular Agar verde brillante.
colonias
sospechosas • Incubar a 37°C por 24 horas.
• Leer los resultados de las reacciones bioquímicas e identificar la
bacteria aislada.
Identificación de • Si aisla una colonia transparente con halo rojo en agar verde brillante
enterobacterias realizar las pruebas bioquímicas e incubar a 37°C por 24 horas.
• Interpretar los resultados de las reacciones bioquímicas e
identificar la bacteria aislada.
Reportar los
resultados • Reportar el resultado del coprocultivo.
Agar de triple azúcar hierro
(TSI)
Este medio se utiliza para determinar la
capacidad de un organismo de fermentar
glucosa, lactosa y/o sacarosa, con
formación de ácido y gas y también para
detectar la producción de ácido
sulfhídrico.
Contiene lactosa y sacarosa en una concentración del 1% y glucosa en una
concentración del 0.1%. Algunos organismos son capaces de fermentar sólo la
glucosa, otros glucosa, lactosa y/o sacarosa y otros no fermentar alguno de los tres.
Esta fermentación puede ocurrir con producción de gas o sin ella.
Resultados:
Fondo amarillo y superficie roja: fermentación de la glucosa.
Fondo amarillo y superficie amarilla: fermentación de la glucosa, de la lactosa y/o
sacarosa.
Fondo rojo y superficie roja: Ningún carbohidrato es fermentado.
Agar de triple azúcar hierro
(TSI)
La producción de gas, dióxido de carbono (CO2)
e hidrógeno (H2), se detecta por la presencia de
burbujas en el medio.
Producción de ácido sulfhídrico
Ciertas bacterias heterotróficas son capaces de liberar azufre de los aminoácidos que lo
contienen, produciendo acido sulfhídrico gaseoso.
Ej. El catabolismo anaeróbico de la cisteína produce ácido sulfhídrico, ácido pirúvico y
amonio.
+ H2O cisteína desulfurasa + H2S + NH3
Cisteína Ácido pirúvico
El ácido sulfhídrico es incoloro, de tal forma que se requiere un sistema indicador para
detectar su producción.
H2S + Fe3+ FeS
Precipitado negro
Interpretación:
Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio
Prueba negativa: Ausencia de ennegrecimiento
Agar de Simmons Citrato
Se utiliza para determinar si un microorganismo es
capaz de utilizar el citrato como única fuente de
carbono.
El medio contiene citrato como única fuente de
carbono y sales inorgánicas de amonio como fuente
de nitrógeno que al ser degradadas producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos que inducen a
que el piruvato se transforme en acetato y formato
y que el indicador azul de bromotimol vire a color
azul.
Interpretación:
Prueba positiva: crecimiento con un color azul intenso en la superficie.
Prueba negativa: sin crecimiento, ni cambio de color (verde).
En Enterobacter aerogenes la reacción es:
4 citrato 7 acetato + 5 CO2 + formato + succinato
Agar de Hierro Lisina (LIA)
Se utiliza para determinar la capacidad de una
bacteria de descarboxilar o desaminar la lisina y
producir ácido sulfhídrico.
Descarboxilación:
Lisina Cadaverina
Interpretación:
Prueba positiva: Fondo y superficie púrpura
Prueba negativa: Fondo amarillo (fermentación
de la glucosa) superficie púrpura
Desaminación de la lisina:
Interpretación:
Prueba positiva: Superficie color vino, fondo amarillo.
Esta reacción es característica de Proteus y Providencia spp., que son los únicos
miembros de la familia Enterobacteriaceae que desaminan la lisina.
Agar de Hierro Lisina (LIA)
Producción de ácido sulfhídrico.
Determinar si se libera H2S por la acción enzimática
sobre los aminoácidos que contienen azufre.
Interpretación:
Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio
Prueba negativa: Ausencia de ennegrecimiento
Reacción:
Primera etapa:
Bacteria (ambiente ácido) + tiosulfato de sodio H2S
Segunda etapa:
H2S + iones férricos FeS (precipitado negro)
Medio Sim: Azufre, Indol, Motilidad
Se utiliza para determinar la producción de
ácido sulfhídrico, la producción de indol y la
motilidad.
Producción de indol:
1.
Triptofanasa
+ NH3
Indol
2. p-dimetilaminobenzaldehido + Indol Color rojo
MEDIO MIO
Medio usado para la identificación de Enterobacteriaceae con
base en su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y
producción de indol.
Debido a la fermentación de la glucosa se reduce el pH produciendo una
condición ácida y originando que el indicador de pH púrpura de bromocresol vire
a amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones óptimas para la actividad
de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por
decarboxilación, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador
hacia el color púrpura.
Resultado positivo: Color púrpura
Resultado negativo: Medio
amarillo
MEDIO MIO
Medio usado para la identificación de
Enterobacteriaceae con
base en su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y
producción de indol.
El indol, es producido a partir del triptófano por los microorganismos que
contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de
agregar unas gotas de reactivo de Kovac´s o de Erlich, indica un resultado
positivo.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-
amarillento.
Prueba de la ureasa
Determinar la habilidad de un organismo de degradar la
urea en dos moléculas de amonio por la acción de la
enzima ureasa.
Interpretación:
Prueba positiva: Color rosa intenso.
Prueba negativa: Sin cambio de color.
+ 2 H2O ureasa CO2 + H2O + 2 NH3
Prueba de rojo de Metilo
Se utiliza para probar la habilidad de un organismo de
producir y mantener productos finales ácidos de la
fermentación de la glucosa.
2 glucosa + H2O 2 ácido láctico + ácido acético + etanol + 2 CO2 + 2 H2
-Resultado positivo: Color rojo al agregar unas gotas de rojo de metilo
- Resultado negativo: Color amarillo con unas gotas de rojo de metilo
Caldo MR-VP
Se utiliza para realizar las pruebas de
Voges-Proskauer y rojo de metilo.
La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad de
algunos organismos de producir un producto final neutro, el
acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la fermentación
butilenglicolítica de la glucosa.
Resultado positivo: Color rojo al agregar α-naftol y KOH-creatina
Resultado negativo: Color amarillo al agregar α -naftol y KOH-creatina
Prueba del rojo de Metilo
La prueba del rojo de metilo sirve
para comprobar la capacidad de
un organismo de producir y
mantener estables los productos
terminales ácidos de la
fermentación ácido mixta de la
glucosa.
Resultado positivo: Color rojo al agregar rojo de metilo
Resultado negativo: Color amarillo al agregar rojo de metilo
Los integrantes de la familia Enterobacteriaceae,
pueden fermentar la lactosa o no
No fermentadores Fermentadores
Salmonella Escherichia
Shigella Enterobacter
Edwarsiella Citrobacter
Hafnia Serratia (algunas
Proteus veces)
Providencia Klebsiella (excepto K.
Yersinia rhinoscleromatis)
Morganella
Lactosa
Indol Glucosa
Motilidad
Pseudomonas
Citrato Urea
⁻
Urea H2S
Klebsiella Enterobacter
Citrobacter Escherichia
Proteus
Providencia Salmonella Shigella
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