Universidad Autónoma de Sinaloa
Facultad de ciencias químico biológicas
Biotecnología Genómica
Dr. Jesús Parra Unda
Genómica estructural
Trabajo: Electroforesis nativa en geles de poliacrilamida
Alumna: Gutierrez Parra Ariana
Electroforesis nativa en geles de poliacrilamida
Introducción
La electroforesis nativa en geles de poliacrilamida, conocida como PAGE
(Polyacrylamide Gel Electrophoresis), es una técnica analítica ampliamente
utilizada en bioquímica y biología molecular. Su importancia radica en la capacidad
de separar biomoléculas, como proteínas, en función de su carga, tamaño y forma,
sin alterar su estructura nativa. Esto la convierte en una herramienta crucial para el
estudio de interacciones proteína-proteína y la funcionalidad de las biomoléculas en
su estado natural.
La electroforesis nativa se diferencia de otras técnicas similares, como SDS-PAGE,
al no emplear agentes desnaturalizantes, lo que permite mantener la conformación
original de las proteínas
Principios fundamentales
La electroforesis se basa en la migración de partículas cargadas bajo la influencia
de un campo eléctrico. Las proteínas con carga neta distinta a su punto isoeléctrico
migran hacia el electrodo de carga opuesta. La velocidad de migración depende de:
La carga de la molécula.
El gradiente de potencial eléctrico aplicado.
El tamaño y forma de la proteína, factores que afectan el coeficiente de
fricción.
Materiales y reactivos necesarios
Para llevar a cabo la electroforesis nativa, se requiere equipamiento especializado
como cámaras de electroforesis, fuentes de poder y reactivos específicos como:
Acrilamida y bis-acrilamida.
TEMED y persulfato de amonio (iniciadores y catalizadores de la
polimerización).
Tampón de electroforesis, como Tris-Glicina.
Azul de Coomassie para la visualización de proteínas.
Metodología
El procedimiento general incluye varias etapas:
Preparación del gel: Se mezclan los reactivos y se polimerizan en un molde
durante 30-60 minutos.
Preparación de la muestra: Las proteínas se diluyen en un tampón que
preserva su conformación nativa y se cargan en los pocillos del gel.
Configuración de la cámara de electroforesis: El gel se coloca en la cámara,
que se llena con tampón de electroforesis antes de conectar los electrodos y
aplicar el voltaje.
Ejecución de la electroforesis: Las proteínas migran a través del gel bajo el
campo eléctrico, separándose según sus propiedades.
Visualización: Se tiñe el gel para observar las bandas proteicas o realizar
análisis específicos como zimogramas.
Ventajas y limitaciones
Ventajas: Alta resolución, versatilidad para diferentes biomoléculas, facilidad
de visualización y bajo consumo de muestra.
Desventajas: Requiere equipamiento costoso, condiciones controladas
estrictas, y puede verse afectado por contaminantes o impurezas.
Conclusión
La electroforesis nativa en geles de poliacrilamida es una técnica poderosa y versátil
que ha revolucionado el análisis de biomoléculas en su estado funcional. Su
capacidad para preservar la estructura nativa de las proteínas la hace indispensable
en estudios de interacciones moleculares y funcionalidad en biotecnología
genómica. Sin embargo, su implementación requiere habilidades técnicas y un
control riguroso de las condiciones experimentales para maximizar los resultados.
La adopción de esta técnica en laboratorios de investigación y su continuo
perfeccionamiento han expandido las fronteras del conocimiento en biología
molecular, contribuyendo al desarrollo de nuevas aplicaciones terapéuticas y
biotecnológicas.
Referencias
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