Química analítica e instrumental: trabajo de investigación.

Tema: microscopia electrónica de barrido e ICP-MS

Microscopía electrónica de barrido

Fundamento
La microscopía de barrido de electrones (MEB) es una técnica de análisis superficial, que
consiste en enfocar sobre una muestra un fino haz de electrones. El haz de electrones se desplaza
sobre la superficie de la muestra realizando un barrido que obedece a una trayectoria de líneas
paralelas. La muestra (salvo que ya sea conductora) está generalmente recubierta con una capa
muy fina de oro o carbón, lo que le otorga propiedades conductoras. La técnica de preparación de
las muestras se denomina “sputtering” o pulverización catódica.
La interacción del haz de electrones con la muestra produce diversas señales,
principalmente de electrones retrodispersados, electrones secundarios, radiación
electromagnética (rayos X) y otras partículas menos significativas; las cuales podrán ser recogidas
de acuerdo a los detectores presentes en el microscopio (cada detector capta un tipo de señal), y
permitirá la visualización, caracterización y microanálisis superficial de la muestra, sea esta
orgánica o inorgánica.

Instrumental
1) Fuente de electrones: puede ser un cañón termoiónico (filamento de tungsteno o de
hexaboruro de lantano) o un cañón de emisión de campo FEG (Field Emission Gun).
2) Sistema de lentes: los electrones salen del cañón, y se enfocan mediante lentes, cuya
función es reducir la imagen del filamento, de manera que incida en la muestra un haz de
electrones lo más pequeño posible (para así tener una mejor resolución).
3) Detector: capta las señales producidas por la interacción entre los electrones y la
muestra, cada detector capta un tipo de señal. En general se conocen tres:
– Detector de electrones secundarios (SEI – Secundary Electron Image): ofrece una imagen
en blanco y negro de la topografía de la superficie examinada. Esta señal es la más adecuada para
la observación de la muestra pues permite obtener las imágenes de más alta resolución.
– Detector de electrones retrodispersados (BEI – Backscattered Electron Image): ofrece
una imagen de la topografía de la superficie de mayor contraste aunque de menor resolución. Su
ventaja consiste en que es sensible a las variaciones en el número atómico de los elementos
presentes en la superficie. Si tenemos una superficie totalmente lisa observaremos distintos tonos
de gris en función de que existan varias fases con distintos elementos.
– Detector de energía dispersiva (EDS – Energy Dispersive Spectrometer): detecta los rayos
X generados. Como la energía de cada rayo X es característica de cada elemento, permite obtener
información analítica cualitativa y cuantitativa de la composición de la muestra. Por ello se conoce
esta técnica como Microanálisis por EDS.1
4) Amplificador: la magnificación de la imagen se produce por un conjunto de lentes
electromagnéticas que mediante un tratamiento adecuado de las señales electrónicas son
proyectadas en un tubo de rayos catódicos (CRT).
5) Monitor: permite visualizar la imagen captada.

Ventajas
– Su gran profundidad de campo que le da apariencia tridimensional a las imágenes
permitiendo enfocar y observar amplias zonas de la muestra al mismo tiempo.
– Puede producir imágenes de alta resolución (de hasta 3 nm), es decir, que detalles muy
cercanos en la muestra pueden ser observados separadamente a alta magnificación.
– Se pueden observar muestras de tamaños desde centímetros hasta muestras del orden
de nanómetros. La escasa porción de muestra que se necesita para el análisis lo convierte
prácticamente en un ensayo no destructivo.
– Sus aplicaciones son múltiples y muy útiles, por área de estudio: arqueología, ciencia de
materiales, análisis de fallas, corrosión y desgaste, fibras y textiles, metalurgia, nanotecnología,
recubrimientos, películas delgadas, interfaces, semiconductores, tribología, ciencias biológicas,
ciencias básicas, ciencias biomédicas, biotecnología, farmacia, medicina, odontología, ciencias
forenses, estudios geológicos, ingeniería civil, ingeniería eléctrica y electrónica, ingeniería de
alimentos, ingeniería mecánica, ingeniería química, etc.

Limitaciones
– Por las características de funcionamiento de este tipo de equipos, se requiere que las
muestras sean conductoras y que estén libres de humedad.
– Si las muestras no son conductoras deben metalizarse antes el ensayo.
– El ensayo debe realizarse en condiciones de vacío lo que impide ensayar muestras que
no sean estables a baja presión. Esto se debe a que, si la trayectoria de los electrones no se da en
el vacío, los electrones colisionarían con las moléculas de aire y serian absorbidos.
– No pueden ensayarse muestras contaminadas o que puedan desprender gases bajo
presión.
– No es posible observar la estructura interna y detalles ultra-estructurales de las
muestras, para esto se requiere un Microscopio de transmisión de electrones MET o TEM
(Transmission Electron Microscopy).2

1
Un instrumento similar y complementario de este es el detector de rayos X (WDS), que en vez de recibir y
procesar la energía de todos los rayos X a la vez, únicamente se mide la señal que genera un solo elemento.
Esto hace que esta técnica, aunque más lenta, sea mucho más sensible y precisa que la de EDS. Realmente
son complementarias, pues el EDS ofrece una buena información de todos los elementos presentes en la
superficie de la muestra y el WDS es capaz de resolver los picos de elementos cuyas energías de emisión
estén muy cercanas, así como detectar concentraciones mucho más pequeñas de cualquier elemento y,
sobre todo, de los ligeros.
2
Para salvar estos inconvenientes se creó la microscopía electrónica de barrido ambiental o ESEM.
Denominada así porque las muestras pueden ensayarse en condiciones de presión ambientales, es decir, a la
presión atmosférica o muy cercana a su valor. Igualmente, ya no es necesario metalizar la muestra para
obtener una imagen de alta resolución, además de disponer de un analizador de gases (BSED). Para más
información ver: [Link]
esem-vs-sem/
 Aplicaciones prácticas en Criminalística
La microscopia electrónica de barrido presenta aplicaciones prácticas en Criminalística en
tres grandes campos:
– Balística: permite la observación de las vainas (fondo de percusión) y de las balas (rayas
y estrías). Cuando el microscopio esta acoplado a un microanalizador X, es posible analizar los
residuos de tiro (plomo, bario, antimonio).
– Biología: permite el examen de las diversas fibras, cabellos y pelos.
– Documentología: permite la determinación del orden de aplicación de los trazos, la
caracterización de las cintas carbónica de las máquinas de escribir, el examen de la disposición de
las fibras de un papel, etc.

Espectrometría de Masas: ICP-MS

Procedimiento general
La muestra líquida es vaporizada e ionizada gracias a un plasma de Ar. Los iones una vez
formados pasan al espectrómetro de masas donde son separados mediante un analizador y
detectados.

Instrumental
1) Sistema de introducción de muestra: la mayoría de las aplicaciones del ICP-MS
involucran el análisis de muestras líquidas, a pesar de que se ha podido adaptar la técnica para el
análisis de sólidos. Si bien existen muchas formas de introducir una muestra líquida al equipo,
todas ellas terminan generando un aerosol fino a partir de la muestra, que puede ser ionizado
eficientemente en el plasma.
2) Plasma y bobina de radiofrecuencias: el plasma es generado pasando argón a través de
la antorcha, la cual es una serie de tres tubos concéntricos usualmente de cuarzo y que se
encuentra envuelta en un extremo por una bobina de radiofrecuencias.
3) Interface: La función de la interface es permitir que el plasma y el sistema de lentes
puedan coexistir; así como que los iones generados por el plasma, a altas temperaturas y presión
atmosférica, pasen a la región de las lentes, a temperatura ambiente y alto vacío.
4) Sistema de vacío: el sistema de vacío se encarga de remover las moléculas de gas
presentes dentro del espacio que existe entre la interface y el detector del equipo.
5) Lente de iones: la función de esta parte del equipo de ICP-MS es la de transportar el
máximo número de iones analitos de la región de interfase al dispositivo de separación de masas,
al mismo tiempo que rechaza la mayor cantidad de componentes de la matriz y especies que no
son analitos. Estos lentes no son lentes ópticos tradicionales, sino que son una serie de platos,
barriles o cilindros metálicos que tienen un potencial fijo en ellos.
6) Celda de reacción/colisión: la celda de reacción, también denominada celda de colisión,
es empleada en los equipos de ICP-MS para detener la aparición de interferencias espectrales
ocasionadas por el argón.
7) Espectrómetro de masas: el espectrómetro separa los iones monocargados de cada
isótopo de acuerdo a su masa.
 8) Detector: los dos tipos de detectores más empleados en los equipos de ICP-MS son los
sistemas multiplicadores de electrones, para un bajo número de cuentas, y los colectores de
Faraday, para un alto número de cuentas. Los multiplicadores de electrones funcionan generando
una cascada de electrones secundarios a partir del impacto de un ion en el detector, generando
una corriente eléctrica proporcional a la cantidad de impactos de iones del analito, la cual es
medida y relacionada con la concentración de analito.

Aplicaciones en Criminalística
– Análisis de residuos de disparo en mano mediante el uso de la técnica de espectrometría
de masas inducida por plasma (ICP-MS).
– Se utiliza la técnica de ICP-MS para identificación de compuestos de explosivos de bajo
poder como pólvoras, cloratos y nitrato de amonio (ANFO).
– La espectrometría de masas con fuente de plasma ICP (ICP-MS) permite llevar a cabo la
determinación multielemental de pequeñas cantidades de elementos (pico/g) presentes en la
muestra con la precisión y exactitud necesarias para, posteriormente, y con la ayuda de los
métodos estadísticos adecuados, poder relacionar sospechoso, prueba forense y escenario del
crimen.

Bibliografía:
– BUQUET, Alain; Manual de criminalística moderna: la ciencia y la investigación de la
prueba, trad. por Víctor Goldstein, Ed. Siglo XXI, México, 2006, p. 111. Dirección web:
[Link]
id=cGHmp0O7fakC&pg=PA111&lpg=PA111&dq=microscopio+electr
%C3%B3nico+de+barrido+aplicacion+en+criminalistica&source=bl&ots=A9WXmhVuZL&sig=Visg2F
3RqWL2qT-skhtqTe68sXs&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiOjZDj3pnXAhXMHpAKHYDZAAAQ6AEIOTAD#v=onepage&q=microscopi
o%20electr%C3%B3nico%20de%20barrido%20aplicacion%20en%20criminalistica&f=false

– Química forense, mult. aut., Ed. Fiscalía general de la nación, Colombia, pp. 11, 39.
Dirección web: [Link]
[Link]

– [Link]

– [Link]
barrido-sem-i-concepto-y-usos/

– [Link]
iii-esem-vs-sem/

– [Link]

– [Link]
icp-ms

– [Link]

– [Link]