“Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra Independencia, y de la
conmemoración de las heroicas batallas de Junín y Ayacucho”
Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo
Facultad de Ciencias Biológicas
Especialidad de Microbiología
Microbiología de los Alimentos
Informe de practica 4
Tema: Determinación de bacterias viables por el
método de reducción de colorantes
Alumno:
✓ Ortiz Carrasco Luis Fernando
Ciclo Académico: 2024-II
Docente: Dra. Graciela Olga Albino Cornejo
Lambayeque
2024
INTRODUCCIÓN:
La determinación de bacterias viables mediante el método de reducción de colorantes es
una técnica ampliamente utilizada en microbiología para estimar la cantidad de células
bacterianas vivas en una muestra. Este método se basa en la capacidad de las bacterias
viables para reducir ciertos colorantes, como el azul de metileno o el rojo neutro, de su
forma oxidada a su forma reducida. La reducción del colorante se debe a la actividad
enzimática de las bacterias, que utilizan el colorante como aceptor de electrones en su
metabolismo.
La técnica de reducción de colorantes se realiza generalmente en medios de cultivo
líquidos. Se añade una cantidad conocida de colorante al medio de cultivo y se incuba
con la muestra bacteriana durante un tiempo determinado. Después de la incubación, se
mide la cantidad de colorante reducido, que es directamente proporcional al número de
bacterias viables presentes en la muestra. Este método es relativamente sencillo y
económico, lo que lo convierte en una herramienta útil para la evaluación de la viabilidad
bacteriana en diversas aplicaciones, como la industria alimentaria, la investigación
médica y el control de calidad.
OBJETIVOS:
✓ Realizar la prueba de reductasa para medir la calidad del producto
METODOLOGÍA E INSTRUMENTOS:
Material biológico
✓ Muestra líquida: leche.
Material de laboratorio
✓ Tubo estéril con tapa rosca.
✓ Pipeta de 1ml y de 10ml.
✓ Solución de azul de metileno.
✓ Baño maría a temperatura de 37º C.
✓ Gradilla.
✓ Tubo de control positivo y negativo
METODOLOGÍA:
1. Verificar el baño maría a 37º C.
2. Homogenización de la muestra de leche (20 veces)
3. Colocar 10 ml de leche en el tubo tapa rosca.
4. Agregar 1 ml de azul de metileno, cerrar y homogenizar.
5. Colocar el tubo en una gradilla en el baño María a 37º C, comparando con los
6. tubos control que se preparan Leche cruda sin colorante, que será el control
positivo (CP).
7. Controlar cada 30 minutos por cuatro horas, hasta que este decolorado
RESULTADOS:
Tubo con la muestra homogenizada lista para someter a baño María
Tubo a la primer media hora
Tubo a la segunda media hora
Tubo a tercera media hora
Tubo a la cuarta media hora
CONCLUSIONES
✓ Las observaciones del experimento, donde el tubo que contenía leche
homogenizada con azul de metileno se fue blanqueando progresivamente hasta
volverse completamente blanco a las dos horas, sugieren un crecimiento
significativo de bacterias viables en la leche.
✓ La reducción del colorante azul de metileno por parte de las bacterias, que utilizan
el colorante como aceptor de electrones en su metabolismo, indica la presencia de
una población bacteriana activa y en crecimiento.
✓ La velocidad de blanqueamiento del tubo, que se intensificó con el tiempo, sugiere
una proliferación bacteriana exponencial. Este resultado es coherente con el
comportamiento típico de las bacterias en un medio nutritivo como la leche, donde
las condiciones son favorables para su crecimiento.
✓ La decoloración completa del tubo a las dos horas indica una alta concentración
de bacterias viables en la leche, lo que podría ser un indicador de contaminación
bacteriana significativa o un proceso de fermentación en curso.
ACTIVIDADES
1. Que otras muestras liquidas se puede utilizar este método?
Además de la leche, el método de reducción de colorantes se puede utilizar para
determinar bacterias viables en una variedad de otras muestras líquidas, incluyendo:
• Agua: Tanto agua potable como agua contaminada se pueden analizar para
determinar la presencia de bacterias viables.
• Jugo: El jugo de frutas, especialmente los jugos no pasteurizados, puede ser un
buen caldo de cultivo para bacterias.
• Vino: La presencia de bacterias en el vino puede afectar su sabor y calidad.
• Cerveza: Las bacterias pueden causar problemas de sabor y turbidez en la
cerveza.
• Suero sanguíneo: El método de reducción de colorantes se utiliza para
determinar la presencia de bacterias en el suero sanguíneo, lo que puede indicar
una infección.
• Orina: La presencia de bacterias en la orina puede indicar una infección del
tracto urinario.
2. Cuál es la calidad del alimento?
Basándonos en la observación de que la leche homogenizada con azul de metileno se
blanqueó completamente en dos horas, podemos concluir que la calidad del alimento es
mala y no es apta para el consumo.
La decoloración rápida del azul de metileno indica una alta concentración de bacterias
viables en la leche. Esto sugiere que la leche ha sido contaminada por bacterias, lo que
podría provocar enfermedades transmitidas por alimentos si se consume.
La leche de buena calidad debería resistir la decoloración del azul de metileno durante
un tiempo mucho más prolongado, lo que indica una baja concentración de bacterias.
Es crucial priorizar la seguridad alimentaria y evitar consumir alimentos que presenten
signos de deterioro, como la decoloración rápida del azul de metileno.
3. A qué número de microorganismos equivale el calificativo que se ha
obtenido?
Es imposible determinar el número exacto de microorganismos presentes en la leche
solo con la información de que el azul de metileno se decoloró completamente en dos
horas.
El método de reducción de colorantes es una prueba cualitativa, no cuantitativa. Es
decir, nos indica la presencia o ausencia de bacterias, pero no nos da una cifra exacta de
su cantidad.
Para determinar el número exacto de microorganismos, se requiere realizar un conteo de
colonias en placas de Petri, utilizando técnicas de cultivo microbiológico.
Sin embargo, podemos decir que la leche que se decoloró en dos horas tiene una alta
concentración de bacterias viables, mucho mayor que la que se consideraría aceptable
para una leche de buena calidad.