UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO
Instrumentación de Laboratorio
Docente: Ing. Danaisy Cabrera Mg.
UNIDAD 1
INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL
CONTENIDOS
✓Componentes básicos de un instrumento
de medición.
✓Clasificación de las técnicas analíticas.
RECORDATORIO DE LA CLASE ANTERIOR
• Química analítica • Técnica
• Muestra • Procedimiento analítico
• Analito • Protocolo
• Análisis • Métodos
• Tipos de análisis: cualitativo y • Clasificación de los métodos
cuantitativo analíticos
• Muestreo • Principales técnicas analíticas
CLASIFICACIÓN DE TÉCNICAS ANALÍTICAS:
Técnicas
analíticas
Técnicas
Técnicas
Químicas/Clásicas
Instrumentales
cromatográficas
volumétricas y electroforéticas
Electroquímicas
Gravimétricas Espectroscópicas
MÉTODOS INSTRUMENTALES:
➢Emplean mediciones de las propiedades físicas de los analitos,
tales como conductividad, potencial del electrodo, absorción
o emisión de la luz, razón masa – carga, fluorescencia, a través
del uso de un instrumento.
Un instrumento para el análisis químico debe:
➢ convertir la información almacenada de las características
físicas o químicas del analito en información que puede ser
manipulada e interpretada por el ser humano.
➢ El instrumento es un dispositivo de comunicación entre el
sistema bajo estudio y el investigador.
INSTRUMENTOS PARA EL ANÁLISIS:
➢ Para obtener información del analito es necesario proveerle un
estímulo, generalmente en forma de energía electromagnética,
eléctrica, mecánica o nuclear.
➢ El estímulo sobre el sistema bajo estudio genera una respuesta que
aportará información analítica.
INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS:
• El proceso se origina por medio de una fuente de energía que incide
a la muestra y esta proporciona una señal analítica que va dirigida
a un dispositivo de detección para luego procesar los datos.
Todo instrumento de medición está constituido por cuatros
componentes básicos:
Señal analítica
GENERADOR DETECTOR
Señal de entrada
ó transducida
Señal de salida ó
procesada
PROCESADOR
DISPOSITIVO DE
LECTURA
GENERADORES DE SEÑALES:
• La señal en un instrumento analítico proviene de la interacción del analito
con energía, como radiación electromagnética, electricidad o energía
térmica.
• Esta señal se genera en el generador de señales, que es específico para
cada tipo de instrumento y requiere comprender las propiedades físicas
de los componentes, las propiedades químicas del analito y las
características de la muestra matriz.
Señal analítica
GENERADOR DETECTOR
Señal de entrada
ó transducida
Señal de salida ó
procesada
PROCESADOR
DISPOSITIVO DE
LECTURA
DETECTOR O TRANSDUCTOR DE ENTRADA :
• Son dispositivos que transforman la energía resultante de la interacción
del generador de señales con la propiedad del analito (señal analítica),
física o química, en una señal eléctrica.
Señal analítica
GENERADOR DETECTOR
Señal de entrada
ó transducida
Señal de salida ó
procesada
PROCESADOR
DISPOSITIVO DE
LECTURA
DETECTORES O TRANSDUCTORES DE
ENTRADA:
PROCESADOR DE SEÑALES:
• Recibe la información del detector, la convierte eléctricamente a una
forma más significativa. En muchas ocasiones se producen
simplemente operaciones de amplificación y filtrado de la señal.
Módulos de transformación de señal
Amplificación Conversión digital-analógica
Atenuación Integrada
Comparación Rectificación
Conteo Adición
Conversión corriente-voltaje Conversión voltaje-corriente
Diferenciación (Derivación) Conversión voltaje-frecuencia
DISPOSITIVO DE LECTURA O
TRANSDUCTORES DE SALIDA:
• Este dispositivo convierte la señal procesada
(eléctrica) en otra señal comprensible para el analista.
• Esta información puede mostrarse o registrarse por
medio de diferentes dispositivos, en forma analógica o
digital.
Componentes de un espectrofotómetro
CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS
INSTRUMENTALES:
Técnicas electroanalíticas
Técnicas ópticas de análisis
Técnicas de separación
TÉCNICAS ELECTROANALÍTICAS:
➢Son técnicas instrumentales
de análisis que emplean las
propiedades electroquímicas
de una disolución para
determinar la concentración
de un analito.
TÉCNICAS ELECTROANALÍTICAS:
➢Se basan en la interacción de la corriente eléctrica y la
materia y presentan, en general, buena selectividad y
sensibilidad, y son menos costosas que otros tipos de
técnicas.
APLICACIONES DE LAS TÉCNICAS
ELECTROANALÍTICAS AL LABORATORIO CLÍNICO
• Medida de electrólitos
• Determinación del pH
• Gases en sangre.
TÉCNICAS ÓPTICAS DE ANÁLISIS:
• Incluyen aquéllas técnicas basadas en fenómenos tales como:
Emisión
Absorción
Dispersión
Difracción
Fosforescencia
Fluorecencia
TÉCNICAS ÓPTICAS DE ANÁLISIS
Espectroscópicas: No espectroscópicas:
Utilizan las interacciones de la No se producen transiciones entre los
distintos estados energéticos, no hay
radiación electromagnética con
intercambio de energía, sino
la materia para obtener
cambios en la dirección o en las
información sobre una muestra. propiedades físicas de la radiación
electromagnética.
TÉCNICAS ÓPTICAS DE ANÁLISIS:
➢ Espectrofotometría de absorción molecular ultravioleta-visible.
➢ Espectrofotometría de fluorescencia y fosforescencia
➢ Espectrometría atómica (emisión y absorción)
➢ Espectrometría de reflectancia
➢ Espectrometría de dispersión de partículas
➢ Polarimetría
➢ Espectrofotometría de infrarrojo
➢ Espectroscopía raman
➢ Espectroscopía de rayos X
➢ Técnicas radioquímicas, incluyendo el análisis por activación
➢ Espectroscopía de resonancia magnética nuclear
Espectrometría de absorción molecular
en la región del espectro UV-Visible
ESPECTROFOTÓMETRO
▪ Glucosa
▪ Colesterol
▪ Creatinina
▪ Urea
▪ Bilirrubina
▪ Triglicéridos
Espectrometría de fluorescencia
➢Se basa en medir la luz
fluorescente emitida por
una disolución que
contiene una molécula
capaz de emitir
fluorescencia tras la
estimulación.
➢ Determinación de
compuestos químicos y
actividades enzimáticas.
Espectrometría de emisión atómica
▪ La espectroscopía de emisión
atómica mide la luz emitida por los
átomos cuando reciben energía
calorífica.
▪ Hay dos tipos de técnicas de
espectroscopia de emisión
atómica: la emisión por llama y la
emisión por plasma.
▪ Medida de la concentración de
metales.
Espectrometría de absorción atómica
▪ La espectrometría de absorción
atómica es una técnica analítica
que mide la absorción de luz de
longitudes de onda específicas
por átomos en estado gaseoso.
▪ Se utiliza para cuantificar la
concentración de elementos
químicos en muestras, tras
vaporizar el elemento mediante
una llama o un horno de grafito.
Espectrometría de absorción atómica
▪ Se emplea para medir la
concentración de metales en los
líquidos biológicos.
▪ Los principales metales que se miden
son: aluminio, arsénico, bario, cadmio,
calcio, cobre, cromo, hierro, litio,
magnesio, manganeso, mercurio,
níquel, plata, platino, plomo, selenio y
cinc.
Espectrometría de dispersión de partículas
Turbidimetría y Nefelometría
▪ Son dos técnicas relacionadas entre sí que se emplean
para medir la luz dispersada por una suspensión de
partículas coloidales.
▪ Determinación de proteínas específicas con métodos
inmunológicos.
TÉCNICAS DE SEPARACIÓN:
• Las separaciones analíticas se realizan fundamentalmente por
cromatografía y electroforesis, las cuales pueden separar los
componentes de una muestra a la vez que determinan sus
concentraciones.
• La elección de la técnica depende de las propiedades físicas y
estructurales de las moléculas a separar, de las características
de la matriz en que se encuentran, del objetivo del análisis y de
la accesibilidad de la técnica y el coste.
TÉCNICAS DE SEPARACIÓN:
• Centrifugación
• Electroforesis Capilar
• Cromatografía de gases (GC)
• Técnicas de cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC)
• Técnicas diversas
• Análisis térmico
• Espectrometría de masas
Electroforesis
• La electroforesis es una técnica
analítica que separa moléculas
cargadas, como proteínas o
ácidos nucleicos, en función de
su movilidad en un campo
eléctrico.
• Se utiliza para separar y analizar
componentes de una muestra,
revelando información sobre su
tamaño y carga.
Electroforesis
• Se usa para separar compuestos con carga neta, como
aminoácidos, péptidos, proteínas, nucleótidos y ácidos
nucleicos
Electroforesis. Aplicaciones al laboratorio clínico.
Electroforesis de proteínas séricas: Se utiliza para separar y cuantificar
las proteínas en suero o plasma sanguíneo, lo que es esencial para el
diagnóstico y seguimiento de trastornos como la gammapatía
monoclonal, mieloma múltiple y otros desequilibrios proteicos.
Electroforesis. Aplicaciones al laboratorio clínico.
Electroforesis de hemoglobina: Ayuda a identificar y cuantificar
diferentes variantes de hemoglobina, lo que es crucial en el
diagnóstico de enfermedades de la sangre, como la anemia de
células falciformes y las talasemias.
Electroforesis. Aplicaciones al
laboratorio clínico.
• Electroforesis de ADN:
Utilizada para separar
fragmentos de ADN y evaluar
su tamaño, lo que es
fundamental en pruebas de
diagnóstico genético, como
la detección de mutaciones
genéticas y la identificación
de marcadores genéticos en
el laboratorio de genética.
Cromatografía
• Es un proceso físico en el que los
componentes de una mezcla se
separan por la distribución
diferente entre una fase móvil y
una fase estacionaria.
Cromatografía. Aplicaciones al laboratorio clínico.
Cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC): Se emplea
para cuantificar compuestos específicos en muestras biológicas,
como fármacos en sangre o orina, hormonas, vitaminas y otros
metabolitos. También se utiliza para detectar drogas terapéuticas y
sus metabolitos en pruebas de toxicología.
Cromatografía. Aplicaciones al laboratorio clínico.
Cromatografía de gases (GC): Se usa para analizar gases y
compuestos volátiles en muestras biológicas, como el análisis de
alcoholes en el aliento para la detección de intoxicación por alcohol.
Cromatografía. Aplicaciones al
laboratorio clínico.
• Cromatografía de líquidos de
alto rendimiento acoplada a
espectrometría de masas
(HPLC-MS): Combina la
separación por HPLC con la
identificación y cuantificación
precisa por espectrometría de
masas. Se utiliza en la
identificación de metabolitos,
drogas y biomarcadores en
aplicaciones clínicas y de
investigación.