TAREA ORDINARIO BIOQUIMICA
MEDICA III Practica 1. Determinación de proteínas el
método de Bradford Describa brevemente:
• ¿Qué es una proteína?
Son aquellas moléculas grandes y complejas que son vitales para
los trabajos que realizan las células. Esta formada por uno o más
cadenas largas de aminoácidos .
• ¿Qué métodos existen para determinar la concentración de una
proteína?
Las proteínas se pueden cuantificar directamente mediante
absorbancia a 280 nm, o indirectamente mediante métodos
colorimétricos (BCA, Bradford, etc.) o fluorimétricos que
ofrecen ventajas como una mayor sensibilidad. Para identificar y
medir una proteína específica dentro de una muestra compleja,
por ejemplo, suero o lisado celular, puede utilizarse un ensayo
de inmunoadsorción ligado a enzima (ELISA).
• ¿Cuál es la utilidad de determinar la concentración proteica en
una muestra de tejido?
Son útiles para: diagnóstico de enfermedades, investigación
biológicas, control de calidad, etc.
• Mencione algunas enfermedades que incluyan una deficiencia de
proteínas
Tromboflebitis, kwashiorkor, perdida de elasticidad en la piel,
enfermedad celíaca, síndrome nefrótico, etc.
• Mencione de forma breve el FUNDAMENTO de la determinación de
proteínas por el método de Bradford
Se basa en la unión del colorante azul brillante de Coomassie G-
250 a las proteínas desnaturalizadas en solución y se compara
con la de diferentes cantidades de una proteína estándar
(Albúmina de Suero Bovino (BSA)).
• ¿Cuál es el colorante utilizado en el reactivo de Bradford?
Azul brillante de Coomassie G-250 (CBBG)
• Responda correctamente los siguientes ejercicios: Con los
siguientes datos, haga lo que se le pide:
Concentración Lecturas de
g/dL Absorbancia
5 0.251
10 0.342
15 0.455
20 0.563
25 0.652
30 0.713
Muestra 0.321
Problema
➢ Construya la curva tipo (GRAFICA) correspondiente y con ella
determine:
➢ Ecuación de la recta
Pendiente (m): 0.0191 Inserción (b): 0.1612
Coeficiente de correlacion : 0.9963. Absorbancia: 0.0191*
Concentración +0.1612
➢ Concentración de proteínas totales de la muestra problema.
Concentración= Absorbancia-b sobre m = 0.321 -0.1612/0.0192=
8.37 d/dL
➢ Si la muestra problema fue obtenida de suero, de un diagnóstico
con el resultado obtenido.
Una concentración de 8.37 g/dL está ligeramente elevada, pero
aún considera marginalmente normal dependiendo del contexto
clínico, si este resultado corresponde a un paciente en evaluación
clínica, podría estar asociado con: -Condiciones inflamatorias o
infecciones crónicas durante inflamaciones, niveles de globulina
(como anticuerpos) pueden elevarse, aumentando las proteínas
totales.
-Deshidratación leve puede concentrar las proteínas en el suero
debido a la pérdida de líquido plasmatico. resultados son
significativamente elevados: si confirma que el valor está
Practica 2. Extracción de Ácidos nucleicos
Dibuje y señale las estructuras que conformar el DNA y RNA
Haga una tabla con las diferencias entre DNA y RNA
ADN ARN
adenina se une a la ARN la adenina se une al
timina (A-T) y la citosina uracilo (A-U) y la citosina
a la guanina (C-G). se une a la guanina (C-G)
Se encuentra en el Presente en el núcleo de
núcleo de la célula una célula, su citoplasma
y su ribosoma.
Almacena la información Transporta la información
genética genética del ADN a los
ribosomas para la
síntesis de proteínas.
Es una cadena doble Es una cadena simple
Mencione métodos para la extracción de Acidos nucleicos
Algunos ejemplos de métodos son extracción orgánica,
extracción Chelex, extracción de fase sólida, método del
calentamiento, método del fenol-cloroformo, método del
acetato de potasio, método del acetato de potasio
modificado y método de salting-out
Mencione el FUNDAMENTO de la técnica de TRIZOL
empleada en el laboratorio
Se basa en la mezcla de tiocianato de guanidinio y fenol, que
permiten:
Romper las células y desnaturalizar las proteínas
Mantener la integridad del ARN
Aislar ADN, ARN y proteínas de muestras biológicas
Responda correctamente los siguientes ejercicios:
En las siguientes tablas de muestras los resultados de
lectura de absorbancia de la extracción de DNA de dos
muestra problemas diferentes utilizando un NanoDrop,
responda:
Muestra Concentración Relación Relación
ng/µL Absorbancia Absorbancia
A 260/280 A 260/230
A 17500 2.4 0.8
B 15700 1.8 2.0
¿Cual de las muestras anteriores muestra una pureza de DNA
aceptable?
R= La relación A 269/280 se usa para evaluar la pureza del ADN
(un valor estable es de 1.8-2.0) por lo tanto la Muestra B es la
muestra aceptable ya que tiene un valor de 1.8
¿Cuál de las siguientes muestras tiene contaminación, explique
porque.
R= La relación 260/230 es un indicador de contaminación de con
sales o solventes orgánicos, los valores aceptables son 2.0 a 2.2,
por ello la Muestra A esta contaminada ya que no cumple con los
parámetros y puede estar asociada a con la presencia de sales o
solventes
• Practica 3. Electroforesis
• Mencione brevemente el fundamento de la electroforesis
Es que las moléculas se desplazan en función de su tamaño, forma y
carga eléctrica:
Tamaño: Las moléculas más pequeñas se desplazan más rápido que
las más grandes.
Forma: La fricción que experimenta la molécula depende de su
forma.
Carga eléctrica: La magnitud de la carga eléctrica depende del pH
del medio en el que se encuentre la molécula.
• Mencione brevemente la utilidad de la electroforesis
Separar moléculas de ADN, ARN o proteínas en función de su
tamaño y carga eléctrica
• Mencione las 3 fases que conformar la PCR y describa
brevemente lo que sucede en cada paso.
Desnaturalización: Se calienta la reacción a 96° C para separar las
cadenas de ADN.
Templado: Se enfría la reacción a 55–65° C para que los cebadores
se unan a las secuencias complementarias del molde de ADN.
Extensión: Se eleva la temperatura de la reacción a 72° C para que
la Taq polimerasa extienda los cebadores y sintetice nuevas cadenas
de ADN.
Haga una tabla con las diferencias entre la electroforesis de
proteínas y la electroforesis de Ácidos nucleicos, Mencione:
Ácidos nucleicos proteínas
Tipo de gel utilizado Agarosa Poliacrilamida
Tipo de cámara Horizontal Horizontal
utilizada
Las moléculas se Ninguno SDS
separar por
Colorante utilizado
para revelación de
bandas
Se reporta en Tamaño Tamaño y carga
• En la siguiente imagen figura 1 se muestra un gel de
agarosa al 1% con 8 muestras de DNA, señale en la
imagen:
• El marcador de peso molecular y su utilidad:
• Los pozos donde fue colocada la muestra
• Carriles de corrimiento
• En sentido de corrimiento de las bandas (ánodo, cátodo y
mencione sus características)
Figura1. Gel de agarosa al 1% con 8 muestras de DNA
El marcador utilizado para
esta determinación fue el
siguiente:
Conteste:
Tamaño aproximado de la
muestra:
1: ___1000____
2: ___800_____
3: __10027____
5: ____8000____
8: ____6000____