B0210605 B0210606
Lisina Hierro Agar
USO FÓRMULA (en gramos por litro)
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, espe- PEPTONA DE GELATINA ................................................................................................ 5.0
cialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación y desami- EXTRACTO DE LEVADURA........................................................................................... 3.0
nación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. GLUCOSA ...................................................................................................................................... 1.0
LISINA .............................................................................................................................................10.0
FUNDAMENTO CITRATO DE HIERRO Y AMONIO ........................................................................... 0.5
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura apor- TIOSULFATO DE SODIO ................................................................................................0.04
tan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el PÚRPURA DE BROMOCRESOL...........................................................................0.02
hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado AGAR ...............................................................................................................................................15.0
para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deami- pH FINAL: 6.7 ± 0.2
nasa. El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los
indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de INSTRUCCIONES
bromocresol, es el indicador de pH (su color es amarillo a pH igual Suspender 35 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar
o menor a 5.2 y violeta a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el 5 minutos. Calentar agitando con frecuencia y hervir durante un
agente solidificante. minuto hasta la disolución completa. Distribuir en tubos y esterilizar
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el me- en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
dio y provocan el viraje del color púrpura al amarillo. Enfriar y dejar solidificar en posición inclinada (pico de flauta pro-
El ambiente ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y fundo).
se metaboliza la lisina a cadaverina elevando el pH del medio de
cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta. CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen ac- Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre des-
tividad lisina decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del lizamiento.
medio de cultivo al color amarillo. A las 24 horas de incubación se Medio de cultivo preparado: color púrpura rojizo.
observa el fondo del tubo color amarillo y la superficie de color vio-
leta debido al consumo de las peptonas que producen alcalinidad. ALMACENAMIENTO
La generación de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegre- Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
cimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas de Mor-
ganella, desaminan la lisina. Esto produce un ácido alfa-ceto-car- PROCEDIMIENTO
bónico, el cual con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno Siembra:
forma un color rojizo en la superficie del medio. A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio y me-
diante el uso de aguja de inoculación, inocular el medio de cultivo,
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del mismo.
Código B0210605: envase x 100 g.
Código B0210606: envase x 500 g.
Incubación ganismos que no producen lisina decarboxilasa debido a que la aci-
En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-24 horas. dez del medio puede inhibir su formación. Por eso se recomienda
realizar en paralelo la prueba de TSI Agar ( ).
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Decarboxilación de la lisina: MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pi- Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
co violeta / fondo violeta). calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri-
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad ácida (pico miento.
violeta / fondo amarillo).
PRECAUCIONES
Desaminación de la lisina: - Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu-
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida. Esto sivo.
sucede con cepas del género Proteus, Providencia y algunas de - No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o da-
Morganella spp. ñado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete-
Producción de SH2: rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo (espe- - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc-
cialmente en el límite entre la superficie y profundidad). to.
Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin cambio - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-
de color. nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidadas por el laboratorio.
CONTROL DE CALIDAD - Las características del producto pueden alterarse si no se conser-
va apropiadamente.
MICROORGANISMOS DESCARBOXILACIÓN DESAMINACIÓN PRODUCCIÓN - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
DE LISINA DE LISINA DE SH2 mismo según reglamentaciones vigentes.
(fondo) (superficie)
Proteus mirabilis - + - REFERENCIAS
ATCC 43071 (color amarillo) (color rojo) - MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-
Salmonella typhimurium + - + maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Balti-
ATCC 14028 (color púrpura) (color púrpura) (color negro) more, Md.
Shigella flexneri - - - - Ewing. 1986. Edwards and Ewing’s identification of Enterobac-
ATCC 12022 (color amarillo) (color púrpura) teriaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York,
Klebsiella pneumoniae + - - N.Y.
ATCC 700603 (color púrpura) (color púrpura) - Holt, Krieg, Sneath, Staley and Williams (ed.). 1994. Bergey’s
Escherichia coli + - - Manual™ of determinative bacteriology, 9th ed. Williams & Wilkins,
ATCC 25922 (color púrpura) (color púrpura) Baltimore, Md.
- Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Washington, D.C.
Medio sin inocular Sin cambios
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
LIMITACIONES Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Las especies de Proteus no ennegrecen el medio de cultivo al pro- Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
ducir SH2 . El sulfuro de hierro puede no evidenciarse en microor-
02/2021 - REV .02
AUTORIZACIÓN ANMAT
PM -1292 - 22
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
SÍMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNÓSTICO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL Nº DE LOTE Nº FECHA DE LÍMITE DE INSTRUCCIONES
IN VITRO DETERMINACIONES VENCIMIENTO TEMPERATURA DE USO
B0413784
Preparación de Mueller Hinton Sangre Agar: agregar 5-10 % de
Medio de cultivo recomendado universalmente para la realización nada estéril (REF Britasheep) al medio esteri-
de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. lizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en
placas de Petri estériles.
Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarro-
llo microbiano. Por su composición, ha sido recomendado por el Medio de cultivo color ámbar claro.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para ser utilizado En caso de ser suplementado con sangre ovina: color rojo cereza.
en forma rutinaria en la realización del antibiograma en medio
sólido, debido a sus múltiples ventajas y a una gran cantidad de
evidencia científica que avala el uso de este medio de cultivo: Medio de cultivo listo para usar en frascos a 10-35 ºC
-presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC
sensibilidad,
-su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y
tetraciclina es bajo,
-la mayoría de los patógenos microbianos crece satisfactoriamente.
Hisopado en superficie.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, permite rea-
El inóculo microbiano dependerá del grupo microbiano o microorga-
lizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies
nismo en estudio.
de estreptococos. También, con el agregado de sangre puede utili-
zarse para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricional-
mente exigentes.
La atmósfera, el tiempo y temperatura de incubación dependerán del
grupo microbiano o microorganismo en estudio.
Código B0413784 6 frascos x 50 ml
Enterobacterias Crecimiento en medio líquido o En aerobiosis, a 35 ± 2°C
INFUSIÓN DE CARNE 300.0 G Pseudomonas aeruginosa suspensión directa de la colonia durante 16 a 18 horas.
equivalente al estándard 0,5 de
PEPTONA ÁCIDA DE CASEÍNA 17.5 G Mc Farland.
ALMIDÓN 1.5 G Enterococcus spp. Crecimiento en medio líquido o En aerobiosis, a 35 ± 2ºC
suspensión directa de la colonia durante 16 a 18 horas. Si se
AGAR 15.0 G equivalente al estándard 0,5 de ensaya el disco de vancomicina
Mc Farland. 30 ug incubar 24 horas.
AGUA PURIFICADA 1000 ML
Acinetobacter spp. Crecimiento en medio líquido o En aerobiosis, a 35 ± 2ºC
pH Burkholderia cepacia suspensión directa de la colonia durante 20 a 24 horas.
Stenotrophomonas equivalente al estándard 0,5 de
Nota: La infusión de carne es equivalente a 3 g de polvo. maltophilia Mc Farland.
Staphylococcus spp. Suspensión directa de la colonia En aerobiosis, a 35 ± 2ºC du -
equivalente al estándard 0,5 de rante 16 a 18 horas. En el caso
La fórmula puede ser ajustada y/o suplementada para cumplir los criterios Mc Farland. que se ensayen los discos de
cefoxitina, con Staphylococcus
de desempeño y aceptación de producto, cumpliendo su uso coagulasa negativa y en todos
los casos al ensayar oxacilina
previsto. y vancomicina, incubar las
placas durante 24 horas.
Vibrio cholerae Suspensión directa de la colonia En aerobiosis a 35 ± 2ºC
equivalente al estándard 0,5 de durante 16 a 18 horas.
Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para Mc Farland.
fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos. Streptococcus pneumoniae Suspensión directa de la colonia En atmósfera con 5 % de
Streptococcus grupo equivalente al estándard 0,5 de CO2, a 35 ± 2 ºC durante 20
Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosa- viridans Mc Farland. a 24 horas.
Streptococcus spp.
mente los frascos del baño maría y dejar enfriar. Grupo Beta Hemolítico
Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir Consultar en bibliografía de referencia según el microorganismo en cuestión.
asépticamente en placas de Petri, en cantidad suficiente para que el
espesor del medio de cultivo se encuentre entre 3,5 a 4,5 mm por
placa (para placas de Petri de 9 cm de diámetro corresponden entre
25 a 30 mL de medio de cultivo).
PÁG. 1
MUELLER HINTON AGAR
• Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las nor- Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
mas descriptas en el documento CLSI M6 “Protocols For Evaluating calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según
Dehydrated Mueller - Hinton Agar”. Esto es muy importante pues requerimiento.
algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no
crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de
difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites • Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
de control de calidad y pueden llevar a resultados erróneos. • No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado.
• Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o • No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete-
timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y tri- rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
metoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por • Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de • Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y
timidina del lote de agar Mueller Hinton, se utiliza la cepa de control manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos establecidas por el laboratorio.
de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de • Las características del producto pueden alterarse si no se con-
inhibición del desarrollo de diámetro 20 mm o mayor. serva apropiadamente.
• Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el Agar • Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes prin- mismo según reglamentaciones vigentes.
cipalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con
tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas
de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites • Bauer, Kirby, Sherris and Turck. 1966. Am. J. Clin. Pathol. 45:493.
de control de calidad publicados por el CLSI. • Isenberg (ed.). 1992. Clinical Microbiology Procedures Handbook,
• Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos volume 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
los organismos de control para evitar datos aberrantes debido • MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-id
al medio de cultivo. Para aquellas cepas que no puedan crecer tion-maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins,
satisfactoriamente en el Agar Mueller Hinton no suplementado, se Baltimore, Md.
nada de carnero al agar fundido y enfriado, • Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility
Tests; Approved Standard. M02 (última versión vigente). Clinical
and Laboratory Standards Institute (CLSI).
• Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,
Para el control de precisión y exactitud del Mueller Hinton Agar se M100, (última versión vigente). Clinical and Laboratory Standards
usan las siguientes cepas control: Institute (CLSI).
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Escherichia coli ATCC 25922
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Para evaluar el desempeño de inhibidores de enzimas beta
lactamasas en Mueller Hinton Agar, se utiliza la cepa control: PM 1292-24
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
Escherichia coli ATCC 35218
Para el control de precisión y exactitud del Mueller Hinton Sangre
Agar se utiliza la cepa control:
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
MEDIO SIN INOCULAR SIN CAMBIO
06/2023 - REV. 06 - 31679
La evaluación de Staphylococcus a temperaturas mayores a 35 ºC
puede no detectar cepas meticilino resistentes.
Consultar en bibliografía de referencia la metodología apropiada.
PÁG.2
B0211405 B0211406
Mac Conkey Agar
USO INSTRUCCIONES
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negati- Suspender 50 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5
vos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición 1 a
de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las especies de la 2 minutos hasta disolver completamente. Distribuir en recipientes
familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Su fórmula cumple con los requerimientos de la Armonización de
Farmacopeas Europea, Japonesa y de los Estados Unidos de Nor- CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
teamérica (EP, JP y USP respectivamente). Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, li-
bre deslizamiento.
FUNDAMENTO Medio de cultivo preparado: color rojizo púrpura.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes ne-
cesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de ALMACENAMIENTO
carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
de la flora Gram positiva. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la PROCEDIMIENTO
colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo Siembra
neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales En superficie: inocular directamente la muestra por estría.
biliares. En profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen co- dilución. Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado
lonias incoloras. a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vaivén y rota-
ción. Dejar solidificar.
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN
Código B0211405: envase x 100 g. Incubación
Código B0211406: envase x 500 g. En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-48 horas.
FÓRMULA (en gramos por litro) INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
PEPTONA DE CARNE ........................................................................................................ 1.5 Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas-
PEPTONA DE GELATINA ..............................................................................................17.0 rojizas. Puede observarse halo de precipitación biliar.
TRIPTEÍNA ................................................................................................................................... 1.5 Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del
LACTOSA .....................................................................................................................................10.0 color del medio, incoloras.
MEZCLA DE SALES BILIARES Nº3 ...................................................................... 1.5
CLORURO DE SODIO......................................................................................................... 5.0
ROJO NEUTRO ......................................................................................................................0.03
CRISTAL VIOLETA ........................................................................................................... 0.001
AGAR ...............................................................................................................................................13.5
pH FINAL: 7.1 ± 0.2
CONTROL DE CALIDAD rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc-
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO COLOR PRECIPITACIÓN to.
BILIAR - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-
Escherichia coli Satisfactorio Rosado-rojizo + nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
ATCC 25922 establecidas por el laboratorio.
Escherichia coli Satisfactorio Rosado-rojizo + - Las características del producto pueden alterarse si no se conser-
ATCC 8739 va apropiadamente.
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio Rosado-rojizo + - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
ATCC 700603 mismo según reglamentaciones vigentes.
S. typhimurium Satisfactorio Incoloro -
ATCC 14028 REFERENCIAS
Shigella flexneri Satisfactorio Incoloro - - MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-
ATCC 12022 maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Balti-
Proteus mirabilis Satisfactorio Incoloro - more, Md.
ATCC 43071 - Clesceri, L.S., Greenberg A.E., Eaton A.D. 1998. Part 9000, Micro-
Enterococcus faecalis Inhibido --- --- biological Examination., Standard Methods for the Examination of
ATCC 29212 Water and Wastewater 20th Edition, APHA.
- Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Washington, D.C.
Medio sin inocular Sin cambios - Farmacopea Nacional Argentina, Codex Medicamentarius Argen-
tino, Séptima Edición, volumen 1. 2003. Control Microbiológico de
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS Productos no Obligatoriamente Estériles.
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de - United States Pharmacopeia (USP 31),. 2008. (61) Microbiolo-
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri- gical Examination of Nonsterile products: Microbial Enumeration
miento. Tests. Harmonized Method.
- United States Pharmacopeia (USP 31). 2008. (62) Microbiologi-
PRECAUCIONES cal Examination of Nonsterile products: Tests for Specified Micro-
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu- organisms. Harmonized Method.
sivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o da- INDICACIONES AL CONSUMIDOR
ñado. Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete- Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
AUTORIZACIÓN ANMAT
PM -1292 - 22
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
03/2021 - REV .02
SÍMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNÓSTICO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL Nº DE LOTE Nº FECHA DE LÍMITE DE INSTRUCCIONES
IN VITRO DETERMINACIONES VENCIMIENTO TEMPERATURA DE USO