INFORME MICROSCOPÍA

Práctica 1: TÉCNICAS MICROSCÓPICAS

1. Fundamentos:
1.1. Fundamentos generales: Para observar las muestras microscópicas obtenidas
es necesario entender y controlar el uso del microscopio óptico, en primer
lugar, tendremos claras sus partes, la utilización de objetivos secos y húmedos
y las operaciones de limpieza y mantenimiento.

• Partes del microscopio óptico:

Estas las clasificamos en sistema óptico y sistema mecánico:

Sistema óptico Sistema Mecánico
Ocular/es: Es la lente situada cerca Soporte: Mantiene la parte óptica.
del ojo del observador. Amplia la Tiene dos partes: el pie o base y el
imagen del objetivo. brazo.
Objetivos: Lente situada cerca de la Platina: Lugar donde se deposita la
preparación. Amplía la imagen de preparación.
ésta. Hay diferentes tipos (4x,
10x,40x,100x).
Condensador: Lente que concentra Cabezal: Contiene los sistemas de
los rayos luminosos sobre la lentes oculares. Puede ser monocular,
preparación. binocular.
Diafragma: Regula la cantidad de luz
Revolver: Contiene los sistemas de
que entra en el condensador. lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
Foco: Dirige los rayos luminosos Tornillos de enfoque (macrométrico
hacia el condensador. y micrométrico): Macrométrico que
 aproxima el enfoque y micrométrico
que consigue el enfoque correcto.

• Uso del microscopio óptico:

El primer paso es la preparación inicial del microscopio, esta consiste en colocar
el objetivo de menor aumento que generalmente es el 4x, seguidamente, bajamos
la platina del microscopio (Si el microscopio se guardó correctamente, debería
estar listo en esa posición).
El segundo paso es la colocación de la muestra en la platina del microscopio y
sujetar la muestra con la pinza de la platina.
Como tercer paso vamos a la observación de la muestra usando el objetivo de
4x o el objetivo de 10x si es que se quiere observar mejor.
En el cuarto paso encontramos el enfoque, es necesario acercar la lente al objetivo
usando el tornillo macrométrico, observando directamente para no dañar la
muestra. Seguidamente se debe mirar por el ocular y hay que separar lentamente
le lente usando el macrométrico hasta que la imagen sea nítida y podemos afinarlo
mediante el micrométrico.
En el quinto paso podemos cambiar de objetivos y ajustar levemente usando el
micrométrico para obtener un enfoque fino. Si se pierde la imagen se debe cambiar
de objetivo volviendo al anterior y repetir el proceso.

*Para el uso del aceite de inmersión y el objetivo de 100x, es necesario seguir

los siguientes pasos e indicaciones:

En primer lugar, se debe de bajar la platina y subir el condensador para ver el

circulo de luz que indica la zona en la que se debe aplicar el aceite. Seguidamente,
se gira el revolver hacia el objetivo de inmersión, dejándolo a medio camino y se
coloca una pequeña gota de aceite en el circulo de luz, se termina de girar el
revolver y se sube la platina hasta que el objetivo toque la gota de aceite. A
continuación, se enfoca con cuidado usando el micrométrico ya que la distancia
de trabajo es muy pequeña. Al terminar, se debe bajar la platina, se cambia el
objetivo al de menor aumento y se retira la muestra. Como último paso se debe
limpiar el objetivo de inmersión. Hay que tener en cuenta que en el momento que
se enfoque el objetivo de 100x no se puede volver a cambiar de objetivo a uno
más pequeño sin antes limpiar y verificar que no haya tocado anteriormente el
aceite.

• Limpieza del microscopio: Cuando se finalice el trabajo con el microscopio se

debe dejar el objetivo de menor aumento en posición y cubrirlo con su funda. Se
debe mantener el microscopio cubierto cuando no se usa para protegerlo del polvo.
No hay que tocar las lentes con las manos y se limpia con papel especial si se
ensucian. Se debe limpia el aceite tras usar el objetivo de inmersión y evita forzar
los tornillos. También es necesario cambiar los objetivos con cuidado, mirando
siempre la preparación y mantener la platina limpia y seca, y por último revisar el
microscopio al finalizar cada sesión y al terminar el curso.
 1.2. Fundamentos de las observaciones en fresco:
En estos conoceremos dos técnicas importantes para la observación de
microorganismos y obtención de diferentes muestras, estas son:
• Técnica entre Porta y cubre:
En un portaobjetos limpio se coloca una gota de
muestra con una pipeta pasteur. Luego, se coloca
un cubreobjetos sobre la gota, comprimiéndola
para facilitar el movimiento de microorganismos.
Este procedimiento permite mantener la muestra
en el mismo plano por un tiempo prolongado.
Aunque su principal limitación es la desecación de
la muestra.

• Técnica de la gota pendiente: Esta técnica se realiza

por tensión superficial que tiene suspensión de
microorganismos, esto gracias a la forma del
portaobjetos. Primeramente, se dispone de una
pequeña gota de muestra que se deposita en el centro
del cubreobjetos, para después invertir el cubre hacia
la excavación del portaobjetos. Así se permite ver los
microorganismos en movimiento.

[Link] de la tinción de preparaciones microscópicas

• Tinción sencilla: consiste en aplicar un colorante

básico, como azul de metileno o cristal violeta, a
una muestra previamente fijada en un portaobjetos.
Primero, se extiende una fina capa de muestra
sobre el porta, se deja secar al aire y luego se fija
pasando el portaobjetos por la llama de un
mechero. Luego, se cubre la muestra con el
colorante durante 1 o 2 minutos, se enjuaga
suavemente con agua destilada para eliminar el
exceso de tinte, y se seca. Finalmente, la muestra
se observa bajo el microscopio, permitiendo
visualizar la forma y disposición de las células

• Tinción de Gram:
La tinción de Gram es un método diferencial que permite clasificar bacterias en
grampositivas o gramnegativas según la composición de su pared celular. Primero, se fija
la muestra en un portaobjetos y se tiñe con cristal violeta, el colorante primario. Después
de un minuto, se aplica lugol, que actúa como mordiente para fijar el colorante. Luego,
se decolora con alcohol o acetona; las bacterias grampositivas retienen el color morado,
mientras que las gramnegativas lo pierden. Finalmente, se aplica safranina como
colorante de contraste, tiñendo de rosa las bacterias gramnegativas. La muestra se observa
bajo el microscopio, permitiendo distinguir las bacterias según su reacción a los
colorantes.

Prácticas

Práctica 1: Observaciones en fresco de protozoos y algas

1. Objetivos: El objetivo de mi práctica es visualizar, estudiar las características que
poseen, como su tamaño, forma y las diferentes funciones locomotoras de los
microorganismos que están presentes en la charca de la universidad laboral de
Málaga y así mismo en el Rio de Guadalhorce.
Como también dentro de los objetivos de esta práctica encontramos la
familiarización de los materiales del laboratorio y así mismo, el uso adecuado de
estos.
2. Materiales:
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Muestras de agua estancada
• Microscopio
• Pipeta pasteur
• Lamina excavada o portaobjetos excavado
• Bote de plástico
• Sonda para muestreo

3. Procedimiento:

Para la toma de muestra: En primer lugar, nos disponemos a localizar algún sitio
en el que se encuentre agua estancada, en nuestro caso será la charca de la
universidad laboral de Málaga, también conocida como “El estanque de las
tortugas”, por otro lado, también obtuvimos muestras del rio Guadalhorce.
El objetivo de nuestro plan de muestreo es conseguir una muestra de un punto
aleatorio de la localización para llevarla a análisis en el laboratorio y conseguir
identificar la vida de los microorganismos en la charca y el río.
Una vez localizado el punto exacto, procedemos a sacar el agua utilizando equipos
de muestreo, en nuestro caso usamos una sonda, luego depositamos el agua
 recolectada en un bote de plástico y previamente transportamos hacia el
laboratorio.
1. Para empezar, localizamos nuestro bote de muestra y usando una pipeta
pasteur se toman unas gotas de la muestra.
2. Se coloca una gota en el portaobjeto. En este paso se puede proceder mediante
dos técnicas diferentes: “entre porta y cubre” y “la gota pendiente” (Estas dos
técnicas están en los fundamentos de la práctica).
3. Tomamos el cubreobjetos y lo ponemos encima de la gota
4. Se procede a la observación en el microscopio
5. Primero a objetivo de 4x, después 10x y 40x.

4. Observaciones

Nombre y especificaciones Foto

Algas verdes: Chlorophyta.
Objetivo de 4x.
Este tipo de algas comprenden
todos los niveles de organización,
desde el tipo flagelado, pasando por
formas cocales y tricales. Se
conocen unas 8000 especies de
estas algas verdes, la mayoría las
cuales son cosmopolitas y viven en
aguas dulces, marinas e incluso en
zonas terrestres de alta humedad.
Su método de reproducción es por
conjugación y estas almacenan
almidón en sus plastos y abarcan
especies tanto pluricelulares como
unicelulares.
La importancia de las algas verdes
es que han jugado un papel
importante en la evolución.
También son la base de la cadena
alimentaria en ecosistemas
acuáticos y algunos terrestres.

Rotíferos, del latín rota, "rueda" y

fera, "los que llevan".
Son unas 1800 especies dioicas, con
una longitud comprendida entre 40
µm y 3 mm. Los machos son más
pequeños que las hembras y en
algunas especies no existen.
Son cosmopolitas: dulceacuícolas
(la mayoría), marinas y terrestres; la
mayoría de vida libre y algunas
epizoicas o parásitas. Son
 transparentes o de coloración Objetivo de 10x
variable.
Pueden enquistarse y soportar
periodos de sequedad en los que se
asemejan a granos de arena.
Pared del cuerpo: Está formada
por: cutícula, epitelio sincitial
(membrana basal) y musculatura.
Las fibras musculares forman una
malla con amplios huecos. El
pseudocele está relleno de líquido
con amebocitos.
Sistema nervioso: Es de tipo
ortogonal. Hay un cerebro situado
por encima de la faringe del que
salen dos cordones longitudinales
que se fusionan en un ganglio en la
parte posterior del cuerpo.
Reproducción: Sexual o
partenogenética.
Locomoción y captura de
alimentos: Mediante el
movimiento de los cilios de la Objetivo de 40x
corona.

Posibles Mixomicetos o Mycetozoa

Son un grupo de protistas conocido
comúnmente como “hongos
mucilaginosos”, perteneciente al
filo Amoebozoa, y que comprende
alrededor de 1000 especies
diferentes, siendo el grupo más
diverso de dicho filo. Suelen estar
en ambientes de humedad y
ambientes templados. Objetivo de 10x
Son organismos heterótrofos
implicados en la descomposición de
restos vegetales, y que poseen un
ciclo de vida caracterizado por una
fase unicelular móvil.
Su reproducción es mediante las
esporas

Tabla de organismos no reconocidos o dudosos.

 Heces o astilla de madera

Objetivo de 4x
Alga o parásito

Objetivo de 10x

5. Interpretación y conclusiones

En esta primera práctica puedo destacar diferentes momentos en el laboratorio y

en el reconocimiento de algunos microorganismos, los cuales puedo separar de la
siguiente manera:

• Dentro del laboratorio: En el laboratorio se conservaron dos muestras de

diferentes lugares, una de la charca y otra del río Guadalhorce y se
concluyó que el lugar en el que más se permitió la observación de
microorganismos fue la muestra del río. Esto pudo ocurrir por la limpieza
de los sitios, ya que la charca al albergar animales como tortugas y peces,
es necesario un mayor mantenimiento de esta para la supervivencia de las
especies. Mientras que el río no cuenta con mantenimiento ni limpieza
recurrente.
• Uso del microscopio: Cuando utilicé el microscopio por primera vez tomé
bastante tiempo para lograr enfocar algunos microorganismos. Al mismo
tiempo algunos de estos poseían una locomoción rápida lo que hacía
imposible la acción de capturarles en fotografía.
• Reconocimiento de especies: La mayoría de microorganismos vistos en el
laboratorio fueron capturados en cámara, aunque tuve un problema con el
reconocimiento de las dos últimas fotos vistas en el anterior apartado, ya
que hice uso de diferentes herramientas digitales, pero obtuve diversos
nombres y resultados de lo visto.
Practica 2: Tinción sencilla de microorganismos
1. Objetivo: Realizar preparaciones químicas como la tinción sencilla para observar
bajo el microscopio las diferentes células que se encuentran en la mucosa bucal,
a partir de un frotis bucal.
2. Materiales:
• Microscopio
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Isótopo
• Frasco lavador
• Pinzas de madera
• Mechero de gas
• Cristalizador
• Soporte de tinción
• Alcohol
• Colorante: Azul de metileno

3. Procedimiento
Obtención de la muestra: Para este paso se hizo uso de un isótopo para recolectar
mi propia muestra bucal.
1. Desinfección: Se toma el portaobjetos y se sostiene con las pinzas de madera
para luego impregnarlo en alcohol y después flamearlo en el mechero de gas.
2. Extensión de la muestra: tomamos el isótopo con la muestra bucal y se
extiende en el portaobjetos ya desinfectado.
3. Se deja secar la muestra.
4. Fijación: Una vez seca la muestra se procede a fijarla. Se pasa de 3 a 4 veces
en el mechero de gas.
5. Colocamos el soporte de tinción encima del cristalizador y se pone la muestra
encima del soporte.
6. Coloración: Se toma el colorante azul de metileno a la muestra y se ponen
unas gotas que cubran la muestra entera. Se debe dejar actuar por dos minutos.
7. Se lava la muestra con agua destilada (frasco lavador).
8. Se deja secar la preparación
9. Por último, la observación en el microscopio desde el objetivo de 4x hasta
40x.
4. Observaciones:

En esta práctica la muestra fue observada desde el objetivo de 4x hasta 40x, en la

cual podemos señalar algunas características observadas de las células
encontradas de mi propia mucosa bucal, como las partes de la célula que son muy
bien observadas con el objetivo de 40x.

Membrana celular

Núcleo

Citoplasma

Objetivo de 40x

Objetivo de 10x
Objetivo de 4x

Objetivo de 10x Objetivo de 4x

 5. Interpretación y conclusión:
La cavidad bucal está constituida por una membrana de
superficie húmeda, necesaria para el mantenimiento de
la estructura normal de los tejidos. Las células que
encontramos en la práctica son células epiteliales y
forman parte de la cavidad bucal, y dentro de estas son
parte de la mucosa bucal o mucosa de revestimiento, la
cual brinda protección y se adapta fácilmente al
movimiento, posee un epitelio plano estratificado no
queratinizado, corion laxo o semilaxo y submucosa bien definida. Se encuentra en cara
interna del labio, paladar blando, cara ventral de la lengua, mejillas y piso de boca.
En base a nuestras observaciones, puedo interpretar:
• La forma y disposición de estas células suelen ser planas y de forma irregular,
con un contorno poligonal o redondeado. Se agrupan en capas, aunque al
momento de observarse bajo el microscopio suelen aparecer de forma aislada o
en pequeños grupos debido a su desprendimiento.
• El núcleo de estas células es grande y central, que se observa claramente. En una
tinción sencilla, este se tiñe intensamente, mientras que el citoplasma queda más
claro, permitiendo un buen contraste.
• El citoplasma es amplio y se ve ligeramente granuloso. En ocasiones, puede
contener pequeñas inclusiones celulares y orgánulos menos definidos.
• Ausencia de pared celular como son células animales, carecen de pared celular;
tienen solo una membrana celular que rodea el citoplasma.
• Por otro lado, estas células suelen desprenderse de manera natural, ya que la
mucosa bucal se renueva constantemente. Esto facilita su obtención para la
muestra.
De esta práctica podemos concluir:
• Al corresponder con un tejido de revestimiento las células no están agrupadas, por
el contrario, se encuentran dispersas.
• Aunque se ven de tamaños desiguales, su forma es circular, ya que tratamos con
células animales.
• Se puede apreciar que estas células poseen una membrana muy fina.
Práctica 3: Tinción diferencial de Gram
1. Objetivos: En esta práctica se pretende identificar las características de la pared
celular de cultivos de bacterias, usando correctamente la técnica de tinción
diferencial de Gram para analizar si se trata de bacterias Gram- positiva o Gram-
negativa. Así mismo se pretende examinar y diferenciar la morfología y
agrupación de las bacterias. Concretamente de las bacterias Serratia marcescens
y Micrococcus Luteus
2. Materiales:
• Portaobjetos
• Cubreobjetos.
• Mechero de gas.
• Asa de siembra.
• Cristalizador.
• Frasco lavador.
• Pinzas de madera
• Soporte de tinción
• Cultivos de bacterias Gram- positivas y Gram-negativas.
• Reactivos: Cristal violeta, Lugol, etanol 95% y safranina.
• Mantel de papel.

3. Procedimiento:
1. Esterilización: En primer lugar, encendemos el mechero de gas y tomamos el
portaobjetos con las pinzas de madera para bañarlo en alcohol del 95% y llevarlo
a la llama por unos segundos.
Una vez esterilizado el portaobjetos procedemos a esterilizar el asa de siembra
llevándola a la llama del mechero hasta incandescencia y así mismo, calentamos
un poco el borde del tubo de muestra para evitar contaminación.
2. Extensión: Tomamos una muestra del tubo con las bacterias y la extendemos en
el portaobjetos ya esterilizado.
3. Dejamos secar el portaobjetos con la muestra al aire libre.
4. Fijación: llevamos la muestra a fijarla por unos segundos al mechero de gas y
esperamos a que se enfríe.
5. Ponemos el soporte de tinción encima del cristalizador y colocamos la muestra en
el soporte.
6. Coloración: añadimos el primer colorante a la muestra, concretamente el cristal
violeta y se deja actuar por dos minutos.
7. Se enjuaga la muestra con agua destilada (frasco lavador) y se deja escurrir.
8. Procedemos a añadir el mordiente (Lugol) y se deja actuar por otros dos minutos.
9. Se enjuaga nuevamente con agua destilada y se deja escurrir.
10. Ahora procedemos a decolorar la muestra mediante alcohol etílico del 95% a la
muestra y se deja actuar por 10 segundos, en este paso se debe actuar con mucha
cautela para no pasarse del tiempo requerido.
11. Se lava con abundante agua destilada para cortar la decoloración.
12. Coloración: añadimos el colorante de contraste, es decir, la safranina, dejamos
actuar por dos minutos y enjuagamos la muestra nuevamente.
 13. Dejamos secar la preparación a temperatura ambiente o también se puede dejar
secar mediante lo vapores del mechero.
14. Una vez seca la muestra, colocamos el cubreobjetos y estaría lista para ver los
resultados obtenidos en el microscopio.

4. Interpretación y conclusiones
Características Bacterias Gram-positiva Bacterias Gram-negativa

Micrococcus Serratia
 Todas las fotos fueron hechas
con el objetivo de 40x

Todas las fotos fueron hechas

con el objetivo de 40x
Morfología La forma del micrococcus es La serratia tiene forma de bacilo y
esférico y tiene agrupaciones en algunas imágenes podemos
tétradas. observar un estreptobacilo.
Pared celular Estas bacterias poseen una Posee finas capas de
pared celular interna y una peptioglicano
pared de peptidoglucano.
*El peptidoglicano es un
exoesqueleto que da
consistencia y forma esencial
para la replicación y
supervivencia de la bacteria
Presencia de Ausente Presente
membrana
externa
Composición de Contiene ácidos teicoicos y Contiene lipopolisacáridos,
la pared celular lipoteicoicos. proteínas y fosfolípidos en la
membrana externa
Sensibilidad a Generalmente más sensibles a Su membrana externa puede
antibióticos antibióticos como la penicilina actuar como barrera, haciéndolas
y a lisosima. más resistentes a algunos
antibióticos.
Color Azul Rosa

Para la interpretación de nuestros resultados obtuvimos que en el primer portaobjetos con

muestra de Micrococcus obtuvimos un color azulado oscuro, lo que nos dio la clave para
identificarlo como una bacteria Gram-positiva, esto debido a la pared celular gruesa con
distintas capas de peptidoglicano, las cuales retienen el colorante cristal violeta. Gracias
a su coloración pudimos observar demás características dentro de las cuales se destaca su
forma, un coco o una esfera, con una agrupación tétrada o en células individuales, esto
debido a su patrón de división celular en planos perpendiculares.
En el segundo portaobjetos obtuvimos una muestra de Serratia de la cual se obtuvo un
color rosado en la tinción de Gram, lo que indicaba que era una bacteria Gram-negativa,
esto debido a su pared celular fina y una segunda membrana lipídica, haciendo que no
retuviera el colorante cristal violeta y por el contrario se tiñera del rojo característico de
la safranina. Obtuvimos dentro de sus características morfológicas que se encontraba en
forma de bacilos (bacteria en forma de bastón) que aparecen aislados o en pares, y en
ocasiones en cadenas cortas como el estreptobacilo. A diferencia de Micrococcus,
Serratia no se agrupa en tétradas o racimos, sino que se dispone en estas formas más
dispersas.

Conclusiones:
En esta práctica aprendimos las diferencias de una bacteria Gram-positiva y Gram-
negativa con ayuda de la tinción de Gram, observamos sus características, pero es debido
comentar que esperaba poder ver mejor el color azulado de los Micrococcus, es decir ver
la tinción Gram-positiva, pero debido a la luz del microscopio solo se pudo diferenciar su
morfología.
En el caso de mi muestra de Serratia que fue hecha dos veces para conseguir una mejor
visión de esta y al momento de hacer mi segunda preparación de la muestra, supe que
había cometido un error la primera vez que realicé el frotis, el error fue no fijar bien la
muestra, lo que hizo que al momento de aplicar los colorantes y de lavar con agua
destilada la muestra se fuera perdiendo hasta llegar a no tener nada de muestra. Este error
fue corregido en mi segunda preparación e hizo posible la observación completa de la
Serratia.
Descontaminación, Limpieza y residuos.
Para la limpieza, desinfección de los instrumentos de laboratorio y desecho de las
muestras en esta práctica se hizo de la siguiente manera: En la primera práctica se desecha
la muestra de agua del charco en el lavabo con abundante agua del grifo, para después
proceder con la limpieza de los portaobjetos que son limpiados con agua de grifo, jabón
y agua destilada. Los cubreobjetos son usualmente desechados, es decir, no son
reutilizables. Los demás instrumentos usados en esta práctica son aseados de la misma
manera. También nuestro sitio de trabajo debe ser desinfectado con lejía. Por último, el
microscopio debe ser colocado en su forma inicial y previamente limpiarlo con una toalla
de microfibra y con la pera de aire.
Para la segunda y tercera práctica al utilizar reactivos o colorantes químicos usados en las
tinciones de las muestras, los cristalizadores llevan estas disoluciones de colorantes, por
lo tanto, para su limpieza es necesario verter el colorante dentro de frascos de vidrio
Topacio y seguidamente lavar con agua, jabón y por último agua destilada y así dejarlo
secar.
En la tercera práctica usamos muestras con bacterias, por lo tanto, para la desinfección de
los tubos de ensayo en donde se encontraban las muestras es necesario ponerlos en la
autoclave, el resto del líquido se tira a la bolsa de residuos biológicos y estos se lavan con
agua, jabón y agua destilada. Por otro lado, para los portaobjetos usados en la observación
de Micrococcus y Serratia es necesario colocarlos en una disolución de agua del grifo y
lejía, dejarlos reposar y finalizar lavándolos con agua, jabón y agua destilada.
Bibliografía
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