INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL
PRÁCTICA NÚMERO 3: PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO
ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS
MEDINA CHAVARRIA ARLETH ESTEFANIA
MUÑOZ VÁZQUEZ VALERIA
3FV1, SECCIÓN: 3
RESULTADOS
TABLA 1. RESULTADOS DEL SALTING-OUT
MUESTRA BIURET INTERPRETACIÓN
PRECIPITADO 1 + POSITIVA, COLORACIÓN MORADA, PRESENCIA DE PROTEÍNAS
SOBRENADANTE 1 + POSITIVA, COLORACIÓN MORADA, PRESENCIA DE PROTEÍNAS
PRECIPITADO 2 - NEGATIVA, SIN COLORACIÓN MORADA, AUSENCIA DE PROTEÍNAS
SOBRENADANTE 2 + POSITIVA, COLORACIÓN MORADA, PRESENCIA DE PROTEÍNAS
TABLA 2. PRECIPITACIÓN POR EFECTO DEL pH Y SOLVENTES
TUBO # 1 2 3 4
CLARA DE HUEVO 3.0 3.0 3.0 3,0
FILTRADA Y DILUIDA 1:3
(mL)
HCL 0.1 N (mL) 1.0 - - -
NaOH 0.1 N (mL) - 1.0 - -
REGULADOR DE - - 1.0 -
ACETATOS 0.1 M, pH 4.7
(mL)
AGUA (mL) - - - 1.0
OBSERVACIONES PRECIPITO SOLUBILIZO PRECIPITO SOLUBILIZO
ETANOL 96° (mL) 3.0 3.0 3.0 3.0
OBSERVACIONES PRECIPITO SOLUBILIZO PRECIPITO SOLUBILIZO
TABLA 3. PRECIPITACIÓN POR METALES PESADOS
TUBO # 1 2 3 4 5 6
CLARA DE HUEVO 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
FILTRADA Y
DILUIDA 1:2 (mL)
CLORURO 2 GOTAS
MERCÚRICO 5%
(mL)
NITRATO DE PLATA 2 GOTAS
2%
ACETATO DE 2 GOTAS
PLOMO 5%
CLORURO DE 2 GOTAS
BARIO 5%
CLORURO DE 2 GOTAS
SODIO 5%
AGUA 2 GOTAS
OBSERVACIONES PRECIPITO PRECIPITO PRECIPITO SOLUBILIZO SOLUBILIZO SOLUBILIZO
TABLA 4. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA INSULINA
TUBO # 1 2 3 4 5
ÁCIDO ACÉTICO 0.2 M 0.23 0.15 0.05 0.01 0.00
ACETATO DE SODIO 0.02 0.10 0.20 0.24 0.25
0.2 M
INSULINA 40 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06
pH 3.67 4.56 5.34 6.12 9.04
OBSERVACIONES A - - + - -
LOS 5 MINUTOS PRECIPITO
CÁLCULOS
Tubo No.1 CÁLCULOS
Ácido acético Tubo No. 3
(0.2M/0.25M) (0.23mL) = [0.23] Ácido acético
Acetato de Sodio (0.2M/0.2M) (0.05mL) = [0.05]
(0.2M/0.25M) (0.02mL) = [0.02] Acetato de Sodio
𝑝𝐻 = 4.74 + log [0.02]/ [0.23] pH = 3.67 (0.2M/0.2M) (0.20mL) = [0.20]
Tubo No.2 𝑝𝐻 = 4.74 + log [0.2]/[0.05] pH = 5.34
Ácido acético Tubo No. 4
(0.2M/0.2M) (0.15mL) = [0.15] Ácido acético
Acetato de Sodio (0.2M/0.2M) (0.01mL) = [0.01]
(0.2M/0.2M) (0.10mL) = [0.1] Acetato de Sodio
𝑝𝐻 = 4.74 + log [0.1]/[0.15] pH= 4.56 (0.2M/0.2M) (0.24mL) = [0.24]
𝑝𝐻 = 4.74 + log [0.24]/[0.01] pH = 6.12
DISCUSIÓN
En la precipitación por salting out, se buscó CONCLUSIONES
separar la mayor parte de proteínas de la clara de Las variaciones en el pH, así como la
huevo. Para esto, inicialmente se añadió una presencia de sales y metales pesados,
solución saturada de (Na4)2SO2, la cual es una sal impactan directamente la solubilidad
altamente soluble que intensifica la interacción de las proteínas. Estos factores
entre proteínas, provocando su precipitación. Tras modifican la carga de sus grupos R,
aplicar la prueba de Biuret tanto al sobrenadante alterando su estructura, lo que puede
como al precipitado obtenidos, ambos resultados llevar a su coagulación y facilitar su
fueron positivos. Posteriormente, al agregar más separación según la secuencia de
sulfato de amonio al sobrenadante y realizar un aminoácidos. Las técnicas analizadas
filtrado, la prueba de Biuret mostró un resultado permiten el aislamiento y la
negativo (color azul) en el filtrado, indicando la identificación de proteínas.
ausencia de proteínas, mientras que el precipitado
presentó un color violáceo, señal de proteínas en
él. Esto confirma que se logró una correcta
separación de las proteínas. BIBLIOGRAFÍA
● Unfiltered, S., & Unfiltered, S.
En el caso de la precipitación por variación de pH y (2018, 20 febrero). CONSEJO
solventes, se observó que las proteínas TÉCNICO: PRECIPITACIÓN
precipitaron en los tubos 1 (con HCl) y 3 (con DE PROTEÍNAS. SCIENCE
regulador de acetatos). En contraste, en el tubo 2 UNFILTERED.
(con NaOH) la clara de huevo se solubilizó por [Link]
completo, debido a que el pH básico estaba 9/29/consejo-tecnico-precipitaci
alejado del punto isoeléctrico de la proteína, donde on-de-proteinas
la solubilidad es mínima. Esto sugiere que, en ● Punto isoeléctrico: Proteínas,
condiciones básicas, la solubilidad de la clara de pH | StudySmarter. (s. f.).
huevo aumenta. StudySmarter ES.
[Link]
Al añadir etanol, las proteínas mostraron menor umenes/quimica/quimica-organi
solubilidad, en concordancia con la teoría, ya que ca/punto-isoelectrico/
la adición de etanol reduce la constante dieléctrica
del agua y disminuye la interacción entre agua y
proteínas, incrementando así la interacción entre
proteínas y favoreciendo su precipitación.
Por otro lado, al realizar la precipitación con
metales, se obtuvo un resultado positivo con las
sales de mercurio (Hg), plata (Ag) y plomo (Pb). En
presencia de estos iones, la interacción
proteína-agua se ve afectada, facilitando la
precipitación. Sin embargo, la sal de sodio (Na)
solubilizó la proteína debido al fenómeno de
“salting in”.