Practica #1

Seguridad y bioseguridad
Principios de bioseguridad
BARRERAS
toda persona es portadora agente
infeccioso hasta no demostrar lo PRIMARIAS SECUNDARIAS
contrario
• Diseño del laboratorio:
• Equipos de protección individual
• Técnicas de Laboratorio Estándar
Edificio, ventilación, áreas y
• Normas de Higiene personal espacios, materiales de
• Inmunización (vacunación) construcción, señalización
• Cabinas de seguridad biológica específica, medidas de
• Esterilización y desinfección de contención.
instrumentales y superficies

RIESGOS
– Físico: ruido, iluminación, temperaturas CRITERIOS PARA CLASIFICAR EN
GRUPOS DE RIESGO A
extremas, electricidad, radiación ni ionizante. MICROORGANISMOS
– Químico: ácidos, bases, inflamables y
colorantes. • Patogenicidad.
• Modo de transmisión y huéspedes:
– Ergonómico: postura, visión, transporte. – Inmunidad, densidad, movimientos
– Psicológico: estrés, violencia, acoso. poblacionales, vectores, higiene ambiental.
• Medidas preventivas eficaces disponibles.
– Biológico: microorganismos, cultivos celulares, • Tratamientos eficaces disponibles.
que originen infección, alergia o toxicidad.

DESINFECCIÓN: Métodos y/o procedimientos donde se emplean sustancias químicas para

disminuir la tasa de microorganismos de superficies u objetos.
ESTERILIZACIÓN: Proceso que permite eliminar la carga microbiana patógena y no
patógena, incluidas las esporas, de productos y material de laboratorio.

ACCIDENTE DE RIESGO BIOLÓGICO

Se define como accidente laboral u ocupacional, en el que sangre, tejidos o líquidos
corporales potencialmente infectantes, provenientes de una fuente, entran en contacto
con el trabajador accidentado ya sea a través de una lesión percutánea o con mucosas
o piel no intacta, generando riesgo de transmisión de agentes infecciosos.
 Practica #2 Generalidades de Diagnóstico Microbiológico:
Bacterias, Hongos, Virus.

TECNICAS
Visualización microscópica directa I.- Visualización microscópica directa del microorganismo: Exámenes en fresco y
del microorganismo coloraciones.
II. - Cultivo – Prueba Bioquímica
III.-Inmunológicas:
a.- Muestras Serológicas: Antígenos (AgsHB, NS1 Dengue, P24) y Anticuerpos
(IgM e IgG)
b.- Muestras No Serológicas: Detección de antígenos (Ag urinario Neumococo)
o productos (Toxinas A y B en Clostridium Diffícile)
IV.- Pruebas moleculares DNA/RNA (NATT).

TINCIÓN GRAM TINCIÓN ZIEHL NEELSEN

PREPARACIÓN CON TINTA CHINA PREPARACIÓN CON HIDRÓXIDO DE POTASIO

AZUL DE LACTOFENOL
 CULTIVO – PRUEBA BIOQUÍMICA Clasificación

AGAR SANGRE
✓ Combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre
ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar.

AGAR MCCONKEY (GRAM-)

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar selectivamente AGAR CHOCOLATE
bacilos Gram negativos y entéricos y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.
❖ El cristal violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos gram positivos, lo que Medio de cultivo enriquecido no selectivo no diferencial. Variante del
permite la agar sangre. Contiene glóbulos rojos que han sido lisados por el suave
selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el delicado y exigente
❖ Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo
detectadas utilizando Haemophilus influenzae.
el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro. ✓ Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y
hemina, componentes que podemos encontrar dentro de los glóbulos
rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis
de los glóbulos rojos. El agar se llama así debido a su parecido con el
chocolate, pero no contiene nada de este.
✓ Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy
útil para coprocultivos.

AGAR THAYER MARTIN MODIFICADO (Suplemento VCNT):

Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis

AGAR HEKTOEN (Salmonella – Shigella) AGAR MANITOL SALADO (GRAM+)

Contiene una alta concentración (~7.5%-10%) de sal (NaCl), haciéndolo selectivo para
Staphylococcus, porque inhibe la mayoría de las bacterias Gram negativas. Además
contiene manitol otro inhibidor de bacterias Gram negativas y un indicador de pH indicador
de fermentación ; rojo de fenol
Estafilococo coagulasa positivo: Amarillo.
Cultivos de Hongos PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
SISTEMAS AUTOMATIZADOS: sistema vitek
Sistema automatizado de identificación de identificación bacteriana (ID) y estudio de sensibilidad
antimicrobiana (AST). La identificación se basa e la inoculación de microorganismos en tarjetas
con determinados paneles de reacciones bioquímicas.

Detección del Ag Superficie HVB

Detección de Antígenos:
➢ AgsHB
➢ NS1 Dengue
➢ P24 (VIH)
El antígeno de superficie (HBsAg) es un complejo proteínico que envuelve
la nucleocápside del virus de la hepatitis B (VHB); lo conforman tres proteínas
codificadas en el gen orf S

La estructura antigénica del HBsAg ha sido dilucidada con precisión: contiene

un epítopo conformacional inmunodominante, denominado a, y otros dos de
especificidades mutuamente excluyentes (d o y/w o r), lo que permite que
haya cuatro subtipos de HBsAg: adw, ayw, adr, ayr.

Detección de Anticuerpos
✓ Ig M PRUEBAS INMUNOLÓGICAS CON SOPORTE DE FASE SOLIDA
✓ IgG
 FLUIDOS CORPORALES ESTÉRILES
Sustancias que se producen y pueden fluir en el interior de los seres vivos
sin microorganismos.

➢ BACTERIEMIA:
Es la presencia de bacterias circulando en la sangre.
❖ FUNGEMIA:
Es la presencia de hongos circulando en la sangre.
➢ SEPSIS:
Disfunción orgánica potencialmente mortal causada por una
respuesta anómala del huésped a la acción infección.
➢ SHOCK SÉPTICO:
Hypotension e hipoperfusión mantenida
con fracaso multiorgánico (Shock)
secundario a sepsis.

Los agentes causales de bacteriemia están cambiando.

Actualmente los cocos Gram + están superando en frecuencia a los bacilos
Gram negativos probablemente condicionados por la amplia utilización de
antibióticos de amplio espectro y el uso
generalizado de catéteres intravasculares.

Gram +: estafilococo aureus, Estafilococo epidermidis y otros coagulasa negativos,

Enterococo faecalis.
Gram negativos: E. Coli, Klebsiella sp., P. Aeruginosa, Acinetobacter.
Hongos: Cándida sp.

¿CUÁNDO SOLICITAR HEMOCULTIVOS?

• Paciente febril sin foco.
• Shock sin causa aparente.
• Neumonía nosocomial, pielonefritis, meningitis, infección abdominal, infecciones complicadas de piel.
➢ Es una Técnica de laboratorio y herramienta diagnóstica, que tiene como finalidad • Leucopenia o leucocitosis no relacionada con enfermedades hematológicas.
identificar la presencia de un microorganismo (bacteria, hongo) en la sangre. • Hipertermia (> de 39,5°C) en TODO lactante menor de 03 meses.
➢ El tiempo promedio de identificación: 3 - 5 días. • Síndrome febril en inmunodeprimidos.
❖ Diagnóstico preciso • Paciente febril portador de catéter venoso.
❖ Encontrar el microorganismo causante de la bacteriemia
❖ Realizar la prueba de Sensibilidad
❖ Guiar el tratamiento
 ➢ El estudio del líquido cefalorraquídeo (LCR) sigue siendo
de gran utilidad en el diagnóstico de enfermedades
infecciosas, neurológicas y oncológicas.
➢ Los valores normales de proteínas, glucosa y células van
a depender de la edad del paciente.
➢ Existen distintas de laboratorio identificación de detección rápida
pruebas agentes (tinción microbiológicos, de Gram) útiles para la
unas de para un diagnóstico inicial y otras más tardías (cultivo),
estudios con reacción en cadena de la polimerasa para un
diagnóstico definitivo.

LCR normal
✓ Formación: Plexos coroideos de los ventrículos cerebrales y
epéndimo (500 ml/dia, recambio 3 veces al dia)
✓ Reabsorción: Granulaciones aracnoideas
✓ Volumen Normal: Adultos (100 - 150 ml), recién nacido (10 – 60
ml)
✓ Obtención: Punción Lumbar (L3 – L5)
✓ Color: Incoloro
✓ Presión Normal: Depende de la posición y edad (6-18 cm agua:
adulto en decúbito lateral)
✓ Proteínas: 10 – 45 mg/dl
✓ Glucosa: 40 – 80 mg/dl (50-75% de la concentración en sangre)

Examen LCR
• Coloraciones:
– Gram
– Wayson
– Naranja de
acridina
– Tinta china
– Ziehl Neelsen

LIQUIDO PLEURAL
ESTUDIO BIOQUIMICO:
➢ Albumina suero y liquido pleural
➢ LDH suero y liquido pleural
✓ Formación: Pleura parietal
✓ Reabsorción: Vía linfática (pleura parietal)
✓ Volumen Normal: 5 – 15 ml.
✓ Obtención: Punción Pleural
✓ Color: Incoloro
✓ Proteínas: 1 – 1.5 g/dl
✓ Células: 1500 células /microlitro, monocitos (30-75%), células
mesoteliales (3 – 70%), linfocitos (2 – 30%)

ESTUDIO DEL
LIQUIDO SINOVIAL
Importancia:
➢Diagnostico de
enfermedades
Reumatológicas (artritis,
artropatía por
cristales., artrosis etc)
➢ Procedimiento:
Artrocentesis
➢ Indicación principal:
Descarte de
artritis séptica.
LIQUIDO PERITONEAL
Ascitis (acumulación de liquido)
Paracentesis: procedimiento para remover loquido
 INMUNODIAGNÓSTICO:
REACCIONES ANTÍGENO - ANTICUERPO

Fundamento de la Rx Ag-Ac
• Reacciones Antígeno –Anticuerpo in vitro
(Rx serológicas)
• Detección y cuantificación de antígenos y/o
anticuerpos (Dx de enfermedades infecciosas)
Las reacciones Ag-Ac se producen en 3 etapas:
Características • Primaria: formación del complejo Ag-Ac
• Especificidad
• Complejo immune • Secundaria: conduce a eventos visibles: Aglutinación,
• Lugar de unión precipitación.
• Afinidad
• Detección de antígenos y anticuerpos
• Terciaria: destrucción del Ag o su neutralización
• Enlaces no covalentes
• Unión antígeno – anticuerpo reversible
• Interacción primaria
• Interacción secundaria

• Aglutinación
• Antígeno soluble
• Precipitación
• Unión con anticuerpo
• Neutralización toxina - antitoxina
• Fase visible de la • Interacción antígeno – • Formación de entramado insoluble
• Neutralización de virus interacción antígeno – anticuerpo.
• Fijación del complemento • Mayor sensibilidad (red- precipitado)
anticuerpo.
• Inmunofluorescencia • Económicas
• Mayor especificidad • Zona de equivalencia
• ELISA
• Radioinmunoensayo • Sencillas • Inmunofluorescencia
• Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima • Precipitación • Quimioluminiscencia
• Aglutinación • Inmunocromatografía
• Inmunoelectroforesis
• Inmunocromatografía

Técnicas Inmunológicas basadas en Reacciones de Precipitación

• En líquidos: • En gel:
– T ubos de ensayo – Placas Petri

• Técnica cualitativa (agarosa) • Antígeno particulado (insoluble)

• Cuantifica Ig o • Método de Ouchterlon • Identificación de componentes • Unión con anticuerpo
• Formación de grumos (aglutinado)
antígenos solubles • Placa petri con agar proteicos • Zona de equivalencia
• Difusión de la muestra (Ag ó Ac) • Pocillos con Ag y Ac • Dos etapas: • Mayor sensibilidad que precipitación

• Matriz semisólida de agar • Difusión radial – Separación electroforética

• Bandas de precipitación – Difusión y formación de arcos de
• Ag ó Ac específico disuelto • Similitud de antígenos reaccionantes precipitación
• Precipitado visible

Tipos de Reacciones de Aglutinación según las características Tipos de reacciones de Aglutinación Pasiva según la identidad de la Partícula
de las Partículas Aglutinantes Aglutinante

Empleo de partícula Empleo de una partícula

aglutinante inerte a la cual se le • Basada en la sensibilización de la partícula inerte con
aglutinante como antígeno
ha unido un antígeno
el Ag
• Útiles en la detección de Ac en distintos
fluidos biológicos
• Basada en la inmovilización del Ac en la superficie de
la partícula inerte
• Útil para la detección de Ag en muestras biológicas
• Anticuerpos monoclonales

PRUEBAS DE INTERACCIÓN PRIMARIA

• Interacción entre Ag soluble y Ac

• Detección semicuantitativa de Ac • Proteína de fase aguda - Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima
• Tifoidea, Paratifoidea y Brucella • Se incrementa como respuesta
• Formación de precipitado de • En lámina - Detecta antígenos o anticuerpos
partículas muy finas • En tubo
a una inflamación aguda - Cambio de color desencadenado por una enzima
• Visibles macroscópicamente o • Dilución más alta en que se observe reacción positiva inespecífica • Resultados cualitativos y/o cuantitativos
microscópicamente • Títulos diagnósticos hasta 8 días después de la fiebre • Útil en seguimiento • Enzimas utilizadas:
(Ac Tifoidea) y pronóstico
• VDRL – Peroxidasa
• Inversa de la máxima dilución de suero que muestra
• RPR reacción observable en una prueba – Fosfatasa alcalina
• Útil para estimar la concentración del Ac y Ag – Glucosa oxidasa
• Comparar muestras – Acetilcolinesterasa
• Fenómeno prozona
– Lisozima

• Diseñado para detectar

• Ag específico ligado a fase sólida
• Ejemplo: HBsAg • No competitivo • Ag específico ligado a fase sólida • un tipo específico de Ac
• Competitivo • Suero del paciente • Suero del paciente mezclado • Ac específico (Ig M ó IgG) ligado a fase sólida
– AcHBsAg ligado a fase sólida
– Suero de paciente • Captura • Conjugado con el conjugado • Suero del paciente
– Conjugado (Ac marcado con enzima) • Sustrato cromogénico • Sustrato cromogénico • Ag específico
– Substrato cromogénico • Sustrato cromogénico
• Interacción Ag Ac • Emisión de luz durante una reacción química
• Aplicada a cortes de tejidos, o extendidos de
• Marcaje con sustancia fluorescente microorganismos • Excelente sensibilidad
• Uso de microscopio de fluorescencia • Detecta Ag
• FITC (isotiocianato de fluoresceína) • Los marcadores quimioluminiscentes pueden ser unidos a Ag y/o Ac
• Detecta Ag y Ac
• Luminol, ésteres de acridinio, peroxioxalato, dioxietano, tris - rutenio
– Inmunofluorescencia directa • Detecta Ac
– Inmunofluorescencia indirecta • Puede diferenciar Ig M e Ig G
 SISTEMA DE VACUNACIÓN

1 ° VACUNA Según la OMS: Producto biológico que contiene antígenos, utilizado

1) EDGARD JENNER para conseguir una inmunización activa, sin hacer enfermedad,
mediante la vacunación.
(1796,VIRUELA)
2)Louis Pasteur
(1885, R abia)
3)Jonas Salk
(19 55, IPV)
4)Albert Sabin
(19 62, bAPO)

EFECTIVIDAD EFICIENCIA
EFICACIA
Efectos de la vacuna puestos de Relación entre la efectividad
Resultado o beneficio de salud
manifiesto en estudios vacunal y los recursos movilizados
proporcionado a los individuos cuando esa para el desarrollo del programa
vacuna se aplica en condiciones ideales. observacionales.
(eficacia de una vacuna en relacón
Se estudia en ensayos clínicos Es el efecto directo de la vacuna
a su costo)
aleatorizados. (eficada) más el efecto indirecto
Está muy influenciada por el
Depende: Inmunogenicidad, capacidad de aportado por la inmunidad colectiva. precio de la vacuna y por la
generar el tipo apropiado de respuesta Depende: Aceptación y accesibilidad, incidencia de la enfermedad en los
inmunitaria. correcta administración y diferentes grupos de la población
Vacunas vivas atenuadas: Eficacia (90-95%) conservación.

- No efectos adversos, 1 sola dosis Estudios pre clínicos

- Reproducir una respuesta inmunológica similar a la de Fase I: Dosis y seguridad
la infección natural. Fase II: Ensayos de seguridad e
- Ser efectiva (más del 90%de protección). inmunogenicidad
- Tener mínimos efectos secundarios y Fase III: Ensayos de eficacia de vacunas
completa seguridad. Fase IV: Estudios post licencia
- Producir inmunidad persistente a largo plazo. Vigilancia (enfermedad, efectos adversos)
- Existir en dosis única y compatible con otras vacunas. v
Estudios de efectividad de vacunas.
Ser administrada en forma no invasora.
- Poder administrarse precozmente, en los primeros meses
de vida.
- Ser estable a temperatura ambiente.
- Ser de fácil producción y económicamente accesible.
- NO SE INDICA bAPO
- CD4 <200: No indicado vacuna con
virus atenuados
Niños ‹<5 años:
> IPV: 2,4, 6y 18 meses, 4 años.
• Varicela: 12y 15 meses.
Adultos:
- dT: 3 dosis (0, intervalo 2 y 6 meses). Cada 10años
- HvB: 3 dosis (0,intervalo 1y 2 meses)
- Influenza: 1dosis anualmente (0.5 ml)
ESQUEMA SECUENCIAL VCN Y VPN 23
ESQUEMA: 2 +1 Cobertura teórica + Efecto de protección de grupo.
3 dosis Niños > 2 años con factores de riesgo
1° dosis: 2 meses Adultos mayores (> 65 años)
Adultos < 65 años + factores de riesgo
65 años: INFLUENZA (anual) 2° dosis: 4 meses
VPN 23: cada 5 años
65 años (Diabéticos, nefrópatas, neurológicos, + 3° dosis: 12 meses
VCN: 1 vez en la vida
Intervalo mínimo: 2 meses Intervalo: al año.
demenda, Parkinson):
NEUMOCOCO
(VNP23, VNC13)
- Virus Herpes Zoster (Zotavax,
Shingrix)
 Rol del laboratorio en el diagnóstico
de las infecciones de las vías respiratorias superiores, oculares
y cavidad oral.

- Motivo recurrente de consulta en VIRUS:

➢ Inflamación de la mucosa respiratoria desde la atención primaria.
➢ ARN: Virus Respiratorio Sincitial,
Rinovirus, Parainfluenza virus, virus de la
nariz hasta la laringe. - Principal causal de ausentismo escolar Gripe, Coronavirus
➢ Motivo frecuente de consulta y laboral. ➢ DNA: Adenovirus (1,2,4,5,7), bocavirus
- La mayoría de las veces de etiología viral, BACTERIAS:
➢ Frecuente en: Niños y adultos jóvenes autolimitadas en el tiempo y de buen ✓ Streptococo Pneumoniae
➢ Anillo de Waldeyer: Asiento de infecciones pronóstico, independientemente de la conducta ✓ H. Influenzae
✓ Moraxella Catarrhalis
frecuentes. terapéutica adoptada
✓ Streptococcus Pyogenes

USO DE ANTIBIÓTICOS Y
RESISTENCIA BACTERIANA

Motivo de consulta ambulatoria

muy frecuente.
Proceso inflamatorio de la mucosa y
las estructuras del área
faringoamigdalina
Presenta con dolor de garganta de
intensidad variable, fiebre, eritema,
edema, exudado, úlceras o vesículas.

Streptococcus pyogenes EBHGA: CLASIFICACIÓN

Características microbiológicas ➢ ERITEMATOSA
- Portador faríngea (5-25%)
- Mas de 80 serotipos, transmisión aérea, contacto
➢ EXUDATIVA O PULTÁCEA
directo, piel ➢ CON FORMACIÓN DE MEMBRANAS O
- Microscopía: Cocos Grampositivos en cadena (CGPc) PSEUDOMEMBRANAS
Cultivo: Colonias B-hemolíticas en AS ➢ CON VESÍCULAS
Susceptibilidad a Bacitracina , Test de Voges Proskauer (VP), ➢ CON PETEQUIAS
test de pirrolidonil aminopeptidasa (PYR), test de CAMP. ➢ CON HALLAZGOS CLÍNICOS QUE
Factores de Virulencia:
SUGIERAN COMPROMISO
Hemolisinas (ASO), DNAsas;
Estreptokinasas, Hialuronidasas SISTÉMICO Ejm. Difteria, Yersinia Enterocolítica.

Posibilidad
de Infección:
0-2: 2% (Viral)
3: 35%
4 – 5: 50 -55%

Presencia de liquido (mucoso, exudado o mixto) en

la cavidad media del oído asociado a síntomas y
signos agudos.
• Patología frecuente en niños.
• Se produce una obstrucción de la trompa de
Eustaquio-Presión negativa en caja timpánica
facilitando entrada de m.o. y transudación
de líquidos.
CROUP
•Causado por agentes virales: Virus
• Inflamación infecciosa aguda (glotis o laringe) que parainfluenza tipo 1 – 75% de todos los casos. • Inflamación del área supraglótica, causada por
Niños con EA: Bacteriemia, complicaciones
Virus parainfluenza tipo 2 y 3, influenza A y B, (meningitis, neumonía o artritis).
produce obstrucción de la vía aérea superior. Haemophilus influenzae tipo B (serotipo b) – 90%
Radiografia lateral del cuello (ayuda Dx)
adenovirus, rinovirus, enterovirus. • Provoca obstrucción severa
• Edad: 6 meses – 3 años de la via aérea superior (muerte). Dx definitivo: visualización directa.
• Complicaciones: sobreinfección bacteriana (en
• Cuadro clínico : Coriza previa (12 – 48 horas). adultos) por S. aureus, H. influenzae, S. • Edad: 2 – 6 años Muestra biológica:
Disfonía, tos perruna, estridor. • Clínica: Tóxico. Sangre: Hemocultivos seriados (HiB), PCR.
pneumoniae, S. pyogenes o Moraxella catarrhalis. • Vacuna contra el H. influenzae tipo B (HiB), há disminuido Estudios serológicos: detección Ag capsular de Hib
• 20% de urgencias respiratorias (servicio pediátrico): • Dx: Historia clínica, radiografia su incidencia (niños menores de 5 años). (orina)
1-5% hospitalización. de cuello, laringoscopia. • Etiología viral es rara. Toma de muestras faríngeas nasofaríngeas
• Evolución fulminante. contraindicadas.

1ª causa de ceguera en el
mundo:
Tracoma: 6,5 millones
VHS: 20 casos/100.000/año