UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTA MARIA

Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y

Biotecnológicas
Escuela de Ingeniería Biotecnológica

Biología Celular II – Prácticas

Ingeniero Fabrizio Johnson Corrales

Práctica 08 – GERMINACIÓN IN VITRO DEL GRANO DE

POLEN

Integrantes:
· Calderón Moscoso Juan Sebastián
· Rodríguez Cárdenas Ximena
· Rodriguez Meza Pablo
· Rivera Gonzales Martin

Semestre 2 par —- Grupo 1: 11:00 am - 2.00 pm

Arequipa – Perú 2024

I. INTRODUCCIÓN
El polen es una sustancia microscópica producida por las plantas con flores, que juega
un papel fundamental en su reproducción. Está compuesto por diminutos granos que
contienen las células reproductoras masculinas de las plantas, estos granos son
transportados por el viento, insectos o animales hacia otras flores, de esta forma
permite la fertilización y la producción de semillas. Además de su función biológica
esencial, el polen es un componente importante en la alimentación de algunos
insectos, como las abejas, y en los ecosistemas, aunque también puede causar alergias
en humanos cuando es dispersado en grandes cantidades.

La germinación in vitro del grano de polen es una técnica experimental que permite
inducir y observar el desarrollo de granos de polen en condiciones de laboratorio,
proporcionando un entorno controlado para su estudio. Este proceso consiste en hacer
que el polen germine en medios de cultivo artificiales, los cuales imitan las
condiciones necesarias para que el polen desarrolle el tubo polínico, una estructura
tubular que se extiende desde el grano de polen hacia el óvulo de la planta. El tubo
polínico es crucial porque transporta los gametos masculinos (células espermáticas)
hasta el óvulo para llevar a cabo la fecundación.
Este método es ampliamente utilizado en la biotecnología vegetal y en estudios de
biología reproductiva de las plantas, ya que permite evaluar la viabilidad y fertilidad
del polen, la calidad del material reproductivo masculino, y detectar posibles
anormalidades en el desarrollo del tubo polínico. También se emplea en programas de
mejoramiento genético para seleccionar polen con características deseables,
contribuyendo a la optimización de cultivos.
Los medios de cultivo utilizados en la germinación in vitro suelen contener nutrientes
esenciales, como azúcar, minerales y vitaminas, ajustados a un pH y temperatura
óptimos para el crecimiento. Entre las variables que se pueden controlar durante el
experimento se incluyen la concentración de sacarosa, el contenido de calcio y boro, y
la temperatura, ya que todos estos factores influyen en la capacidad del polen para
germinar y en el desarrollo del tubo polínico.
El estudio del polen mediante germinación in vitro es particularmente útil en
situaciones donde es necesario analizar el comportamiento reproductivo en especies
que presentan dificultades para polinizar de manera natural, o cuando se investiga la
resistencia a estrés ambiental, como la sequía o la salinidad, que afectan el
rendimiento reproductivo de las plantas.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO
1. PISTILO (1): es la estructura reproductiva femenina de una flor. Consiste en
un estigma, estilo y ovario. El estigma se eleva y es pegajoso para ayudar a
atrapar el polen. El estilo sostiene el estigma y lo conecta con el ovario, que
contiene el óvulo. Los pétalos atraen a los polinizadores a la flor. Los pétalos
suelen ser de colores brillantes para que los polinizadores los noten.
2. ESTAMBRES (2): Es el órgano masculino de la flor, es donde se localizan
los sacos polínicos que es donde se produce el polen. Al conjunto de
estambres se le denomina androceo. Los estambres están formados,
principalmente, por dos estructuras:
- El filamento es la parte estéril y su función es principalmente
estructural y en la gran mayoría de los casos suele tener una forma
cilíndrica y fina
- La antera es la estructura fértil del estambre, es donde se encuentran
los sacos polínicos donde, normalmente, no hay más de cuatro sacos
por antera.
Sus funciones son:
- Son órganos que producen y contienen el polen, o la información
genética de una planta. Por ello, producen, almacenan y ayudan a
llevar este hasta el ovario de una flor femenina para garantizar la
creación de la semilla.
- Llaman la atención de los organismos polinizadores. Por ello, suelen
ser bastante llamativos al igual que los pétalos de la flor.
- Producen néctar, es una solución líquida, muy rica en azúcares,
aminoácidos, iones minerales y otras sustancias, atraen a los animales
para aumentar así el éxito de la polinización de la flor.
3. GAMETOFITO MASCULINO: (3) los granos de polen alcanzan un estigma
compatible y maduro, desde cada uno de ellos se genera un tubo polínico que
crece hacia el interior del estigma penetrando en los tejidos del estilo. En su
crecimiento el tubo polínico obtiene alimentos de las células que forman el
estilo. El núcleo vegetativo se sitúa cerca del ápice de crecimiento del tubo
polínico y la célula generativa se divide en dos células espermáticas (gametos
masculinos) que utilizan el tubo polínico como un camino de aproximación
hasta el micropilo para alcanzar la ovocélula.
4. TUBO POLÍNICO (4): es una prolongación en forma de tubo que emiten los
granos de polen luego de aterrizar en los estigmas de las flores y que actúa
como un transporte de los gametos masculinos desde el grano de polen hasta
el ó[Link] célula vegetativa es la responsable de formarlo.
Funciones:
- Germina en el estigma, crece a través del estilo y se dirige hacia el
saco embrionario o gametofito femenino de las angiospermas, el cual
se ubica dentro del óvulo. Por dentro del tubo viajan los núcleos
generativos o gametos masculinos. Al llegar a la zona de la micrópila,
el tubo polínico la atraviesa y descarga su contenido cerca del saco
 embrionario. Una vez descargado su contenido, los núcleos generativos
se fusionan con la oosfera y con los núcleos polares en un proceso
conocido como doble fecundación. Si bien muchos granos de polen
llegan al estigma y germinan, solo uno producirá la fecundación.
III. METODOLOGÍA
Iniciamos preparando nuestras mezclas de cemento, miel y aspirina disuelta, para lo
que fuimos en orden, separamos tres beakers y iniciamos por la miel, a la cual le
añadimos un porcentaje de agua hasta que esta quede diluida, seguimos con la
aspirina, trituramos aproximadamente 3 pastillas de aspirina con ayuda de un mortero
y lo disolvemos en agua hasta que la mezcla se homogenice, finalmente pasamos con
el cemento, con el cual echamos una porción de este en el beaker y le añadimos agua
hasta que la mezcla deje de estar viscosa.

Fig 1 y 2, Proceso y resultado de la preparación de nuestras mezclas de miel, aspirina

y cemento

Durante la preparación de la mezcla anterior, una de nuestras compañeras, preparó

una cámara artesanal, colocando dentro de un taper para comida, palillos bajalenguas
en forma horizontal y equidistante, fijándolos con silicona y teniendo cuidado de que
el taper cierre sin afectar a los futuros portaobjetos que contendrá, se le añadió agua
para mantener la cámara fresca.
 Fig 3 y 4, Proceso de armado de nuestra camara artesanal

Continuamos con la preparación de nuestra mezcla de sacarosa y minerales, para lo

cual en un tubo falcon con ayuda de una pipeta, introducimos inicialmente 3.5 ml de
la solución de sacarosa 1.2 M y le añadimos finalmente 6.5 ml de la solución de sales
minerales, consiguiente así 10 ml de mezcla.

Fig 5, Proceso de preparación de nuestra mezcla de sacarosa y minerales

Al mismo tiempo de hacerse los procedimientos anteriores, para facilitar el tiempo, un

compañero extrajo el polen de nuestro material vegetal, raspando de forma cuidadosa
los estambres de esta.

Fig 6 y 7, Extracción del polen a partir del raspado de los estambres de nuestro
material vegetal
 Por consiguiente, rotulamos cinco tubos eppendorf para colocar nuestras
preparaciones, de esta forma distribuimos con ayuda de una micropipeta de 1000 ul,
1 ml de nuestra mezcla de sacarosa y minerales en cada uno de nuestros tubos
eppendorf previamente rotulados del II al V, a excepción del tubo número 1 al cual le
colocamos 1 ml de agua destilada.

Fig, 8 y 9, Distribución de 1 ml de nuestra mezcla de sacarosa y minerales a cada uno de

nuestros tubos rotulados

Luego del proceso anterior, con ayuda de una micropipeta, agregamos nuestras
mezclas de miel, aspirina y cemento diluidos, 500 ul en los tubos III, que contendrá la
miel, IV, que contendrá las aspirinas y V, que contendrá el cemento diluido.

Fig 10, 11 y 12, Distribución de las mezclas de miel, aspirina y cemento en cada uno
de los tubos según corresponda
Posteriormente, ya cuando tenemos el polen listo y separado en una caja petri,
distribuimos la misma cantidad de polen a cada uno de nuestros tubos del I al V y
resuspendemos por inversión. Del tubo I (blaco) cogemos una gota con la pipeta
pasteur, y realizamos una preparación al fresco, la colocamos en una lámina
portaobjetos y procedemos a verla en el microscopio a 40X, al resto, le extraemos una
gota de cada uno de nuestros tubos y las colocamos separadas en portaobjetos
enumeradas según el número de tubo del II al V.

Fig 13, Adición del polen en misma cantidad a cada uno de los V tubos

Finalmente con sumo cuidado, colocamos nuestras láminas portaobjetos ya con las
alícuotas, las colocamos de forma invertida en nuestra cámara artesanal previamente
preparada, tapamos la camara y dejamos incubando por una hora aproximadamente,
sin embargo nosotros, dejamos otra cámara por unos dias mas para apreciar mejores
resultados; Luego de la hora, apreciamos en el microscopio a 40X
 Fig 14, Resultado de nuestras placas invertidas, cada una con la alícuotas de cada tubo con
polen correspondiente

IV. RESULTADOS
● Resultados 1er intento
Tabla 1: Resultado blanco 0 Horas

Muestra blanco al 40X de aumento

Tabla 2: Resultado de control y miel, después de la cámara húmeda.

Muestra control al 40X de aumento Muestra miel al 40X de aumento

Tabla 3: Resultado de aspirina y cemento, después de la cámara húmeda.

Muestra aspirina al 40X de aumento Muestra cemento al 40X de aumento
● Resultados 2do intento
Tabla 4: Resultado blanco 0 Horas,
2do intento

Muestra blanco al 40X de aumento

Tabla 5: Resultado de control y miel, después de la cámara húmeda. 2do intento

Muestra control al 40X de aumento Muestra miel al 40X de aumento

Tabla 6: Resultado de aspirina y cemento, después de la cámara húmeda. 2do intento.

Muestra aspirina al 40X de aumento Muestra cemento al 40X de aumento

V. DISCUSIÓN
Para la germinación in vitro del tubo polínico se necesitan muchas condiciones como:
la temperatura, la humedad y la composición del medio nutritivo. Los cuales se buscó
igualar en la práctica. Sin embargo los resultados del 1er intento obtenidos no
muestran formación del tubo polínico, Esto se posiblemente se puede deber a la
mezcla de 2 tipos de polen o a una posible contaminación a la hora de la preparación
de las muestras. Sin embargo los resultados del 2do intento ya se nota una mejora,
debido a que en todas las muestras, el tubo polínico aparece, aunque en un pequeño
tamaño.
VI. CONCLUSIONES
En la práctica del 1er intento hubo muchos errores al momento de realizarla, mala
comunicación, desorden, etc, lo que provocó que los resultados no sean los deseados,
por ende se debe considerar que el trabajo en equipo es muy importante al momento
de desarrollar la práctica para que no haya problemas y se logren los objetivos
deseados. Por el contrario en el 2do intento hubo una mayor coordinación al momento
de ponernos de acuerdo en que polen traer y al realizar la práctica, el cual llevó a que
si se lograra apreciar un poquito de la germinación del tubo polinico.
VII. CUESTIONARIO
a) Dibujar un grano de polen sin germinar, otro al inicio de la germinación y
otro bien germinado.

b) Describe la estructura de un grano de polen.

 c) ¿Cuál es la importancia de la germinación in vitro en el área de la
Biotecnología vegetal?
- La germinación in vitro es crucial en la biotecnología vegetal debido a
su papel en la conservación de especies vegetales y la propagación
masiva de plantas de interés agrícola o medicinal. Este método permite
el cultivo controlado de embriones, semillas o polen, promoviendo el
desarrollo de plántulas en condiciones estériles y sin la influencia de
factores externos que podrían afectar el crecimiento, como
enfermedades o condiciones climáticas adversas. Esta técnica, permite
conservar el material genético sin la necesidad de utilizar suelos ni
grandes áreas de cultivo y es clave en la ingeniería genética para la
obtención de plantas transgénicas y la mejora de cultivos, ya que
permite la regeneración de plantas a partir de células o tejidos que han
sido modificados genéticamente​
VIII. BIBLIOGRAFÍA
1. ¿Cuál es la función del pistilo en una flor? [Internet]. [Link]. 2024 [cited 2024 Oct 18]. Available
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2. Acosta MB. Qué son los ESTAMBRES de una FLOR, su función y tipos - Resumen [Internet].
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3. Conceptos Básicos [Internet]. [Link]. [cited 2024 Oct 18]. Available from:
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