Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Biología

Curso: Bio210
Microbiología

Informe de laboratorio
Tema: Control Químico

Estudiantes:
Litzy Villarreal 4-828-2038
Alejandra Quintero 4-826-1481
Ericka Saucedo 4- 836-2002
Alexandra Adames 4-827-1050
Ahilenis Pitti 4-834-1732

Grupo A

Profesora:
Giselle Urriola

Año lectivo

2024
Marco teórico

Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre

las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:

 bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;

 bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

En general, si no sólo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo

de microorganismos, hablamos respectivamente de agentes
microbiostáticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia
química, la línea de demarcación entre un efecto microbiostático y otro
microbicida depende muchas veces de la concentración de dicha
sustancia y del tiempo durante el que actúa.

¿Cómo podemos saber que un microorganismo está “muerto”? El único

criterio válido es la pérdida irreversible de la capacidad de división
celular, o sea, de viabilidad, y se comprobar con técnicas con placas de
Petri (confirmando que no crecen en medios sólidos adecuados).

Antes de proceder al estudio de las diversas moléculas que pueden

afectar el crecimiento o la viabilidad de los microorganismos, veamos
unas cuantas definiciones básicas.

Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación total de

todas las formas de vida microbiana (o sea, su “muerte” o pérdida
irreversible de su viabilidad). (También existen agentes físicos
esterilizantes, como ya vimos en los dos capítulos anteriores).

Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo

químicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos
patógenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos
suelen) presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se
suelen emplear sólo sobre materiales inertes.

Agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas que se

oponen a la sepsis o putrefacción de materiales vivos. Se trata de
desinfectantes con baja actividad tóxica hacia los tejidos vivos donde se
aplican.

Quimioterápicos son compuestos químicos con actividad microbicida o

microbiostática, con una toxicidad suficientemente baja como para
permitir su administración a un organismo superior, en cuyos fluidos
corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a
concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos
dentro del organismo.

Todos los días usamos agentes químicos para controlar el crecimiento

microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloración de
las aguas potables, antisépticos para la piel y el tratamiento de heridas,
desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los
laboratorios, quimioterápicos y antibióticos para tratar enfermedades
bacterianas, etc.

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS

Como se recordará cuando tratamos el tema del calor como agentes

esterilizantes, la muerte de una población bacteriana se podía
representar como una curva exponencial, expresión de la cinética de
primer orden. Este tipo de cinética también es aplicable a la muerte
microbiana cuando se aplica un agente químico a una concentración
suficientemente alta. Sin embargo, cuando se aplican menores
concentraciones del agente, se pueden encontrar cinéticas diferentes,
expresables como curvas sigmoidales.

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE

 Concentración del agente y tiempo de actuación

 pH: El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria
como al grado de ionización del agente. Las formas ionizadas de
los agentes disociables pasan mejor por las membranas biológicas
y son más efectivos.

Los agentes aniónicos suelen ser más efectivos a pH ácidos.

Los agentes catiónicos muestran más eficacia a pH alcalinos.

 Temperatura. Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta

la potencia de los desinfectantes. Para muchos agentes la subida
de 10 grados supone duplicar la tasa de muerte.
 Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la
población microbiana según la especie empleada: p. ej., el bacilo
tuberculoso resiste los hipocloritos mejor que otras bacterias;
según la fase de cultivo; dependiendo de la presencia de cápsulas
o de esporas (suelen conferir más resistencia); dependiendo del
número de microorganismos iniciales.
  Presencia de materiales extraños: La existencia de materia
orgánica en el material a tratar (p. ej., sangre, suero, pus) afecta
negativamente a la potencia de los desinfectantes de tipo
oxidante (como los hipocloritos) y de tipo desnaturalizante de
proteínas, hasta el punto de que pueden llegar a hacerlos inactivos
en cuanto a su poder desinfectante o esterilizante. Por lo tanto,
para el empleo eficaz de muchos desinfectantes hay que contar
con este factor, determinando previamente el gasto de materia
orgánica inerte, o calculando la potencia neta del desinfectante en
presencia de la materia orgánica.

Materiales

 Escherichia coli.
 Staphylocccus aureus.
 Platos de agar nutritivo.
 Pipeta estéril.
 Desinfectantes:
 Sip
 Spum
 Fabuloso
 Magia blanca
 Cloro
 Mistolín

Metodología

El profesor le suministrara 3
cultivos en caldo nutritivo Tome cada tubo con 5ml del
de S. aureus; B. subtilis y E. desinfectante a utilizar y le
Coli y tubos de CLORO adiciona 1ml del caldo
rotulados 2%, 3% y 10%; inoculado con las bacterias.
alcohol 50%, 70% y 95%.

Pasados 5 minutos, tome

una gota con el asa del
Mesa 1; con una pipeta
material inoculado en
esteril transfiera el material
cada desinfectante y
inoculado (1 ml).
siémbrelo en platos de
 Pasar la gradilla con los
desinfectantes inoculados a La mesa 3 realizara la
la mesa 2. Pasados 15 prueba a los 25 minutos
minutos a partir de la y la mesa 4 realizara la
inoculación inicial. prueba a los 35 minutos.

La mesa 5 lo hará a los 45 minutos después

de la inoculación inicial y incube los platos
por 24 horas a 37 grados y observe el
crecimiento.
 Resultados

Desinfectante E. coli (gram -) Sthaphylococcus (gram +)

Fabuloso 0 15
Sip 13 24
Cloro 17 40
Spum 0 28
Magia blanca 0 18
Mistolin 0 0
Cuadro 1. Diámetro de los halos de inhibición

Imagen [Link] del cultivo [Link]

Imagen 2. Placa del cultivo de Sthaphylococcus

 Discusión de resultados
El desinfectante “Fabuloso” no mostró halo inhibitorio en el cultivo de la bacteria
gramnegativa, pero si en el grampositivas. Contiene como agentes activos; alcohol
etoxilado C9-C11, Sulfonato de alquilbenceno lineal, laureth sulfato de sodio 20%
y glutaraldehido 0.05%.
Aunque esté presente en una concentración baja, el glutaraldehído es un potente
agente antimicrobiano que actúa por alquilación de grupos sulfhidrilo y amino en
las proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos.
El Alcohol etoxilado C9-C11, Sulfonato de alquilbenceno lineal, laureth sulfato de
sodio 20% son ayudan a reducir la tensión superficial y mejorar la capacidad del
desinfectante para esparcirse y limpiar. También pueden desnaturalizar proteínas y
alterar las membranas celulares, pero su acción antimicrobiana no es tan fuerte
como la del glutaraldehído.
Podríamos teorizar qué la actividad antimicrobiana observada en “Fabuloso” se
debe principalmente al glutaraldehído, que es más efectivo contra bacterias
grampositivas debido a diferencias en la estructura de sus paredes celulares.
El desinfectante SIP mostró una gran capacidad antimicrobiana tanto para la E.
Coli como para la Staphylococcus, esto se debe a la combinación de componentes
químicos que se encuentran en dicho desinfectante, El Cloruro de n-alkylbencyl
dimethyl y el amonio 1% forman parte de los amonio cuaterniarios. Los amonios
cuaternarios poseen un alto potencial biocida, ya que son antimicrobiano,
antivírico y antibacteriales, eficaces en la eliminación de bacterias grampositivas y
gramnegativas, sin embargo, en bacterias gramnegativas presentan menor
eficacia,hecho que pudimos comprobar, en el cultivo gramnegativo hubo un halo
de inhibición de 13 mm y en el cultivo grampositivas fue de 24 mm, el
desinfectante presentó una menor eficacia en el cultivo de la bacteria
gramnegativa.
Su modo de acción consiste en formar una unión irreversible a los fosfolípidos y
proteínas presentes en la membrana de los microorganismos, dañando su
permeabilidad. Las cadenas carbonadas (parte apolar) presentes en su estructura
les permite penetrar las membranas de los microorganismos, mientras que por el
nitrógeno catiónico (parte polar) interaccionan con los fosfatos de los fosfolípidos,
causando la salida al exterior del material vital citoplasmático.
El Cloro también tuvo acción inhibitoria en ambos cultivos, los agentes activos de
este desinfectante es hipoclorito de sodio y el hidróxido de sodio.
Se ha comprobado la actividad antimicrobiana del hipoclorito de sodio es a causa
de la pérdida respiratoria en las membranas bacterianas, debido a una reacción
irreversible con las enzimas de membrana que contienen azufre y grupos hemo,
así como de proteínas estructurales, causando la muerte celular. El daño
ocasionado a las proteínas indica un efecto negativo en la transducción y el
transporte de energía, lo que conduce a hidrólisis del ATP. La fragmentación de las
proteínas también interrumpe la síntesis de ADN. La reacción de HClO con los
grupos aminos de los nucleótidos produce cloraminas reactivas, las cuales rompen
los enlaces de hidrógeno y disocian las dobles cadenas de ADN. El HClO
reacciona con ácidos grasos insaturados produciendo clorohidrinas. Las
clorohidrinas lipídicas provocan lisis celular y toxicidad.
El desinfectante SPUM tiene como agente activo amonio de quinta generación, El
amonio cuaternario es un limpiador desinfectante que tiene un amplio espectro de
eliminación de microorganismos como: virus, bacterias, hongos, etc En cuanto a
su mecanismo de acción, los amonios cuaternarios son agentes activos que
interactúan con la membrana citoplasmática de las bacterias y la membrana
plasmática de las levaduras y otros microorganismos eucariotas como los hongos
filamentosos (mohos). Su actividad hidrofóbica también los hace efectivos contra
virus que contienen lípidos (virus envueltos) y contra los virus desnudos y esporas
que no los contienen. En concentraciones bajas son alguicidas, bactericidas,
esporicidas y fungicidas.
El desinfectante Magia blanca contiene los agentes químicos, Cloruro de
Alquildimetilbencilamonio 0.02-0.7%, Cloruro de Octildecidimetilamonio (0.04 –
0.5%),, estos interfieren con la integridad de la membrana celular de los
microorganismos al penetrar en ella. Esto provoca la pérdida de su permeabilidad
y la desorganización de la estructura, lo que lleva a la muerte [Link]
mecanismo de acción es la desnaturalización de proteínas, al entrar en contacto
con las proteínas de los microorganismos, estos amonios pueden
desnaturalizarlas, lo que interfiere con sus funciones celulares vitales.
En el caso del desinfectante Mistolin, no se observaron ningún halo de inhibición
en ninguno de los dos cultivos, este desinfectante contiene sulfanato de sodio,
conocido por sus propiedades como surfactante, es decir, ayuda a reducir la
tensión superficial de los líquidos, mejorando la limpieza y el esparcimiento de
otros agentes [Link] embargo, también contiene glutaraldehido, un
conocido agente antimicrobiano y se usa ampliamente como desinfectante y
esterilizante. Tiene la capacidad de matar una amplia gama de microorganismos,
incluidos bacterias, virus y esporas. El glutaraldehído se utiliza en ambientes
médicos, industriales y de laboratorio para desinfectar equipos y superficies
críticas.
El porcentaje de este último agente activo en desinfectante debió ser muy bajo, ya
qué nuestros resultados muestran que no tuvo acción inhibitoria alguna. El mistolin
entonces, podríamos decir que deja un buen aroma, pero no tiene efecto
antimicrobiano.

Conclusión
En conclusión, logramos ver a través de este laboratorio la eficacia de los
desinfectantes como agentes químicos, cuáles fueron los más susceptibles a
bacterias y la importancia del uso de agentes químicos, que es fundamental para
el control de microorganismos en diversas áreas.
Bibliografía
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Muñoz-Castellanos, L. N., Borrego-Loya, A., Villalba-Bejarano, C. V.,

González-Escobedo, R., Orduño-Cruz, N., Villezcas-Villegas, G. P.,
Rodríguez-Roque, M. J., Avila-Quezada, G. D., & Vargas-Arispuro, I.
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