Reacción en Cadena de la Polimerasa
Introducción:
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR ) es una de las técnicas de laboratorio
utilizada para amplificar fragmentos de ADN específicos. Esta ha revolucionado la
biología molecular, debido a que permite obtener in vitro millones de copias de un
fragmento de ADN a partir de una sola molécula.
Esta técnica es una herramienta fundamental en biología molecular y además posee
una gran cantidad de aplicaciones y ventajas. estas han ido avanzando son los años y
cada vez se encuentran mayor utilidad a esta técnica
Materiales:
-Diapositivas y videos del tema
Métodos:
El docente expone y explica sobre el concepto de la PCR,su importancia, las faces
que esta posee, la metodología sus aplicaciones ,las ventajas y desventajas de esta
técnica
Resultados
-Comprende correctamente la función e importancia de la PCR
-Entiende correctamente todas las fases de la PCR
-Comprende las ventajas y desventajas de esta técnica
-Comprende las distintas aplicaciones de la PCR y el gran impacto de esta en el área
de la biología molecular
Conclusiones:
La PCR es una técnica que permite una gran cantidad de aplicaciones y ha logrado un
gran impacto en el desarrollo de la tecnología molecular. Estas aplicaciones se han ido
incrementando con el avance de la tecnología Por ello es de gran utilidad conocer
correctamente esta técnica y los procesos que la componen
-
Cuestionario
¿Cuál es el fundamento de la PCR?
La PCR depende de un ADN polimerasa termoestable, la Taq polimerasa, y requiere
de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de ADN de interés.
En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de temperatura
que permiten la producción de muchas copias de la región blanco.
¿Qué es un termociclador?
Un termociclador es un aparato utilizado en biología molecular que permite realizar los
ciclos de temperaturas necesarios para la amplificación de diversas hebras de ADN en
la técnica de la PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) o para reacciones de
secuencia con el método de Sanger
¿Cuáles son las etapas de la PCR y describa brevemente cada una de ellas?
1. Desnaturalización: En esta etapa, se calienta la muestra de ADN a una temperatura
elevada para separar las dos hebras de ADN. Esto se logra mediante la ruptura de los
puentes de hidrógeno que mantienen unidas las dos hebras de ADN .
2. Alineamiento o hibridación: En esta etapa, se enfría la muestra de ADN para permitir
que los cebadores se unan a las hebras de ADN complementarias. Los cebadores son
pequeñas secuencias de ADN que se unen a las hebras de ADN complementarias y
actúan como puntos de partida para la Taq polimerasa .
3. Extensión o polimerización: En esta etapa, se calienta la muestra de ADN a una
temperatura óptima para la actividad de la Taq polimerasa. La Taq polimerasa es una
enzima que agrega nucleótidos a las hebras de ADN complementarias, creando
nuevas hebras de ADN .
4. Describa brevemente diferentes tipos de PCR (minimo 3 tipos)
5. PCR básica: amplifica fragmentos de ADN mediante ciclos de desnaturalización,
alineamiento y extensión.
6. PCR anidada: amplifica muestras mínimas de ADN mediante dos rondas de PCR
con cebadores diferentes.
7. PCR in situ: detecta ADN en el mismo lugar de la muestra, sin tener que
procesarla primer
¿Cuál es la importancia de la temperatura en cada etapa de la PCR y cómo se
optimiza para garantizar la eficiencia del proceso?
La temperatura es un factor crítico en cada etapa de la PCR. En la primera etapa, la
temperatura se eleva a alrededor de 95 °C para separar los ácidos nucleicos de doble
cadena. En la segunda etapa, la temperatura se reduce a alrededor de 50-60 °C para
permitir el alineamiento de los cebadores al ADN molde. En la tercera etapa, la
temperatura se eleva a 68-72 °C para facilitar la polimerización por parte de la ADN
polimerasa .
Para optimizar la eficiencia del proceso, es importante ajustar la temperatura de cada
etapa de la PCR. Una regla general es usar una temperatura de recocido que sea 3-5
grados Celsius más baja que la temperatura de fusión. Además, los científicos suelen
extender 1000 pares de bases de ADN por minuto . Las temperaturas de Tm se
pueden optimizar haciendo una PCR con gradiente de temperatura en 45°C e ir
subiendo gradualmente cada 5 °C por debajo de la Tm calculada. Esta temperatura
tiene una duración entre 15 a 60 segundos
Referencias:
1, Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
[Link]
regulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
2. ¿Qué es la PCR y para qué se utiliza?
[Link]