“UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA”
FACULTAD DE AGRONOMIA
“IDENTIFICACIÓN DE MINERALES SECUNDARIOS
UTILIZANDO MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO”
ALUMNOS:
QUISANI YAURI, Royer
DOCENTE:
HUAMANI YUPANQUI, Hugo
CURSO:
GEOLOGIA AGRICOLA
CICLO: 2024-II
Tingo María- Perú
2024-II
I. INTRODUCCIÓN
El área de la Microscopia electrónica incluye básicamente dos tipos de microscopios
electrónicos: El Microscopio Electrónico de Barrido (MEB) y el Microscopio Electrónico de
Transmisión (MET); este trabajo trata especialmente de los principios teóricos básicos del MEB.
Este instrumento surge de la necesidad de observar detalles muy pequeños o partículas sólidas
que no son posibles de resolver con la longitud de onda de la luz visible (380 nm a 750 nm). El
MEB usa, como radiación a los electrones acelerados con una λ de alrededor de 2800 veces
menor que la de la luz, lo que permite obtener resoluciones de entre 3 nm y 4 nm. Una
comparación general entre los microscopios de luz (MO), transmisión (MET) y barrido (MEB)
revela algunas semejanzas y diferencias entre ellos. Michael J. (2007)
La lente condensadora, tanto en el MO como en el MET, colima el haz de iluminación, el
cual pasa a través de una muestra delgada; y la lente objetivo forma la imagen del espécimen
sobre el ocular del MO o sobre la pantalla fluorescente del MET. En contraste, en el MEB, las
lentes condensadora y objetivo disminuyen el diámetro del haz de electrones (entre 4 nm y 200
nm) que se produjo en el filamento. Asimismo, la lente objetivo se encarga de enfocar este haz
disminuido ( punta ) sobre la superficie del espécimen; de tal manera, esta lente no forma la
imagen del material en estudio. Finalmente, el haz barre la superficie de la muestra, lo cual
produce varias señales; la de electrones secundarios, después de ser colectada, se convierte en
una señal eléctrica, que se amplifica y sirve para alimentar el tubo de rayos catódicos (TRC). Esta
señal, en el TRC se usa para controlar la brillantez del punto correspondiente. Así, la señal
emitida por la superficie del espécimen es mostrada en la pantalla del monitor como una imagen.
VersaciR.A. (2008)
Si bien estos microscopios comenzaron a desarrollarse comercialmente alrededor de 1960,
su performance y facilidad de operación fue mejorando continuamente. Un instrumento moderno
permite observar muestras con una resolución de unos 4 nanómetros con magnificaciones de
hasta 300.000x. Se pueden obtener así imágenes de todo tipo de materiales estructurales o de
material biológico con un mínimo de preparación previa y observar directamente todo tipo de
superficies con una gran profundidad de foco. Ésta es una característica privativa de los
instrumentos electrónicos que permite la obtención de micrografías en foco de superficies
irregulares como una superficie de fractura. Para esto solamente es necesario asegurar que las
muestras sean limpias, secas, resistentes al alto vacío del instrumento y buenas conductoras
eléctricas. Si se trata de
observar un material no conductor, normalmente se recubren las muestras con una delgada capa
metálica, [Link]. oro, o desecando previamente las muestras que tuviesen altos contenidos de vapor
de agua. Las continuas mejoras condujeron al desarrollo en la década de 1980 del denominado
Microscopio Electrónico Ambiental (ESEM por Environmental Scanning Electron Microscope).
En estos instrumentos avanzados se puede alterar el alto vacío alrededor de la muestra
con una pequeña sobre-presión pudiéndose obtener imágenes electrónicas de resolución similar a
la de un microscopio electrónico de barrido convencional. Este nuevo tipo de instrumentos
permite entonces la observación de toda clase de muestras no conductoras, así como muestras
biológicas hidratadas o contaminadas, superando las restricciones originales debidas al alto vacío
exigido de la columna del microscopio. Michael J. (2007)
II. OBJETIVO
2.1. Objetivo general
Reconocimiento de minerales secundarios utilizando microscopio electrónico de
barrido
2.2. Objetivo especifico
Identificación de los minerales secundarios utilizando el microscopio electrónico de
barrido.
Fundamentos del microscopio electrónico de barrido.
III. REVISIÓN DE LITERATURA
La microscopía electrónica se fundamenta en la emisión de un barrido de haz de
electrones sobre la muestra, los cuales interaccionan con la misma produciendo diferentes tipos
de señales que son recogidas por detectores. Finalmente, la información obtenida en los
detectores es transformada para dar lugar a una imagen de alta definición, con una resolución de
0,4 a 20 nanómetros. Como conclusión, obtenemos una imagen de alta resolución de la topografía
de la superficie de nuestra muestra. VersaciR.A. (2008)
3.1. Tipos de microscopios electrónicos
3.1.1. Microscopio electrónico de transmisión (TEM)
El microscopio electrónico de transmisión (TEM por sus siglas en inglés y MET en
español) es el tipo original de microscopio electrónico y sirve para observar las estructuras
internas de una
muestra, como si de una radiografía se tratase. Este instrumento aprovecha los fenómenos físico-
atómicos que suceden cuando un haz de electrones acelerado colisiona con una muestra delgada
preparada adecuadamente. Michael J. (2007)
Su funcionamiento se basa en dirigir electrones hacia la muestra a través de un campo
eléctrico originado por electroimanes. Estos electrones, al difractarse, crean una imagen
magnificada de la muestra.
3.1.2. El microscopio electrónico de barrido (SEM)
El microscopio electrónico de barrido o Scanning Electrón Microscope (SEM) se usa para
visualizar la forma tridimensional de la muestra. Permite observar la superficie de los objetos
siempre y cuando sean conductores. Para ello realiza sondeos en diferentes puntos de la muestra
bañada con oro u otros metales conductores.
En este caso, los electrones no iluminan toda la muestra a la vez sino que realizan un
barrido de la superficie, escaneando progresivamente los distintos puntos de la muestra. En esta
ocasión, la imagen se crea a partir de los electrones reflejados por el objeto, y no de los que lo
han atravesado, como ocurre en el MET. VersaciR.A. (2008)
3.2. Partes del microscopio electrónico de barrido
3.2.1. Cañón de electrones
Sirve para generar y dirigir un haz de electrones con la energía suficiente y de la forma
adecuada. Sería el equivalente a la fuente de luz de un microscopio óptico.
Para generar dichos electrones el cañón utiliza un filamento de tungsteno que al
calentarse, aumenta la energía de átomos y electrones. Cuando se produce la suficiente energía
los electrones escapan de sus átomos y son liberados. Posteriormente estos electrones son
conducidos hacia la muestra. (Revista Horizonte Minero. 2019)
3.2.2. Lentes electromagnéticas
A diferencia de los microscopios ópticos que utilizan lentes convergentes y divergentes
para desviar la luz, los microscopios electrónicos usan lentes electromagnéticas.
Dichas lentes producen campos eléctricos y magnéticos que provocan que las trayectorias
de los electrones diverjan o converjan en un punto determinado. Cada una de las lentes actúa
como una lupa manteniendo un increíble nivel de detalle y resolución. (Revista Horizonte Minero.
2019)
3.2.3. Cámara de vacío
El funcionamiento del microscopio electrónico se tiene que llevar a cabo en una cámara
de vacío. la función de la cámara de vacío es evitar que los electrones interactúen con las
moléculas del aire, ya que si esto ocurriera no se podrían determinar sus trayectorias. Asimismo,
la muestra también se debe colocar en el interior de la cámara de vacío. Por este motivo, entre
otros, no es posible utilizar muestras vivas en un microscopio electrónico.
3.2.4. Detector
Si se trata de un microscopio electrónico de barrido, los electrones emitidos son dirigidos
hacia la muestra y rebotan sobre esta. El detector es un sensor cuya función es recoger y medir la
información de los electrones que rebotan de la muestra. Posteriormente esta información es
enviada a un ordenador. Bozzano P.B., VersaciR.A. (2008)
3.2.5. Pantalla fluorescente
Si se trata de un microscopio electrónico de transmisión, el haz de electrones emitidos
atraviesa la muestra. La pantalla es un dispositivo que recoge la información de los electrones
que atraviesan la muestra, para enviarla posteriormente al ordenador de procesado.
3.2.6. Sistema de procesado y visualización
Los datos recogidos en el detector son enviados a un ordenador para su procesamiento
que permitirá reconstituir la imagen del objeto de la muestra. Este sistema asignará colores a la
imagen para facilitar su visualización en una pantalla. Bozzano P.B., VersaciR.A. (2008)
3.3. Uso del microscopio electrónico de barrido
3.3.1. En la investigación científica y en la medicina
El microscopio electrónico ha sido y es una herramienta muy útil en el campo de la
investigación médica y biomédica. Gracias al gran poder de aumento de estos instrumentos, es
posible visualizar la estructura de multitud de microorganismos, células, grandes moléculas,
muestras de biopsias, virus, etc, permitiendo realizar un estudio morfológico.
Se utilizan generalmente en laboratorios de investigación, universidades y otros centros
especializados. Los microscopios electrónicos permiten observar estructuras con gran detalle
aportando la información necesaria sobre su función. A través de ellos podemos explorar la
naturaleza y los mecanismos moleculares de la enfermedad, revelando la estructura de tejidos,
células biológicas y proteínas. También en el campo de la Odontología encontramos múltiples
aplicaciones del microscopio electrónico de barrido.
3.3.2. Análisis de recursos naturales
El microscopio electrónico se puede emplear para analizar materiales, siendo una valiosa
herramienta para las empresas mineras. Pueden reducir el riesgo de la exploración y extracción de
petróleo y gas así como ayudar a aumentar y validar la entrada a determinadas zonas geológicas.
Es muy útil en Geología para realizar un estudio tanto morfológico como estructural de la
muestra. También lo es en investigaciones geomineras, mineralógicas, petrológicas o
relacionadas con la cristalografía, así como en Paleontología y arqueología. Finalmente, no
podemos dejar de mencionar sus aplicaciones en Botánica. Pozo Rodríguez M(2019)
3.3.3. Identificación de muestra de minerales
La identificación de muestras de mineral secundario se puede realizar siguiendo estos pasos:
Preparación de muestras: Primero, es importante tener una muestra representativa
del mineral que se desea identificar. La muestra debe estar preparada
adecuadamente para facilitar la adición de los minerales. 5
Muestreo y toma de imágenes: A continuación, se lleva la muestra al microscopio.
Las imágenes obtenidas a través de este método proporcionan información
estructural y morfológica que ayuda a identificar los minerales.
Identificación de minerales: Las técnicas de reconocimiento global de los minerales,
considerando propiedades ópticas como relieve, color, y otras, se utilizan para
identificar los minerales presentes en la muestra (Jorge Iván Londoño Escobar,
2010).
Uso de software de análisis de imagen: Puede ser útil el uso de software de análisis
de imagen para la cuantificación e identificación de minerales.
Conocimiento de los minerales: Finalmente, es útil tener un conocimiento básico de
los minerales para identificar correctamente éstos en las muestras.
3.3.4. Aplicaciones en la industria alimentaria
La microscopia electrónica es muy utilizada con propósitos industriales para desarrollar
nuevos productos. Es frecuente su uso en análisis y control de calidad, posibilitando el
seguimiento morfológico de los procesos y controlando los productos finales de uso y consumo.
Por ejemplo, en las industrias de electrónica son claves en el control de calidad de las
partes electrónicas. Se sirven de los microscopios electrónicos para la fabricación de
semiconductores utilizados frecuentemente para el desarrollo de circuitos integrados más
conocidos como chips o microchips. También es un recurso habitual en otras industrias como la
aeronáutica, automotor, textil, industrias farmacéuticas o metalurgia. Pozo Rodríguez M. (2019)
3.4. COMPOSICIÓN DE LA MUES-TRA
La composición de la muestra afecta tanto la profundidad como la forma del volumen de
interacción. Muestras más densas o compuestas por elementos pesados tienden a reducir la
penetración del haz y reducir además la distancia que pue-den atravesar las señales generadas sin
ser reabsorbidas por la muestra. El volumen de interacción tiende a ser más aplastado y de forma
semejante a una semiesfera. Por el contrario, en muestras menos densas o compuestas por
elementos livianos el volumen toma la forma característica de gota. Melgarejo JC, Proenza JA,(2010)
3.5. PROCESO HISTOLÓGICO.
El proceso histológico es la serie de métodos y técnicas que se emplearán para el estudio
de las características morfológicas y celulares de los tejidos. Echlin P. (2009)
3.5.1. Obtención del tejido.
Debido a que el interés radica en la microultraestructura de la muestra, se realizan cortes
en las muestras para obtener muestras de un tamaño de pocos milímetros de largo, ancho y
grosor.
3.5.2. Fijación.
La fijación es la técnica que nos permite preservar las características morfológicas y
moleculares lo más parecidos posibles a las que poseía en estado vivo. Uno de los métodos para
la
fijación es el método de fijación por inmersión; en este método la muestra se sumerge en la
sustancia fijadora. Los fijadores empleados en la preparación histológica pueden ser:
Karnovsky: Consiste en una mezcla de paraformaldehído al 4% y glutaraldehído al
2%. (33) Se utiliza especialmente para la fijación de muestras 47 destinadas al
estudio con microscopio electrónico. Tiene una velocidad de penetración de tejidos
bastante rápida, conserva los organelos celulares, produce escasa retracción y
endurecimiento de los tejidos.
Tetróxido de osmio (OsO4): Forma puentes entre moléculas. Se emplea al 1 % en
soluciones tamponadas. Es buen fijador de la microultraestructura de la célula por lo
que se emplea habitualmente para las observaciones con el microscopio electrónico.
Es un buen fijador para grasas y membranas celulares. Por su fuerte carácter
oxidante no se usa para tinciones convencionales, excepto para las impregnaciones
argénticas como el método de Golgi. (40) Es habitual que los tejidos destinados a
microscopía electrónica sean inicialmente fijados en glutaraldehído (1 al 3 %) y
paraformaldehído (2 al 4 %), para posteriormente ser fijados en Tetróxido de osmio
al 1 % en solución tamponada. Las desventajas de estos fijadores son su toxicidad y
capacidad contaminante del medio ambiente. (40) Durante el proceso de fijación
hay que tener en cuenta las siguientes precauciones:
Las piezas de tejido no deberían superar los 0.5 cm de espesor para que el fijador
alcance el interior de la pieza antes de que ésta comience a deteriorarse. Esto
depende de la velocidad de penetración del fijador y de las características del tejido,
por ejemplo, si tiene cavidades por donde penetre la solución fijadora. 48
El volumen recomendado de fijador debe ser 20 veces superior al volumen de la
pieza.
La os molaridad entre tejido y solución fijadora deben estar equilibradas.
El pH del fijador debe ser próximo al fisiológico.
El tiempo de fijación depende de cada tipo de fijador, pero generalmente existe un
tiempo máximo para cada uno de ellos que no debe ser excedido. (40)
3.5.3. Deshidratación.
Una vez fijada la muestra procedemos a sustituir el agua de los tejidos por un solvente
orgánico que sea miscible con la resinas. Para ello se deshidrata el tejido mediante incubaciones
sucesivas en gradaciones crecientes de etanol o acetona
3.5.4. Secado.
Las muestras que quieran ser investigadas mediante microscopía electrónica de barrido
deben ser secadas antes de ser introducidas en el microscopio, de otro modo la baja presión en el
mismo causará que el agua (y otros líquidos volátiles) se evapore saliendo violentamente del
espécimen y alterando la estructura del mismo. Las muestras con una rigidez inherente como
metales, rocas, huesos, etc. se pueden secar al aire o en un desecador de vacío sin que su
estructura sufra alteraciones. Sin embargo, las estructuras blandas con un alto contenido en agua
se deformarán si se dejan secar al aire ya que las fuerzas de tensión superficial asociadas a la
salida del agua causarán daños estructurales. Para evitar los efectos dañinos sobre la estructura de
los especímenes secados al aire, durante el proceso de secado debe pasarse el límite entre la fase
“líquido-gas”.
Para ello, se puede usar el método del punto crítico en el que el líquido pasa directamente
a la fase gaseosa. De este modo las fuerzas de deformación se evitan ya que el proceso de secado
tiene lugar por encima del punto crítico del líquido, donde el límite entre la fase líquida gaseosa
no existe.
El punto crítico es aquel estado particular de un gas en el cual todavía puede sufrir
licuefacción. Este estado viene determinado por la presión crítica y la temperatura crítica. Por
encima de este punto el gas no puede experimentar licuefacción debido a que el límite entre la
fase gaseosa y la fase líquida ha desparecido: En este punto el estado líquido y el estado gas son
igualmente densos. Éste es el punto crítico. El líquido pasa a la fase gas sin pasar por el límite de
fases “líquido-gas”, y la muestra se seca sin los efectos dañinos del secado en aire.
Según los valores de presión y temperatura crítica del agua, 228.5 bar y 374 ºC, si un
espécimen contiene agua, este no puede ser secado mediante el método del punto crítico ya que
los valores tan altos de presión y temperatura podrían destruirlo. Así la muestra debe ser
transferida a
un agente apropiado, llamado 50 fluido transicional, tal como es el dióxido de carbono cuyos
valores de punto crítico son considerablemente más ventajosos, 73.8 bar y 31 ºC.
3.5.5. Montado
Luego de secar las piezas se procede al montado en piezas cilíndricas metálicas especiales
para microscopía usando resinas acrílicas que permitan la fijación de la muestra en el
portamuestra.
3.5.6. Recubrimiento
Se recubre la muestra con una película conductora, de espesor comprendido entre 10 y 25
nm. Cuando se desea visualizar una muestra en un microscopio electrónico de barrido ésta debe
ser conductora ya que, de no ser así, se carga durante la irradiación por una acumulación de carga
que desvía el haz electrónico y, como consecuencia de ello aparecen distorsiones en la imagen.
Entre las técnicas empleadas se encuentra la técnica de “sputtering” en la cual se deposita en la
muestra una fina película de un metal pesado conductor, como el oro, haciendo uso de un gas en
estado plasmático como el Argón.
3.5.7. Observación
Los electrones que atraviesan la muestra inciden sobre una pantalla fosforescente que
emite destellos de luz cuando recibe el impacto de un electrón y permite observar las
características del tejido. Los metales pesados unidos al tejido impedirán que pasen los electrones
y por tanto se verá una zona negra en la pantalla fosforescente, mientras que en aquellas zonas de
la célula donde no estén estos metales provocarán áreas luminosas en dicha pantalla. Por ello
todas las imágenes originales de microscopía electrónica son en blanco y negro, aunque se
puedan colorear posteriormente con una computadora.
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1. Materiales
• Cuaderno de apuntes
• Laptop
• Internet
• Microscopía electrónica de barrido
• Celular
4.2. Método
Se buscó toda la información referente al tema asignado: Identificación de minerales
secundarios utilizando microscopio electrónico de barrido
Se realizó la visualización de los equipos entendiendo su funcionalidad para un
aprovechamiento óptimo en diferentes aspectos que uno necesite realizar, ya que en
este caso fue la observación de patógenos en productos comestibles y
reconocimiento de minerales secundarios, en el Microscopio Electrónico de Barrido
(escritorio)
Se explicó detallada mente como es la obtención de las muestras y que cosas se
debería realizar para aplicarlo al microscopio y nos dé una imagen detallada en la
computadora.
Una vez obtenido la informacion procedemos a hacer el informe detalladamente con
los parámetros asignados.
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Analizar las muestras dadas para la obtención de informacion y poder lograr el
reconocimiento de los minerales.
Se puede decir que el microscopio electrónico de barrido es crucial en investigación y
diagnóstico y permite la observación detallada de la muestra, proporcionando una comprensión
completa en la identificación de minerales secundarios, destacando su importancia en diversas
áreas científicas.
Logrando imágenes con alta resolución ya que a simple vista no podemos observar,
proporcionando información estructural y morfológica que ayuda a identificar lo que queremos
encontrar, lo que permite examinar características espacialmente cercanas en la muestra a una
escala muy detallada.
Quema de muestras por larga exposición en un análisis
Puede requerir preparación especial por cada tipo de
muestra.
VI. CONCLUSIÓN
Como se ha podido demostrar durante el desarrollo de este trabajo, los microscopios
electrónicos, cualquiera que sea su tipo, son indispensables en la mayor parte de las actividades
científicas, de investigación y de producción del mundo moderno.
Es tal su importancia que muchos de los avances tecnológicos y de los conocimientos que
se han adquirido y se siguen adquiriendo sobre la materia y su comportamiento, no hubieran sido
posibles a no ser por la ayuda de los microscopios electrónicos.
Estos instrumentos, ideados y experimentados hace cincuenta años, se han perfeccionado
de tal forma que los alcances y los límites a los cuales se pueden llegar con su uso, aún están por
determinarse.
Las ramas de aplicación en las que estos equipos están involucrados son tan variadas y
amplias que, prácticamente están presentes en casi todas las actividades actuales. Es más, su
utilización ha llevado a la creación de nuevos materiales, instrumentos e ingenios, que sería
imposible prescindir de estos equipos* sin sufrir un retraso tecnológico que atente contra el
desarrollo científico.
Es necesario destacar que, aun siendo pocos estos equipos pueden ser de muchísima
utilidad para crear una nueva conciencia entre estudiantes e investigadores, sobre la necesidad de
actualizar los instrumentos tecnológicos con los que cuenta el país, para abrir una pequeña brecha
que realmente contribuya al desarrollo tecnológico del mismo. Es verdad, que la falta de recursos
ha limitado la adquisición de nuevas tecnologías y el uso más amplio de las mismas, pero es
verdad también que en gran parte de los casos se desperdician importantes recursos en instancias
burocráticas y políticas antes que en intentar dotar de mejores y mayores recursos e mstrumentos
a la investigación científica.
VII. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
Echlin P. (2009) Handbook of Sample Preparation for Scanning Electron Microscopy and X-Ray
Microanalysis. Springer, New York
Goldstein J.I., Newbury D.E., Joy D.C., Lyman C.E., Echlin P., [Link], Sawyer L., Michael J.
(2007) Scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis, Springer, New York,
Third Edition
Ipohorski M., Bozzano P.B., VersaciR.A. (2008) Microscopía Electró-nica de Barrido. Instituto
SabatoUNSAM-CNEA, IS/A – 78 / 08, Buenos Aires, Argentina.
Caracterización. Revista Horizonte Minero. 2019 [cited 2022 Dec 1]. Available from:
[Link]
minerales/4.
Pozo Rodríguez M. El papel de la caracterización mineralógica y geoquímica en el estudio de las
culturas antiguas: ejemplos de excavaciones españolas en Oriente. ISIMU. 2019 Dec
10;22:93
Preparación de muestras para el microscopio de barrido : Servicio de Microscopía Electrónica :
UPV [Internet]. [Link]. Available from:
[Link] 7.
Melgarejo JC, Proenza JA, Galí S, Llovet X. Técnicas de caracterización mineral y su aplicación
en exploración y explotación minera. Boletín de la Sociedad Geológica Mexicana
[Internet]. 2010 Jan 1 [cited 2022 Dec 1];62(1):1–23. Available from:
[Link]
VIII. ANEXO
Imagen 1: microscopio electrónico de barrido (escritorio)
Imagen 2: Partes que ayudan a sujetar la muestra y luego poder llevarlo al microscopio electrónico.
Imagen 3: Resultado de las muestras.
Imagen 4: Muestra amplificada de alta resolución a 20 000 nm.