Estudio de la influencia de la fuente inorgánica de nitrógeno sobre la inducción de
callos de Ligaria cuneifolia (R. et P.) Tiegh (Loranthaceae) y sobre su rendimiento de
biomasa.
Bari ML (1,2), Ricco MV (1,2), Posadaz A (3), Ricco RA (4), Wagner ML (4), Álvarez MA (1,2)
(1) CEBBAD - Cátedra de Farmacobotánica y Farmacognosia, Carreras de Farmacia y Bioquímica,
Universidad Maimónides. (2) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas.
(3) Facultad de Turismo y Urbanismo, UNSL. (4) Cátedra de Farmacobotánica. Facultad de
Farmacia y Bioquímica, UBA.
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INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS
Ligaria cuneifolia (R. et P. Tiegh.) -Loranthaceae- es una especie A Se diseñaron 2 ensayos: uno para determinar la
hemiparásita, semileñosa, distribuida en una amplia región de relación óptima entre el nitrógeno inorgánico oxidado y
Sudamérica. En Argentina se la conoce con el nombre de reducido (ensayo A) y otro para determinar la
“muérdago criollo” o “liga” y se utiliza en medicina popular como concentración óptima de nitrógeno inorgánico total
hipotensora. Estudios recientes demostraron que tiene actividad (ensayo B). En ambos se incorporaron sales de nitrato
hipolipemiante, antioxidante, antiproliferativa y antitumoral por su y amonio al medio de cultivo estándar (tabla 3), solas
contenido en lectinas y polifenoles. y combinadas, en diferentes concentraciones,
resultando 10 tratamientos para cada ensayo (tablas
1 y 2). Se colectaron ejemplares de "Liga" en época de
OBJETIVO fructificación en la localidad de Villa de Merlo (San
Dado el potencial farmacológico de esta especie vegetal y las Luis), se seleccionaron frutos maduros, se
dificultades para su cultivo agronómico, el objetivo de este trabajo desinfectaron con NaClO y, bajo flujo laminar, se
fue analizar la influencia de uno de los principales componentes del extrajeron los embriones de las semillas, los cuales se
medio de cultivo base (como lo es la fuente inorgánica de nitrógeno) sembraron en tubos estériles conteniendo 10 mL de los
sobre la inducción de callos a partir de embriones y sobre el Foto A: ejemplar de muérdago
tratamientos a ensayar (n=10). Los cultivos se
rendimiento de biomasa para su posible utilización en la producción criollo en estado de desarrollaron en oscuridad a 24 ± 2 °C y los ejemplares
fructificación con frutos
de los compuestos de interés por tecnologías de fermentación maduros que contienen una se subcultivaron cada 60 días a medio fresco. Tras 4
semilla de la cual se extrae el
(biotecnología). embrión que se utilizó en este
meses en cultivo se registró el porcentaje de formación
ensayo para la inducción de de callos y el peso fresco de cada ejemplar.
callos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados del ensayo A arrojaron que, los tratamientos que contenían amonio como única fuente inorgánica de nitrógeno, impidieron la
formación de callo tanto con la sal de cloruro como con la de sulfato; mientras que las combinaciones [nitrato:amonio] presentaron los siguientes
porcentajes de formación de callo: 40 % [1:2], 70 % [1:1] y 80 % [2:1]. Finalmente, los tratamientos que contenían nitrato como única fuente
inorgánica de nitrógeno presentaron 100 % de formación de callo con un peso promedio de 0,37 ± 0,09 g, sin diferencias significativas entre las
sales de calcio y potasio. Por otro lado, los resultados del ensayo B evidenciaron que, cuando la concentración de nitrógeno inorgánico total es 3,3
mM (control medio White original), 15 mM ó 30 mM, ocurre formación de callo en el 100 % de las réplicas, mientras que para la concentración 60
mM no se observa formación de callo. El valor más alto de peso fresco se obtuvo con la concentración 30 mM, el cual resultó más del doble que el
obtenido con 15 mM y casi el triple que el obtenido con el control.
Tabla 1: tratamientos de nitrógeno inorgánico para la inducción de Tabla 3: Composición del medio de cultivo estándar (testigo)
callos a partir de embriones (ensayo A, relación oxidado : reducido). utilizado como base para todos los tratamientos.
B C
Tabla 2: tratamientos de nitrógeno inorgánico para la inducción de D E
callos a partir de embriones (ensayo B, concentración total).
F H
CONCLUSIONES I
Se determinó que, para la obtención de callos a partir de embriones de
Ligaria cuneifolia, el aporte de nitrógeno inorgánico debe incluir únicamente
sales de nitrato dado que, en base a los resultados, se observa que las
sales de amonio resultan perjudiciales para esta especie disminuyendo
tanto el porcentaje de formación de callo como la producción de biomasa.
Respecto de la concentración total de nitrógeno inorgánico, se obtuvo 100
Foto B: proceso de desinfección de 100 frutos de Ligaria cuneifolia por agitación en hipoclorito
% de formación de callos y el peso fresco más alto con la concentración 30 de sodio (4 % cloro activo) durante 30 minutos. Foto C: enjuague del cloro residual con agua
mM. La concentración 60 mM inhibió completamente la inducción de tejido destilada estéril bajo flujo laminar. Foto D: extracción del embrión de la semilla con pinza de
calloso. disección y bisturí en condiciones de esterilidad. Foto E: embrión tras 5 días de cultivo, notar
la elongación del hipocótilo con su base adherida a la superficie del medio de cultivo y la
AGRADECIMIENTOS
presencia de tejido amarillo (células callosas) en esa zona. Foto F: embriones tras 7 días en
cultivo en tratamiento B, notar cotiledones abiertos. Foto G: embriones marrones tras 7 días
en cultivo en tratamiento 8, la presencia de amonio 15 mM oxidó el tejido rápidamente. Foto
Este trabajo fue financiado por ANPCyT (PICT 2015-2024), H: embriones con callos amarronados tras 4 meses de cultivo en tratamiento F, la presencia
CONICET, Universidad de Buenos Aires (Proyecto UBACYT de amonio en baja concentración en el medio en relación [1:1] con el nitrato permite el
desarrollo de callos pequeños pero el tejido se oxida progresivamente con el transcurso del
20020170100121BA) y CEBBAD (Universidad Maimónides). tiempo. Foto I: embriones con callos amarillos tras 4 meses de cultivo en tratamiento ACA.