ESTERILIZACIÓN
Muerte o separación de todos los microorganismos vivos presentes en el material a tratar.
Se aplica sobre material de vidrio, ansas, medios de cultivo, etc., para poder estudiar, conservar y trasplantar
cultivos puros de mo.
También sobre material contaminado que ya ha sido utilizado, antes de ser sometido a su limpieza o antes de
ser descartado.
También se aplica sobre material quirúrgico y de enfermería, para evitar infecciones.
Ciclo del material para ser reutilizado en el laboratorio de microbiología
Acondicionamiento: Consiste en proteger el material a ser esterilizado con envoltorios,
tapones etc. a fin de preservar la esterilidad una vez retirado del equipo. Es importante que
estos no sean una barrera para el agente esterilizante.
El tratamiento de esterilización puede realizarse por diferentes métodos que involucran diferentes agentes:
1- FISICOS
1.1. Calor
1.1.1. Llameado directo
1.1.2. Calor seco
1.1.3. Calor húmedo (vapor sobrecalentado a presión y tyndalización)
1.2. Filtración.
1.3. Radiaciones ionizantes
2- QUÍMICOS
2.1. Tratamiento con gases.
La elección del método de esterilización a aplicar depende del material a tratar. En todos los casos se debe tener en
cuenta que la esterilización es un proceso gradual, por lo que el material debe estar suficiente tiempo a la intensidad
adecuada del agente elegido.
1. METODOS FISICOS
Exposición directa del material a la llama del mechero. Ansas, agujas y ganchos, de
Calor directo o La esterilización se logra por oxidación violenta que alcanza la uso habitual en microbiología
llameado carbonización. No aplicable a materiales de
acero porque se destemplan
Estufas de esterilización: caja metálica de paredes triples, la Aplicación: material de vidrio,
interior con orificios para la circulación del aire caliente. elementos metálicos, aceites y
Fuente de calor: resistencia eléctrica provistas de talcos.
termorreguladores. Los tiempos de esterilización son
T° entre 160 y 180 º C. largos, en el orden de horas, y
Los mo mueren por oxidación de sus estructuras, previa dependen de las características
Calor seco de los elementos, de la cantidad y
deshidratación, puede llegar a una ligera carbonización.
de su distribución en la estufa..
La difusión del calor depende de la capacidad de conducirlo del
material, el tiempo de esterilización debe ser el suficiente para
que en todos los puntos del material se alcance la T° adecuada
y esta actúe el tiempo necesario para matar todas las formas
vivas, inclusive las más resistentes ( endosporas bacterianas).
Vapor sobrecalentado a presión: una esterilización adecuada Aplicación: Es el método de
requiere lograr T° superiores a la de ebullición del agua a Patm, elección para la esterilización
para eliminar las formas resistentes en tiempos aceptables, de mdc y soluciones, cuyos
esto se logra mediante el calentamiento del vapor a presiones componentes no sean
superiores. afectados por la temperatura
Por ejemplo: alcanzada. También se utiliza
A 1 atm (de sobrepresión) de vapor de agua se obtiene una para material de vidrio,
temperatura de 121ºC. metálico (que no sea afectado
A 1,5 atm (de sobrepresión) de vapor de agua se obtiene una por el vapor), ropa de cirugía,
temperatura de 127ºC. guantes etc.
El proceso de esterilización con vapor saturado a presión se
Calor húmedo lleva a cabo en aparatos llamados AUTOCLAVES (*)
Alto poder de Tyndalización: se somete el material a varios calentamientos Se aplica sobre sustancias
penetración. Los sucesivos, seguidos de períodos de reposo de 24 hs a (algunos mdc, soluciones) que
mo mueren por T° amb. El método se aplica con un baño maría termostatizado no resisten la acción de las
coagulación de a la temperatura elegida, de nivel constante o si se trabaja a altas temperaturas
sus proteínas 100ºC, en autoclave de Chamberland a vapor fluente
(con la espita abierta)
Los parámetros que regulan la aplicación del proceso son:
Temperatura, tiempo de calentamiento y número de
calentamientos.
1) En los 1° calentamientos se destruyen formas vegetativas, al
tiempo que producirá el cese de la dormancia en las endosporas
bacterianas.
2) En los períodos de reposo continúa el debilitamiento originado
por el calentamiento y algunas esporas podrán pasar a sus formas
vegetativas.
3) En los calentamientos sucesivos se destruyen las nuevas formas
vegetativas y las esporas que han disminuido su termorresistencia.
Se emplean filtros de membrana, que son discos resistentes Aplicación: Soluciones
compuestos generalmente de acetato de celulosa o nitrato de inyectables y todo tipo de
Filtración celulosa, fabricados de forma que contengan gran cantidad de soluciones que no soporten el
pequeños poros (0,22 µm). tratamiento con calor.
Radiaciones poderosas de longitud de onda corta, que Debido a su costo y
consisten en partículas subatómicas cuya energía depende de complejidad, este método está
la velocidad y pueden transferir su energía cinética a todo lo reservado para elementos que
que se interponga en su marcha. no pueden ser sometidos a
Se forman en el medio sustancias tóxicas a los mo, como por otro tipo de tratamiento sin
ejemplo: ozono, peróxido de hidrógeno, radical OH-. alterar su calidad (por ej:
Radiaciones
La tensión aumentada de O2 o la presencia de agua facilita la prótesis, suturas).
ionizantes
formación de dichos compuestos y por lo tanto la muerte de
los mo.
Las radiaciones más utilizadas son los rayos gamma, cuya
fuente son productos residuales de fisión procedentes de
instalaciones de energía nuclear. El Co60 es la fuente más
empleada por sus características, abundancia y precio.
(*) AUTOCLAVES
El calor es vehiculizado por el agua en estado gaseoso y esta combinación posee alto poder letal, por lo que las
temperaturas y tiempos de esterilización son menores que en las estufas.
El autoclave de Chamberland es una caldera (cobre o acero) que consiste en:
- Un recipiente cilíndrico de fondo cóncavo → contiene el agua que es la fuente de vapor.
- Sobre el fondo se coloca una rejilla o falso fondo perforado que sirve de soporte al material a esterilizar.
- Por fuera y debajo del fondo se halla la fuente de calor que pueden ser quemadores a gas o una resistencia
eléctrica.
- Sobre la tapa (de bronce o acero) se encuentra manómetro (indica la P interna del aparato), la espita (para
realizar el purgado) y la válvula de seguridad (permite trabajar a un presión preestablecida).
- El tiempo necesario para la esterilización depende fundamentalmente del tamaño y forma del envase, de las
características y volumen de su contenido.
- El agente letal debe alcanzar todos los puntos del material durante el tiempo necesario para provocar la
muerte de todos los mo
- Para esterilizar mdc se trabaja a 1 atm de sobrepresión (121ºC), el tiempo dependerá de la cantidad de
medio en los recipientes
Por ejemplo, 1L de medio distribuido de a 100 ml en frascos, necesitará 30 minutos a l atm para su
esterilización, la misma cantidad de medio en tubos, en porciones de 5 ml, necesitará 15 minutos.
Purgado
Uno de los pasos más importantes para lograr una correcta esterilización constituye el purgado del aparato, que
consiste en la eliminación total del aire contenido dentro del recipiente, para que la presión sea exclusivamente de
vapor de agua y se cumpla las siguientes relaciones temperatura- presión de vapor de agua:
100 º C..............0 atm
115 º C.............3/4 atm
121 º C............ 1 atm
127 º C.............1,5 atm
Si en el autoclave quedara una mezcla de gases (aire + vapor) la presión indicada en el manómetro no correspondería
a vapor puro y por lo tanto la temperatura obtenida sería menor, comprometiendo el éxito de la esterilización.
En un autoclave correctamente purgado, a una presión determinada, corresponde la máxima temperatura que se
puede alcanzar a esa presión.
Manejo del autoclave
1- Colocar agua hasta que llegue al falso fondo.
2- Colocar el material a esterilizar convenientemente acondicionado y distribuido de forma que permita la
circulación del vapor.
3- Cerrar el autoclave ajustando los tornillos de a pares cruzados.
4- Controlar que la espita esté abierta.
5- Encender la fuente de calor.
6- Mantener la espita abierta hasta que por ella salga un chorro continuo de vapor (sin entrecortarse), lo que
asegura que el aparato ha sido purgado.
7- Cerrar la espita.
8- Cuando la presión en el manómetro es la deseada, regular la fuente de calor para mantener la temperatura y
comenzar a contar el tiempo de esterilización.
9- Una vez transcurrido el tiempo de esterilización, se apaga la fuente de calor.
10- Recién cuando la aguja del manómetro marca cero se abre la espita (si se hace antes se produce una
descompresión brusca, con ebullición tumultuosa del líquido contenido en los frascos, proyección de tapones
y posible ruptura de material), se pude abrir el autoclave.
2- MÉTODOS QUÍMICOS
Tratamiento con gases
Se emplean para esterilizar materiales que no resisten altas temperaturas.
a. Óxido de etileno → reacciona con los grupos carboxilo, amino, sulfihidrilo e hidroxilo de las enzimas celulares,
reemplazando un hidrógeno por el grupo alquil-hidroxietil.
Para evitar problemas, por su alta inflamabilidad, se usan mezclas con CO2 y diclorodifluormetano.
Los factores que afectan la actividad del óxido de etileno (OE) son:
- Difusión,
- Concentración, de 250 mg a 1200 mg de OE/L de capacidad de la cámara donde se coloca el material a tratar.
- Humedad ambiente debe graduarse entre 35 y 60%.
- Temperatura,
- Tiempo, depende de la concentración de OE, el tipo de
material y el grado de contaminación.
Por ejemplo:
Para materiales médicos limpios en un esterilizador de 0,5 m3, se utilizan 700 mg/L de OE, durante:
- 5 h a 37 ºC, o
- 3 h a 55 ºC
Aplicación: Instrumental óptico, materiales de goma o de plástico etc.
b. Formaldehído → al igual que el óxido de etileno es un agente alquilante, tiene menor poder de penetración y
su uso se ha limitado a la desinfección de superficies expuestas.
TESTIGOS DE ESTERILIZACIÓN
Es recomendable controlar la eficacia de los equipos de esterilización, con ese fin se recurre a los llamados testigos,
los que se colocan en los aparatos esterilizadores, en aquellos lugares que se suponen de difícil acceso para el agente
esterilizante.
1- Testigos físicos:
- Se pueden colocar termómetros de máxima con lo cual no se tiene información sobre el tiempo que se ha
mantenido la temperatura deseada.
- Algunos equipos modernos vienen dotados de sistemas registradores.
2- Testigos químicos:
- Existen tirillas de papel embebidas en compuestos químicos que cambian de color al ser sometidos a una
temperatura determinada.
- También se utilizan sales puras que funden a una temperatura dada.
- Con estos testigos sólo se conoce la temperatura alcanzada, pero no por cuanto tiempo.
3- Testigo integrador:
- son compuestos que mediante la integración de factores físicoquímicos permiten visualizar, en el transcurso o
desarrollo de un ciclo, la correcta evolución de los parámetros que lo rigen.
4- Testigos biológicos:
- Son el método más efectivo para controlar el buen funcionamiento y/o el manejo correcto de un equipo de
esterilización.
- Se emplean bacterias esporuladas termorresistentes, cultivadas en medios adecuados para aumentar su
resistencia.
- Para calor húmedo se utilizan esporas de Geobacillus (Bacillus stearothermophilus)
- para calor seco Bacillus subtillis,
- para radiaciones Bacillus pumillus, etc.
- Se puede adquirir tirillas embebidas con esporas de alguno de las especies mencionadas, las que se ubican en
el interior del equipo a controlar, una vez finalizado el proceso de esterilización se verifica la viabilidad de las
esporas colocándolas en un medio apropiado e incubando.
- Otra posibilidad son ampollas selladas con el medio de cultivo y las esporas.
SANITIZACIÓN: proceso que reduce el número de microorganismos presentes en un elemento, a niveles bajos, de
manera que no sean riesgosos para la salud, se utiliza sobre elementos inanimados y está ligado a operaciones de
limpieza de elementos diversos. Siempre la sanitización está vinculada a un proceso mecánico que puede ser con un
cepillo, esponja, por arrastre con P de agua.
Puedo sanitizar más o menos un elemento. Es un procedimiento relativo, puede tener una mayor o menor intensidad de
acuerdo al agente y al tiempo en el que realice ese proceso.
DESINFECCIÓN: proceso mediante el cual se produce la eliminación o destrucción de agentes infecciosos (mo capaces de
producir infección: bacterias, protozoos, hongos, virus , rickettsias, etc.) y contaminantes (mo que se hallan presentes en
elementos inanimados o en la superficie corporal , pero sin ocasionar infección), que se hallan fuera del organismo por la
aplicación directa de medios físicos o químicos.
Puedo desinfectar más o menos un elemento. Hay diferentes desinfectantes en el mercado con distintos poderes de
acción. Es un procedimiento relativo, puede tener una mayor o menor intensidad de acuerdo al agente y al tiempo en el que
realice ese proceso.
ESTERILIZACIÓN: proceso químico o físico que destruye completamente o elimina todas las formas microbianas de
vida, incluyendo las esporas.
No puedo esterilizar más o menos un elemento. Es un proceso absoluto. Un producto o un elemento está o no está esteril, no
puede estar más o menos esteril.
Otros términos que se usan:
En microbiología es muy importante utilizar la técnica aséptica la cual es la técnica que debemos aplicar para impedir que
nuestro trabajo se contamine por MOs y tengamos inconvenientes a la hora de obtener un resultado.
• Antimicrobiano: agente que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos (antibacteriano, antifúngico, etc.).
•Microbicida (Germicida): agente que mata formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo
(bactericida, fungicida, alguicida, etc.).
• Microbiostático: agente que inhibe el crecimiento de microorganismos (bacteriostático, fungistático, etc.).
• Desinfectante: Sustancias químicas que matan las formas vegetativas y no necesariamente las formas de resistencia de los
microorganismos patógenos. Son sustancias empleadas sobre objetos inanimados.
• Antisépticos: Sustancias químicas que previenen el crecimiento o acción de los microorganismos ya sea destruyéndolos o
inhibiendo su crecimiento y actividad. Son sustancias que se aplican sobre tejidos vivos.
• Antibiosis: fenómeno biológico que detiene o destruye el crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser
vivo.
• Antibióticos: sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.