LA
MICROSCOPIA
Definición:
• Se le define microscopia a la
observación de objetos muy
pequeños bajos grandes
aumentos. Los aparatos que se
usan se denominan
microscopios
INICIOS DE LA MICROSCOPIA
• Anton van Leeuwenhoek y Robert Hooke
• Anton van leeuwenhoek, conocido como el padre de la
microbiologia, construyo microscopios con una sola
lente, fue el primero en observar y describir
organismos vivos en 1674 a los que llamo aminaculos
(Observó bacterias, protozoos, espermatozoides y
glóbulos rojos)
• Robert Hooke:
• Científico inglés conocido por su obra "Micrographia"
publicada en 1665. Utilizó un microscopio compuesto
(con dos lentes) para observar estructuras más
complejas. Fue el primero en usar el término "célula"
tras observar cortes de corcho, donde notó pequeñas
unidades que le recordaban a las celdas de un
monasterio. Su trabajo sentó las bases para la biología
celular.
Microscopios ópticos:
• Siglo XVII: Los primeros microscopios compuestos
tenían problemas de distorsión de imagen y
aberraciones cromáticas.
• Siglo XVIII y XIX: Mejora en la calidad de las lentes y en
la iluminación. Se desarrollaron técnicas de tinción
que permitieron observar mejor las estructuras
celulares.
• Siglo XX: Introducción de técnicas de contraste de
fase y fluorescencia, permitiendo observar células
vivas y estructuras específicas dentro de las células.
MICROSCOPIO LEEWENHOEK (1674)
Microscopios electrónicos:
• Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM):
Inventado por Ernst Ruska en 1931, permite
observar detalles ultraestructurales de células y
tejidos. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz
para lograr resoluciones mucho mayores que los
microscopios ópticos.
• Microscopio Electrónico de Barrido (SEM):
Desarrollado en la década de 1960, proporciona
imágenes tridimensionales detalladas de las
superficies de muestras, también utilizando
electrones.
Importancia de los avances tecnológicos en la
microscopía
• Mayor resolución y detalle: La microscopía electrónica ha permitido observar
estructuras a nivel nanométrico, como virus, ribosomas y la estructura de las
proteínas. Los microscopios ópticos avanzados, como los de fluorescencia y
confocales, han revolucionado el estudio de células vivas y dinámicas
celulares.
• Avances en medicina: Diagnóstico de enfermedades a nivel celular y
subcelular, como cánceres y enfermedades infecciosas y la investigación en
biología molecular y genética, permitiendo el desarrollo de nuevas terapias y
medicamentos.
• Aplicaciones en diversas áreas:
• Ciencia forense: Análisis de evidencias microscópicas en escenas del
crimen.
• Ciencia de materiales: Estudio de estructuras y propiedades de materiales a
nivel microscópico.
• Ecología y medio ambiente: Investigación de microorganismos en diversos
ecosistemas y estudio de contaminantes.
Tipos de Microscopios
• Microscopio Óptico (de Luz): La luz pasa a
través de la muestra y es enfocada por las lentes
objetivas.
• La imagen aumentada es capturada por la lente
ocular, proporcionando una visualización detallada
de la muestra.
• Microscopios ópticos permiten observación de
células vivas y tejidos con técnicas de tinción para
mejorar el contraste.
2. Microscopio Electrónico
• Microscopio Electrónico de Transmisión
(TEM):Utiliza un haz de electrones que
Microscopio de transmisión (TEM)
atraviesa una muestra muy delgada.
• Microscopio Electrónico de Barrido (SEM):
Emplea un haz de electrones que barre la
superficie de la muestra.
Microscopio de barrido (SEM)
Preparación de
Muestras
• Técnicas de Preparación de Muestras para Microscopios Ópticos
• Corte de muestras:
• Secciones delgadas: Las muestras biológicas a menudo se cortan en secciones muy delgadas
utilizando un microtomo para facilitar la observación. Para muestras más blandas, se pueden usar
criostatos (corte a temperaturas bajas).
• Montaje: Las secciones se montan en portaobjetos de vidrio y se cubren con un cubreobjetos para
proteger la muestra y mejorar la visualización.
• Montaje en seco y en húmedo:
• Montaje en seco: Las muestras se colocan directamente en el portaobjetos sin ningún medio líquido.
Se utiliza para muestras que no requieren conservación de estructuras internas, como polen o
pequeños insectos.
• Montaje en húmedo: Las muestras se colocan en un medio líquido, como agua o soluciones
específicas, y se cubren con un cubreobjetos. Este método se usa para observar células y organismos
vivos.
• Fijación: Proceso de preservar la estructura de la muestra mediante el uso de agentes químicos como
el formaldehído. La fijación detiene los procesos biológicos y evita la descomposición.
• Deshidratación e inclusión: Para muestras que necesitan ser embebidas en parafina, se deshidratan
progresivamente con soluciones de alcohol y luego se infiltran con parafina líquida, que se solidifica y
permite el corte en secciones delgadas.
Preparación de muestra para microscopia
electrónica
• Fijación: Uso de fijadores fuertes como glutaraldehído y tetróxido de osmio para preservar las
estructuras celulares y evitar la descomposición.
• Deshidratación: Las muestras se deshidratan mediante una serie de baños en alcoholes
crecientes (30% a 100%) y luego se infiltran con un solvente compatible con la resina de
inclusión, como acetona.
• Inclusión: Las muestras deshidratadas se infiltran con resinas plásticas (por ejemplo, epoxi) y
se polimerizan en moldes, lo que permite cortar secciones ultrafinas.
• Corte Ultrafino:
• Para TEM: Secciones ultrafinas (50-100 nm) se cortan con un ultramicrotomo y se montan en
rejillas de cobre.
• Para SEM: Las muestras pueden ser seccionadas más gruesas, pero la superficie debe estar
bien preparada para evitar artefactos.
• Contraste:
• TEM: Se utilizan agentes de contraste como acetato de uranilo y citrato de plomo para aumentar
el contraste de las estructuras celulares en las imágenes.
• SEM: Las muestras deben ser conductoras o recubiertas con una capa fina de metal (oro o
paladio) para evitar la acumulación de carga y mejorar la resolución de la imagen.
Observación de Células y Tejidos
• Estructura y Función de las Células Animales y Vegetales
• Células Animales: Membrana plasmática: Delimita la célula y regula el paso de sustancias.
• Núcleo: Contiene el material genético (ADN) y dirige las funciones celulares.
• Citoplasma: Sustancia gelatinosa donde se encuentran los orgánulos.
• Orgánulos:
• Mitocondrias: Producen energía mediante la respiración celular.
• Retículo endoplásmico (RE): Síntesis y transporte de proteínas y lípidos. Puede ser rugoso (con
ribosomas) o liso.
• Aparato de Golgi: Modificación, empaquetamiento y distribución de proteínas y lípidos.
• Lisosomas: Contienen enzimas digestivas para descomponer desechos celulares.
• Citoesqueleto: Estructura que da forma a la célula y facilita el movimiento.
• Células Vegetales:
• Pared celular: Estructura rígida que proporciona soporte y protección.
• Cloroplastos: Orgánulos donde ocurre la fotosíntesis, contienen clorofila.
• Vacuola central: Almacena nutrientes y desechos, y mantiene la presión de turgencia.
• Plasmodesmos: Canales entre células vegetales para el intercambio de sustancias.
• Orgánulos comunes con las células animales: Mitocondrias, núcleo, RE, Aparato de Golgi, etc.
• La observación de células y
tejidos bajo el microscopio
revela la complejidad y
diversidad de la vida a nivel
microscópico. Comprender las
diferencias estructurales y
funcionales entre células
animales y vegetales es
fundamental para el estudio de
la biología y la medicina
Conclusión
• La microscopía ha evolucionado
enormemente desde sus humildes
comienzos, convirtiéndose en una de las
herramientas más poderosas en la ciencia
moderna. Su capacidad para revelar lo
invisible y expandir nuestro conocimiento del
universo a microescala sigue siendo
inigualable. A medida que la tecnología
continúa avanzando, podemos anticipar
descubrimientos aún más sorprendentes que
nos permitirán comprender mejor la vida y la
materia en todas sus formas y escalas.