UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
PRÁCTICA N° 4
BIOENSAYO DE TOXICIDAD DE CONTAMINATES EN LA GERMINACIÓN
DE SEMILLAS
I. INTRODUCCIÓN
El bioensayo de toxicidad con semillas es una prueba de toxicidad aguda en el que se
pueden evaluar los efectos tóxicos de contaminantes o de mezclas complejas en el proceso
de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros
días de crecimiento. Como puntos finales para la evaluación de los efectos fitotóxicos, se
determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la elongación de la radícula
y del hipocotilo (Carpena et al, 2017).
La contaminación química del suelo en su mayoría proviene del uso de agroquímicos,
actividades industriales y fuentes domésticas, y que posteriormente son depositados al
medio de manera indiscriminada y sin ningún tipo de control, se ha convertido en los
últimos años en las principales causantes de alteraciones en el ecosistema acuático y
terrestre, ya que, la mayoría de estos vertimientos contiene sustancias potencialmente
toxicas que alteran el ciclo de vida normal de los organismos (Bowers et al, 1997).
En relación a lo anterior, con el fin de conocer dichos efectos, se llevará a cabo un
Bioensayo de toxicidad con semillas de culantro, rabanito o espinaca; donde el proceso
experimental consistirá en agregar contaminantes a una muestra suelo en la cual se
germinarán las semillas en laboratorio para evidenciar la afectación de los agentes
químicos de la muestra en el desarrollo del proceso de germinación, así como inhibición
en la semilla y elongación de radícula principalmente.
1.1. Objetivo general
- Evaluar la toxicidad de los contaminantes en el proceso de germinación de las
semillas y en el desarrollo de las plántulas.
Curso: Análisis de la contaminación del suelo Ing. [Link]. Sandra L. Zavala Guerrero
1.2. Objetivos específicos
- Evaluar la toxicidad de hidrocarburos en la germinación de semillas
(culantro/rabanito/espinaca) a nivel laboratorio.
- Evaluar la toxicidad de un plaguicida en el proceso de germinación de semillas
(culantro/rabanito/espinaca) a nivel laboratorio.
II. REVISION DE LITERATURA
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Materiales
₋ Placas Petri.
₋ 1 botella aspersor con agua.
₋ Hidrocarburo (aceite para moto, petróleo o gasolina)
₋ Insecticida y Fungicida.
₋ Semillas de culantro/rabanito/espinaca.
₋ 1 regla o vernier.
₋ Suelo.
₋ Balanza.
₋ Pinza.
₋ Jeringas de 10 (3 unidades) y 60 ml (2 unidades)
₋ Vasos descartables.
₋ Mascarillas para todos.
₋ 02 Guantes quirúrgicos.
₋ Incubadora bioquímica
3.2. Metodología
✓ Tamizar el suelo para preparar la muestra.
✓ Medir los parámetros del suelo inicial: pH, Conductividad eléctrica, % de materia
orgánica.
✓ Pesar 40 g de suelo en vasos descartables (13 muestras).
✓ Mezclar el hidrocarburo según los tratamientos que se mencionan en la tabla 1.
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✓ Mezclar el insecticida y fungicida según los tratamientos que se mencionan en la
tabla 1.
Tabla 1. Tratamientos para la práctica por placa Petri.
Cantidad de Cantidad de
Contaminante Tratamiento
suelo (g) contaminante (ml)
Sin contaminante T0 40 0
T1 40 4
Gasolina o
T2 40 8
petróleo
T3 40 12
T4 40 3
Aceite de moto T5 40 6
T6 40 12
T7 40 8 ml (0,05 g) (0,01 g)
Insecticida
T8 40 8 ml (0,15 g) (0,10 g)
(sólido)
T9 40 8 ml (0,30 g) (0,20 g)
T10 40 8 ml (0,010 g) (0,012 g)
Fungicida (sólido) T11 40 8 ml (0,025 g) (0,030 g)
T12 40 8 ml (0,050 g) (0,060 g)
*Las concentraciones del fungicida e insecticida dependerán del producto comercial que se elija.
Las dosis que corresponden a la tabla están determinadas con Lambada (insecticida) y Farmate
(Fungicida). En caso de no encontrar estos comprar Methomex (insecticida) y Benozon (fungicida)
Cabe mencionar que las dosis a usar son mínimas por lo que se recomienda comprar un solo tipo
para todo el salón (en especial la presentación más pequeña de 60 o 100 gr) y variar mínimamente
las dosis por grupo.
✓ Dejar reposar al menos 1 hora la mezcla.
✓ Mientras tanto, contar 50 semillas para cada tratamiento.
✓ Colocar la mezcla de 40 g en cada placa Petri y humedecer el suelo con la ayuda
del aspersor de ser necesario; cada placa Petri debe estar rotulada.
✓ Sembrar las semillas en las placas Petri de manera uniforme.
✓ Dejar las placas cerradas en la Incubadora bioquímica en condiciones controladas
a 20 °C y fotoperiodo de 18 horas de luz y 6 de oscuridad.
✓ Evaluar Inter diario las semillas hasta que comiencen a germinar. A la primera
semilla que germina registrar el día de inicio de germinación y a partir de ahí
realizar el conteo diario de semillas germinadas hasta los 15 días.
✓ Al finalizar los 15 días de las plántulas germinadas contar cantidad de hojas y
medir el tallo y la raíz.
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✓ Para determinar el índice de germinación se contará con las siguientes formulas
# 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑔𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑢𝑒𝑏𝑎
%𝐺𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = ( ) × 100
# 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑔𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑒𝑙𝑜𝑛𝑔𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎í𝑧 𝑎 𝑝𝑟𝑢𝑒𝑏𝑎
%𝐸𝑙𝑜𝑛𝑔𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎í𝑧 = ( ) × 100
𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑒𝑙𝑜𝑛𝑔𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎í𝑧 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜
(%𝑒𝑙𝑜𝑛𝑔𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎í𝑧 × %𝐺𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛)
𝐼𝐺 =
100
IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Carpena, R. O., Bernal, M. P. 2017. Claves de la fitorremediación: fitotecnologías
para la recuperación de suelos. Ecosistemas. 16: 1-3.
Bowers N., J. R. Pratt, D. Beeson y M. Lewis. 1997. Comparative Evaluation of
Soil Toxicity using Lettuce Seeds and Soil Ciliates. Environmental
Toxicolology and Chemistry 16: 207-213.
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