ACTIVIDADES
Analiza la pureza de las siguientes muestras:
Muestra 1: ADNds Muestra 2: ADNds Muestra 3: ARNA230 = 0,182 A230 = 0,235 A230 = 0,229
A260 = 0,352 A260 = 0,436 A260 = 0,312A280 = 0,265 A280 = 0,248 A280 = 0,166A320 = 0,025
A320 = 0,020 A320 = 0,029
En las muestras en las que consideres que hay contaminación, explica cuáles puedenser los
posibles contaminantes y propón soluciones para eliminarlos.
A260/A280 = 0,352 / 0,265 = 1,33A260/A230 = 0,352 / 0,182 = 1,93El cociente A260/A280 es
inferior a 1.6, por lo que es razonable pensar que el ADN estácontaminado con proteínas o
derivados fenólicos. Si la purificación no se hizo con solventesorgánicos, lo lógico es que la
contaminación sea por proteínas y se puede solucionar medianteun tratamiento con
proteinasa K, seguido de precipitación, lavado y resuspensión del ADN. Sila purificación se hizo
con solventes orgánicos, lo más probable es que la contaminación seaproducida por restos del
fenol utilizado. En este caso conviene tratar con cloroformo/alcoholisoamílico para crear una
fase orgánica, agitar y centrifugar para separar las dos fases (losrestos de fenol habrán pasado
a la fase orgánica). A partir de la fase acuosa se vuelve aprecipitar, lavar y resuspender el
[Link] 2:A260/A280 = 0,436 / 0,248 = 1,76A260/A230 = 0,436 / 0,235 = 1,85Se
considera ADN puro sin [Link] 3:A260/A280 = 0,312 / 0,166 =
1,88A260/A230 = 0,312 / 0,229 = 1,36El cociente A260/A230 es inferior a 1.5 por lo que es
razonable pensar que el ARN estácontaminado por polisacáridos o sales. Para solucionarlo se
precipita nuevamente el ARN, selava y se resuspende
2. En un tubo eppendorf tenemos 50 µl de una solución de ADN genómico humano. Para
calcular su concentración se diluyen 5 µl de la solución con 195 µl de tampón TE y se mide la
absorbancia de la dilución a 260 nm, 280nm y 320 nm. Los valores obtenidos son los
siguientes:
A260 = 0,469. A280 = 0,265. A320 = 0,019.
Calcula:
- La concentración de la solución original en ng/µl.
- La pureza del ADN.
- La cantidad total de ADN en µg en la solución original.
a) La concentración de la solución original en ng/µl.
1 A -------------------50 ng/µl
0.469--------------X
X = 23,45 ng/µl en la solución diluida
Hemos hecho una dilución 5/200, es decir, 1/40, luego:
Concentración = 23,45 x 40 = 938 ng/μl en la solución original (concentrada)
b) La pureza del ADN.
A260/A280 = 0,469/0,265= 1,83 (ADN puro)
c) La cantidad total de ADN en µg en la solución original.
938 ng-----------------------1μl
X ---------------------50μl
Cantidad de ADN en la solución: 938 x 50 = 46.900 ng = 46. 9μg