CULTIVO DE
MUESTRAS DEL
TRACTO GENITAL
LILIA ACEVEDO / UNAH
De todos los microorganismos investigados en infecciones genitales, solo
unos pocos son agentes de infecciones de transmisión sexual (ITS):
Chlamydia trachomatis
virus del herpes simple (cervicitis, uretritis,
(VHS-virus del herpes orquitis, epididimitis, Mycoplasma genitalis Haemophilus ducreyi
Neisseria gonorrhoeae Trichomonas vaginalis Treponema pallidum (uretritis y cervicitis) (chancro blando)
genital), linfogranuloma
venéreo),
Klebsiella granulomatis VPH- virus del papiloma
(donovanosis) humano (condiloma).
Microbiota de la vagina
Infecciones relacionadas con el embarazo
Candida spp
• la candidiasis vulvovaginal generalmente es
causada por C. albicans (85%) o C. glabrata
(15%) y muy raramente por otras especies.
• Los cambios en la microbiota vaginal, como
los cambios en los niveles de hormonas
reproductivas asociadas con períodos
premenstruales, embarazo y
anticonceptivos, así como el uso de
antimicrobianos, generalmente
predisponen a la inflamación, y el
microorganismo de la microbiota endógena
puede producir efectos patógenos que
causan infección
Neisseria
gonorrhoeae
La gonorrea, causada El desarrollo de Al igual que la
por N. gonorrhoeae, resistencia a casi clamidia, la infección
es una enfermedad todos los no tratada o tratada
ancestral transmitida antimicrobianos inadecuadamente
casi exclusivamente utilizados en el puede provocar
por contacto sexual. tratamiento ha secuelas como
generado embarazo ectópico e
preocupación infertilidad.
mundial; se teme que
la gonorrea se vuelva
intratable. Se estima
que el 50% de las
mujeres infectadas
son asintomáticas.
Trichomonas
vaginalis
La tricomoniasis es la infección de transmisión sexual no viral
más frecuente en el mundo, según la OMS.
Además, aumenta la transmisión y adquisición de VIH y la
probabilidad de resultados adversos en el embarazo.
La infección puede ser asintomática en el 50% de las mujeres y
en el 70% al 80% de los hombres, por lo que el diagnóstico de
laboratorio es esencial.
A diferencia de las infecciones por Neisseria o clamidia que
generalmente afectan a las mujeres más jóvenes (15 a 25
años), la tricomoniasis es predominante en una etapa posterior
(40 a 50 años), siendo más frecuente en mujeres que en
hombres (4:1).
T. vaginalis se adhiere a las membranas mucosas asociadas con
las células escamosas, pero no invade la mucosa, por esta razón
es más difícil que el protozoo permanezca en la uretra
masculina.
Gardnerella vaginalis
La vaginosis se caracteriza por un aumento de la microbiota
anaerobia y una disminución de Lactobacillus.
Anteriormente considerada una anormalidad inofensiva, ahora se
ha asociado con una variedad de infecciones y complicaciones
como amnionitis, fiebre y endometritis posparto, parto prematuro,
sepsis después de la histerectomía, enfermedad inflamatoria
pélvica e infección del tracto urinario.
Un grupo muy diverso de microorganismos está involucrado en la
vaginosis bacteriana, incluyendo Prevotella spp., G. vaginalis,
especies de Mobiluncus spp., Peptostreptococcus spp. y
Mycoplasma hominis.
Como está presente en mujeres asintomáticas, la microscopía del
flujo vaginal es más relevante para el diagnóstico de vaginosis
bacteriana que el cultivo.
MUESTRAS
• Lesión genital (vulva o de pene) Limpiar la superficie de la lesión con solución salina estéril y recoger
mediante uno de los métodos descritos a continuación y de acuerdo con la solicitud médica:
• Para el cultivo de hongos recolectar con un hisopo el exudado o eritema de la lesión.
• Si hay una vesícula, recolectar su contenido para el cultivo de VHS:
a) Vesícula no rota: recoger el líquido con un hisopo o aspirar con una aguja y jeringa.
b) Raspar la base de la vesícula y recoger la muestra con un hisopo de dacrón frotando bien la vesícula.
Para el estudio de H. ducreyi:
a) Con un hisopo humedecido en solución salina estéril, recolectar la muestra frotando bien la base de la
lesión o raspando la lesión suavemente con un portaobjetos o con una aguja hasta que emerja un líquido
seroso. Irrigar con solución salina estéril y aspirar el líquido con una jeringa para el cultivo de H. ducreyi.
b) También hacer un frotis para realizar tinción de Gram colocando una gota del líquido en un portaobjetos.
c) Para el cultivo, el material puede recogerse con un hisopo que incluya el tubo con medio de transporte
Amies. Refrigerar el hisopo inmediatamente después de la recolección mejora la recuperación.
Para el estudio de
• Con un hisopo humedecido en solución salina estéril, recolectar la muestra frotando bien
la base de la lesión o raspando la lesión suavemente con un portaobjetos o con una aguja
hasta que emerja un líquido seroso.
H. ducreyi:
• Irrigar con solución salina estéril y aspirar el líquido con una jeringa para el cultivo de H.
ducreyi.
• También hacer un frotis para realizar tinción de Gram colocando una gota del líquido en
un portaobjetos.
• Para el cultivo, el material puede recogerse con un hisopo que incluya el tubo con medio
de transporte Amies. Refrigerar el hisopo inmediatamente después de la recolección mejora
la recuperación.
Test de Tzanck
Para el estudio de VHS:
a) Vesícula no rota: recoger el líquido
con un hisopo o aspirar con aguja y
jeringa.
b) Raspar la base de la vesícula y
recoger la muestra con un hisopo
de dacrón frotando bien la vesícula.
c) Colocar en portaobjeto
d) Colorear con Giemsa.
e) Observar las células multinucleadas
Muestra rectal para la investigación de N.
gonorrhoeae:
a) Introducir el hisopo a través del esfínter anal (2 cm a 3 cm) y gire
durante 10 a 30 segundos para la absorción o presione lateralmente
para obtener células epiteliales.
b) El hisopo no debe contaminarse con heces, en este caso, recolectar
una nueva muestra. Esta muestra se puede usar para cultivo o
pruebas moleculares.
c) Siempre consultar y seguir las recomendaciones del fabricante del
test antes de recolectar la muestra
Para el estudio de
Donovanosis:
a) Después de limpiar la superficie, pasar
un hisopo sobre la base de la úlcera,
asegurando una buena muestra de los
bordes de la úlcera donde se
encuentran con mayor frecuencia los
cuerpos de Donovan.
b) Frotar toda la superficie del hisopo con
el material recogido uniformemente
sobre la superficie del portaobjetos,
déjelo secar antes de transportarlo al
laboratorio.
c) Colorear con Giemsa o Gram
PROCEDIMIENTO DE MICROSCOPÍA
• Examen al fresco: colocar 1 gota de la muestra en un portaobjetos, cubrir con un
cubreobjetos y observar bajo el microscopio.
• Evaluar la presencia de levaduras y tricomonas con un objetivo de 10× y
confirmar la morfología en un objetivo de 40×.
• Idealmente, la microscopía debe realizarse dentro de los 10 minutos posteriores
a la recolección para obtener una mayor sensibilidad, ya que las tricomonas
pierden rápidamente la motilidad y la cantidad de parásitos a menudo es baja, lo
que resulta en una prueba falso negativa.
• Detección de treponema en campo oscuro y tinción de Fontana.
• Método de Tinción debe realizarse para todas las muestras y su resultado puede
sugerir la inclusión de algún otro medio de cultivo específico.
• El método de tinción de Gram se considera superior al del cultivo para el
diagnóstico de chancro blando (H. ducreyi).
Sugerencia para lectura e interpretación de la
tinción de Gram en muestra de secreción vaginal.
Criterio de Nugent utilizado para realizar el
diagnóstico de vaginosis bacteriana a partir del
frotis vaginal con tinción de Gram.
(3 + 2 + 2) es 7, indicativo de vaginosis
bacteriana. Según el puntaje, se puede
informar:
7 a 10: presencia de morfotipos
bacterianos mixtos compatibles con
vaginosis bacteriana. Observar e informar
la presencia de células clave (clue cells),
levaduras, tricomonas y leucocitos, cuando
estén presentes.
La cuantificación de cada uno de los tres
morfotipos bacterianos se observa con
un aumento de 1.000×, de la siguiente
manera: • 0-1 = 1+ • 1-4 = 2+ • 5-30 = 3+
• > 30 = 4+
Clue cell
• La tinción de Gram es
más sensible y específica
para el diagnóstico de
vaginosis causada por G.
vaginalis que el examen
al fresco con la
visualización de células
clave, el cual sugiere una
infección por este
agente.
Siembra de muestras recolectadas con hisopo
Frotar toda la superficie del hisopo en un área pequeña de las placas CHOC,
AS y TM y luego guardarlo en el mismo medio de transporte. Este hisopo
puede mantenerse refrigerado durante 24 horas o hasta informar el
resultado.
El TM puede usarse en muestras de secreción vaginal/endocérvix, ya que el
objetivo es inhibir la microbiota normal de la muestra analizada, recordando
que algunas marcas de este medio de cultivo pueden inhibir N. gonorrhoeae.
Sembrar las placas con asa bacteriológica en tres direcciones, siempre
comenzando con el medio no selectivo (ver Capítulo 4).
Las placas de CHOC sembradas para el aislamiento de H. ducreyi deben
incubarse a 33 o C en estufa de CO2.
Siembra de muestras recoletadas en hisopo para
la detección de estreptococos del grupo B
Método 1: siembra en caldo TODD-Hewitt (con colistin y ácido nalidíxico, que ha demostrado superioridad en el aislamiento de SGB).
• Colocar los hisopos (muestras introito vaginal y rectal) en un único caldo. Incubar durante 18 a 24 horas en estufa a 35 o C ± 2 o C.
• Después de este período, subcultivar una muestra del caldo en una placa AS o medio cromogénico para los estreptococos del grupo B.
• Incubar la placa durante 18 a 24 horas en estufa con CO2 a 35 o C ± 2 o C.
• Opcionalmente, se puede sembrar el hisopo en AS antes de inocular en el caldo.
• Un estudio demostró que la siembra del material directo en una placa AS aumentó en el 15% la detección de estreptoococos del grupo
B. Enterococcus faecalis puede mostrar un crecimiento excesivo en los cultivos de caldo, inhibiendo el crecimiento del estreptococo del
grupo B.
Método 2: siembra en caldo Carrot o Granada. Colocar los hisopos en un solo tubo que contenga el caldo. Incubar durante 18 a 24 horas
en estufa a 35 o C ± 2 o C. Si no hay cambio de color, es decir, una prueba negativa, subcultivar la muestra del caldo en una placa de AS e
incubar durante 18 a 24 horas en estufa con CO2 a 35 o C ± 2 o C.
Método 3: siembra en medio cromogénico selectivo y diferencial para estreptococo del grupo B.
• Sembrar los hisopos en el medio cromogénico utilizando la técnica de asilamiento.
• Se puede utilizar mitad de una placa para cada hisopo (muestra de introito vaginal y rectal). Incubar a 35 o C ± 2 o C durante 18 a 24
horas. Los estudios han demostrado que incubar el hisopo en caldo selectivo (TODD-Hewitt) antes de realizar la siembra en el medio
cromogénico aumenta significativamente la sensibilidad del cultivo.
Siembra de las muestras recolectadas por
punción
Primero colocar 1 gota de la muestra en medio líquido (THIO) y luego 1
gota en las placas MC, AS y CHOC.
Finalmente, hacer un frotis para el examen microscópico.
- Comenzar a sembrar desde el medio no selectivo por aislamiento (ver
- Incubar las placas AS y CHOC en estufa con CO2, el medio líquido y el
MC en estufa aerobia a 35 o C ± 2 o C hasta 72 horas, con lectura diaria.
Siembra de muestras para resultados
cuantitativos
• Esperma o líquido prostático.
a) Homogeneizar la muestra.
b) Sumergir el asa calibrada de 0,01 ml (1:100) en la muestra, verticalmente.
c) Sembrar en AS y CHOC usando la técnica cuantitativa.
d) Interpretación: asa de 0,01 ml (1:100) – 1 colonia = 100 o 102 UFC/ml.
• Orina de 1er chorro
a) Centrifugar 10 ml de orina a 1.500 rpm durante 5 minutos.
b) Desechar el sobrenadante dejando 1 ml y sembrar el sedimento con el asa
calibrada de 0,01 ml en AS y CHOC.
c) Interpretación: asa de 0,01 ml (1:100) – 1 colonia = 100/10 (concentración de la
muestra por centrifugación) = 10 UFC/ml.
Chlamydia trachomatis
varias son las metodologías que pueden ser utilizadas para el estudio de este
agente. Las más comunes son:
1. Detección de antígeno: a partir de muestras de raspado de mucosa cervical,
por el método de inmunofluorescencia directa (ID) o por técnica
inmunoenzimática (EIA). Estas pruebas tienen baja sensibilidad.
2. Pruebas serológicas: reacción de fijación del complemento (RFC),
inmunofluorescencia para IgG e IgM. Se recomiendan las pruebas serológicas Cocos Gram negativo inmóviles,
para el diagnóstico de linfogranuloma venéreo. La investigación de IgM es útil caracterizados por un parasitismo
para diagnosticar neumonía en niños menores de 3 meses. No deben usarse
para el diagnóstico de infección urogenital no complicada. intracelular obligado y un ciclo
reproductivo en el que puede
3. Pruebas moleculares de amplificación de ácidos nucleicos: amplificación de
ADN o ARN, con la detección del producto amplificado en una variedad de
distinguirse una forma infecciosa
formas, conduce a diferentes pruebas con características y rendimientos extracelular metabólicamente inerte
únicos. Debido a su excelente especificidad y sensibilidad, a la posibilidad de (cuerpo o corpúsculo elemental),
automatización, al hecho de que no requiere un microorganismo viable y a la redondeado y con un diámetro de 0,2 a
posibilidad de combinar con pruebas para la detección de N. gonorrhoeae, la
Organización Mundial de la Salud recomienda el uso de estos métodos para el
0,3 micras (µm), y una forma no
diagnóstico de infecciones por clamidia infecciosa intracelular y activa (cuerpo
reticulado), con un diámetro de 0,8 µm
Haemophilus ducreyi:
• El cultivo requiere medio fresco (hasta 7 días de fabricación), incubación en estufa
con humedad y CO2 y temperaturas entre 32 o C y 34 o C.
• Se puede considerar el uso de CHOC, pero la recuperación del microorganismo es
mejor con la adición de 5% de suero fetal bovino y 1% de factores VX.
• La OMS recomienda el uso de medio Mueller-Hinton con sangre de caballo,
suplementado con factores VX y vancomicina (3 μg/ml), y el uso de dos medios
selectivos aumenta la posibilidad de aislamiento de este microorganismo.
• Si la placa de CHOC con la muestra de lesión genital no crece dentro de las 72
horas posteriores a la incubación, informar el resultado parcial e incubar durante
cinco días antes de informar el resultado como negativo para H. ducreyi.
• Es un microorganismo difícil de aislar y, en la mayoría de los casos, el diagnóstico
se realiza mediante examen microscópico después de la tinción de Gram
(pequeños bacilos gramnegativos típicamente agrupados en cadenas de
“cardumen de peces” o “vías férreas”).
• Además, la mayoría de las úlceras genitales albergan una microbiota
polimicrobiana debido a la contaminación secundaria y contribuyen al bajo
rendimiento de la microscopía como herramienta de diagnóstico debido a su baja
sensibilidad y especificidad.
Al momento de la evaluación de las placas de
cultivo
• Deben estar disponibles los resultados de la microscopía (Gram), incluso si no lo solicita el médico, y el examen directo).
• Siempre correlacionar el número de células epiteliales/leucocitos con la cantidad de crecimiento y el tipo de microorganismos
• Comenzar la lectura de las placas después de 24 horas, primero verificar las placas de TM y CHOC; si no hay crecimiento, incubar
nuevamente en estufa con CO2. Este procedimiento debe realizarse durante todo el período de observación del cultivo (72 horas).
• La identificación de microorganismos de cultivos del tracto genital puede realizarse mediante métodos fenotípicos, automatizados
o MALDI-TOF.
• En muestras vaginales de niñas, deben ser considerados e informados Shigella spp., S. aureus, Streptococcus pyogenes,
Haemophilus spp. y Streptococcus pneumoniae, además de los otros microorganismos asociados con infecciones del tracto genital
femenino.
• Se deben identificar los siguientes microorganismos: Haemophilus spp., Pseudomonas spp. y otros no fermentadores de glucosa, S.
aureus, S. pneumoniae y G. vaginalis; si tienen crecimiento abundante y son prevalentes en el cultivo de muestra vaginal.
• Estos microorganismos, cuando están presentes en menor cantidad que la microbiota normal, deben considerarse microbiota
normal.
• Las enterobacterias forman parte de la microbiota normal y no deben notificarse sin antes evaluar otros parámetros (uso de
antibióticos, paciente inmunodeprimido e infección urinaria recurrente por el mismo agente) para considerar que el crecimiento
de muchas colonias es significativo.
Cultivo de secreción prostática
• La interpretación del crecimiento bacteriano en muestras de orina de
primer chorro, antes y después del masaje prostático, de segundo chorro y
secreción prostática, identifica el sitio de la infección.
• La indicación de infección crónica de la próstata se define cuando el
recuento de colonias en la muestra de secreción de próstata o en la orina
del primer chorro después del masaje (orina del tercer chorro) es al menos
10 veces mayor que el crecimiento bacteriano en la muestra de orina del
primer chorro antes del masaje prostático
• Los patógenos primarios que deben considerarse e identificarse, son:
enterobacterias, P. aeruginosa, Enterococcus spp., S. aureus, estreptococos
de los grupos A, B, C y G, Candida spp., Staphylococcus coagulasa negativo,
Corynebacterium spp. Los microorganismos de la microbiota de la piel
deben identificarse si hay aislamiento puro.
Cultivo de esperma
• Evaluar el crecimiento en las placas AS, CHOC después de 24 y 48 horas de
incubación.
• Si la muestra de esperma tiene leucocitos (proceso inflamatorio), se debe
identificar y reportar el crecimiento de cualquier cantidad de microorganismo
considerado patógeno.
• En ausencia de un proceso inflamatorio, el crecimiento > 103 UFC/ml de
microorganismos considerados patógenos puede ser significativo.
• Existe literatura que considera significativo un crecimiento de más de 5.000
UFC/ml.
• Los patógenos primarios son los mismos que los mencionados anteriormente,
para la secreción prostática.
• Recuerde que el cultivo de esperma acompañado de cultivo de orina de primer
chorro, recolectado al mismo tiempo, ayuda en la evaluación e interpretación del
resultado.
INFORME; Cultivo de secreciones vaginal,
endocervical y uretral
Ejemplo 1:
• Muestra clínica: exudado vaginal y/o cervical Método: cultivo en medios apropiados para diferentes
microorganismos. Resultado: hubo crecimento de microbiota vaginal normal. Obs.: Candida albicans (escasas
colonias).
Ejemplo 2
• Muestra clínica: secreción uretral Método: cultivo en medios apropiados para diferentes microorganismos
Resultado: Neisseria gonorrhoeae. Se recomienda hacer la prueba de producción de betalactamasa para
Neisseria spp. e informar si es positiva o negativa. Se debe hacer el antibiograma si hay solicitud médica.
Ejemplo 3
• Muestra clínica: introito vaginal y rectal Método: cultivo en caldo de enriquecimiento (TODD-Hewitt) y
medios específicos Resultado: Streptococcus agalactiae (betahemolítico del grupo B). Obs.: examen
realizado entre la 36a e a 37a semana de embrazo.
Ejemplo 4
• Muestra de exudado vaginal y cervical en que fueron aislados Corynebacterium spp., lactobacilos y
Staphylococcus coagulasa negativa, con microscopía normal Muestra clínica: exudado vaginal y cervical
Método: cultivo en medios apropiados para diferentes microorganismos Resultado: crecimiento de
microorganismos compatibles con la microbiota vaginal normal.
Cultivo de secreción prostática, orina de segundo
chorro y orina de 1er chorro (pre y posmasaje
prostático)
Ejemplo 1:
Muestra clínica: orina de 1er chorro premasaje prostático Método: cuantitativo en medios apropiados para diferentes
microorganismos Resultado: Escherichia coli – recuento: 200 UFC/ml. Corynebacterium spp. – recuento: 300 UFC/ml.
Ejemplo 2:
Muestra clínica: orina de segundo chorro Método: cuantitativo en medio apropiado para diferentes microorganismos Resultado: no
hubo crecimiento de microorganismos en la muestra analizada.
Ejemplo 3:
Muestra clínica: secreción prostática Método: cuantitativo en medio apropiado para diferentes microorganismos Recuento: 5.000
UFC/ml Resultado: Escherichia coli.
Ejemplo 4:
Muestra clínica: orina de 1er chorro posmasaje prostático (orina de 3er chorro). Método: cuantitativo en medios apropiados para
diferentes microorganismos. Recuento: 3 × 103 UFC/ml. Microorganismos aislados: Escherichia coli.
Ejemplo 5: Muestra clínica: esperma Recuento = 1,5 × 104 UFC/ml Método: cuantitativo en medios apropiados para diferentes
microorganismos Resultado: Escherichia coli – 70%. Corynebacterium spp. – 30%.
Ejemplo 6: Muestra clínica: orina de 1er chorro Método: cuantitativo en medios apropiados para diferentes microorganismos
Resultado: Escherichia coli – 1,5 × 103 UFC/ml. Corynebacterium spp. – 5 × 102 UFC/ml.
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