UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS INFORME DE
Facultad de Ciencias básicas e ingenierías LABORATORIO
Departamento de Matemáticas y Física BIOQUÍMICA I.
INFORME DE LABORATORIO.
SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS EN LA SANGRE
PRÁCTICA N ° 05.
Laura Fernanda Pulgarín. - Cód.: 161014831
Valeria vivas pardo. - Cód.:161014743.
Bioquímica ambiental.
Facultad de Ciencias Básicas e Ingenierías.
Programa
1. Objetivos:
● Separar las diferentes proteínas de la sangre por precipitación con sulfato de amonio y
reconocer su presencia mediante la prueba de Biuret.
● Separar la hemoglobina de una muestra de sangre por hemólisis de los eritrocitos y
reconocer sus propiedades oxido reductoras.
2. Resultados.
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1
Figura 1. Pruebas de proteínas.
1. Fibrinógeno
2. Globulinas
3. Albúmina
pH1: básico
pH2: básico
ph3: básico
1. Al agregar los 0,7300 g de sulfato de amonio ( NH4) SO4 poco a poco a los 5 ml de
plasma disolviendo en el tubo de centrifugar y centrifugar por 5 minutos a 6000 rpm se
pudo observar que quedó con un color blanco transparentoso. Después de esto se separó
el líquido sobrenadante se disolvió el residuo de fibrogeno agregando 3 ml NACL al 2
% mas 12 gotas de hidróxido de sodio al 10 %. Al realizar la prueba de pH con papel
tornasol rojo este cambio a azul. después de esto se agregaron los 3 ml de reactivo
biuret, al agregarle esto tomó una coloración morada
2. Al sobresaliente del plasma anterior sele agregaron 0,840 g de (NH4)2 SO4 se
observó una turbidez en el tubo, después de esto se centrifugó a 6000 rpm por 5 minutos
y se separó el líquido sobrenadante. luego se le agregaron 5 ml de NACL 2% y se agita
continuación se le adicionaron 12 gotas de hidróxido de sodio al 10 % y se verifico el
ph, que efectivamente paso de color rojo a azul. después de esto se le agregaron 3 ml del
reactivo biuret y tomo una coloración azul oscuro
3. Recogido el sobrenadante anterior se le agregaron g de (NH4)2SO4, aparece una
turbiedad en el tubo que indica que hubo precipitación de las proteínas, luego de esto se
centrifugó por 5 minutos a 6000 rpm, a partir de esto se le agregan 5 ml de NACL al 2%
más 12 gotas de hidróxido de sodio al 10%, se verifico el ph con papel tornasol rojo que
efectivamente paso a azul y se le agregaron 3 ml de reactivo biuret tomando un color
morado-gris.
2
3. Análisis de resultados
Separación del fibrinógeno:
Reacción de precipitación del fibrinógeno con sulfato de amonio:
Fibrinógeno + (NH4)2SO4 → Fibrinógeno precipitado
El fibrinógeno es una proteína plasmática que interviene en el proceso de coagulación
sanguínea.
Al agregar sulfato de amonio ((NH4)2SO4) al 25% del volumen total de plasma, el
fibrinógeno precipita debido a la disminución de la solubilidad de esta proteína. La
centrifugación permite separar el fibrinógeno precipitado del resto del plasma.
El fibrinógeno precipitado se redisuelve en solución salina (NaCl 2%) y luego se
verifica su presencia mediante la prueba de Biuret, que indica la presencia de enlaces
peptídicos. [1]
Separación de las globulinas:
Reacción de precipitación de las globulinas con sulfato de amonio:
Globulinas + (NH4)2SO4 → Globulinas precipitadas
Las globulinas son otra clase de proteínas plasmáticas. Al agregar más sulfato de
amonio (aproximadamente 45% de saturación), las globulinas precipitan y se separan
por centrifugación.
El precipitado de globulinas se redisuelve en solución salina y se verifica su presencia
mediante la prueba de Biuret. [2]
Separación de la albúmina:
Reacción de precipitación de la albúmina con sulfato de amonio:
Albúmina + (NH4)2SO4 → Albúmina precipitada
La albúmina es la proteína más abundante en el plasma sanguíneo. Al aumentar la
concentración de sulfato de amonio al 60-65% de saturación, la albúmina precipita.
Después de la centrifugación, el precipitado de albúmina se redisuelve en solución salina
y se verifica su presencia con la prueba de Biuret. [3]
La precipitación de proteínas como la albúmina mediante sulfato de amonio es un
proceso de salting-out, donde la alta concentración de iones de la sal reduce la
solubilidad de las proteínas en agua. Esto ocurre porque los iones de la sal compiten con
las proteínas por las moléculas de agua, lo que disminuye la hidratación de las proteínas
y promueve su agregación y precipitación. En el caso de la albúmina, se precipita con
soluciones de sulfato de amonio al 100% de saturación. La reacción no implica un
cambio químico en la estructura de la proteína, sino un cambio en su solubilidad debido
a la interacción con los iones de la sal. [4]
Es importante considerar que el sulfato de amonio es una sal que disminuye la
solubilidad de las proteínas, lo que permite su precipitación selectiva a diferentes
concentraciones de saturación. Las cantidades de sulfato de amonio se calculan en
relación al volumen de plasma utilizado, ya que la cantidad necesaria para precipitar
cada fracción proteica depende del contenido relativo de cada tipo de proteína en el
plasma. Es probable que no se obtengan las mismas cantidades de las tres proteínas
separadas, ya que su concentración en el plasma sanguíneo varía. [5]
La prueba de Biuret permite confirmar la presencia de proteínas en cada una de las
fracciones separadas, ya que esta reacción colorimétrica es positiva en presencia de
enlaces peptídicos.
En resumen, este proceso de fraccionamiento del plasma sanguíneo mediante
precipitación con sulfato de amonio y la posterior verificación de las proteínas por la
prueba de Biuret, permite separar y caracterizar las principales proteínas plasmáticas.
Cuando se realiza la prueba de Biuret se tiene una reacción de la forma:
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Proteínas + Cu2+ (en medio básico) → Complejo de color morado
En esta reacción, los iones cobre (II) del reactivo de Biuret forman un complejo de color
morado al interactuar con los enlaces peptídicos de las proteínas en un medio básico
(generado por el NaOH). La presencia de este color indica la existencia de proteínas en
las fracciones obtenidas después de la precipitación con sulfato de amonio.
La prueba de Biuret se basa en la detección de enlaces peptídicos presentes en las
proteínas. Cuando se añade el reactivo de Biuret a una solución que contiene proteínas,
se forma un complejo de color morado si hay presencia de dos o más enlaces peptídicos.
La reacción química fundamental es la formación de un complejo de coordinación entre
los iones de cobre (Cu2+) del sulfato cúprico y los pares de electrones no compartidos
del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. El ion de cobre se une a los
grupos carbonilo (>C=O) y amida (=NH) de los enlaces peptídicos, lo que resulta en el
cambio de color.[6]
Por lo tanto, la observación del color morado en cada una de las fracciones proteicas
separadas confirma la presencia de proteínas y permite identificar cada tipo de proteína
plasmática (fibrinógeno, globulinas y albúmina) obtenida mediante el proceso de
precipitación con sulfato de amonio.
4. Conclusiones.
Es posible comprender como funciona la separación de las diferentes proteínas de la sangre
por precipitación con sulfato de amonio, esto por medio del proceso de precipitación
selectiva de las proteínas plasmáticas (fibrinógeno, globulinas y albúmina) utilizando
diferentes concentraciones de sulfato de amonio. La separación de estas proteínas se logra
gracias a las diferencias en su solubilidad, la cual disminuye a medida que aumenta la
concentración de la sal. Este procedimiento permite aislar y obtener las principales
fracciones proteicas presentes en el plasma sanguíneo.
Se reconoce la presencia de proteínas mediante la prueba de Biuret en cada una de las
fracciones separadas a través de la prueba de Biuret. La reacción positiva de color morado
indica la existencia de enlaces peptídicos, confirmando que las sustancias precipitadas
corresponden a proteínas. Este ensayo colorimétrico permite identificar y caracterizar cada
tipo de proteína plasmática obtenida.
5. Bibliografía.
[1] Fernando Moure Fernández. (2024). Separación de proteínas de sangre, análisis de alternativas.
Dialnet. [Link]
[2] Prueba de albúmina en la sangre. (2021). [Link].
[Link]
#:~:text=La%20prueba%20de%20alb%C3%BAmina%20en%20la%20sangre%20mide%20la
%20cantidad,prote%C3%ADna%20producida%20por%20el%20h%C3%ADgado.
[3] Globulina. (2023, September 15). ADSSIO Laboratories – Laboratorio Clínico En Ciudad de
Panamá. [Link]
[4] Proteínas totales, cociente albúmina-globulina (A/G). (2022). [Link].
[Link]
%20globulinas%20son%20un%20grupo%20de%20prote%C3%ADnas%20de%20la
%20sangre,alfa%202%2C%20beta%20y%20gamma.
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[5] OMS. (2023). DeCS. [Link].
[6] Hidalgo, C. (n.d.). EVALUACION DEL METODO DEL BIURET PARA LA CUANTIFICACION
DE LAS PROTEINAS TOTALES EN EL LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO.
[Link]