Materia:
Procesos Biológicos
Práctica #2
Permeabilidad Membranal
Docente:
Mariana Ponce Mendoza
Integrantes del Equipo:
Valeria Pérez García
Graciela Alondra Romero de la Vega
María José Magaña Cacho
Luis Eduardo Haros De Jesús
PERMEABILIDAD MEMBRANAL
Resumen
En esta práctica se llevó a cabo la simulación de la permeabilidad membranal con
ayuda de papel celofán y algunas sustancias.
Palabras clave
Permeabilidad, función membranal, almidón, fenolftaleína, lugol.
Introducción
A temperaturas fisiológicas, las bicapas lipídicas de las membranas celulares tienen
carácter fluido. Esta fluidez, aparte de proporcionar la flexibilidad que requiere la
membrana para diversos procesos (cambios de forma,endocitosis, exocitosis), puede
ser crítica para la función de muchas proteínas, bien porque la actividad de la proteína
dependa de su difusión en el plano de la membrana o bien, porque su funcionamiento
implique cambios de conformación dentro de la bicapa (Kimelberg, 1977).
Robertson postuló la denominada teoría unitaria de la membrana, la cual establece
que todas las membranas biológicas están constituidas por una bicapa lipídica. El
sustento de esta propuesta fueron imágenes de membranas celulares obtenidas por
microscopía electrónica (Robertson, 1959).
La bicapa lipídica, debido a su interior hidrofóbico, actúa como barrera altamente
impermeable a la mayoría de las moléculas polares impidiendo así que la mayor parte
del contenido hidrosoluble salga de ella. Pero, en esta razón, las células han tenido
que desarrollar sistemas especiales para transportar las moléculas a través de sus
membranas. El transporte de pequeñas moléculas a través de la bicapa lipídica se
consigue mediante proteínas transmembrana especializadas, cada una de las cuales
es responsable de la transferencia de una molécula específica o de un grupo de
moléculas afines. Las células también han desarrollado sistemas para transportar a
través de sus membranas plasmáticas macromoléculas (tales como proteínas) e
incluso grandes partículas, pero los mecanismos que intervienen en estos casos son
muy diferentes de los utilizados para transferir pequeñas moléculas (Engelman et al
1986).
La velocidad de penetración de una molécula a través de la membrana plasmática
(permeabilidad) varía ampliamente entre las diferentes moléculas. Una molécula
atraviesa más rápidamente la membrana cuando menor es su tamaño (menor peso
molecular) y cuanto mayor es su solubilidad en lípidos es relación con su solubilidad
en agua (coeficiente de partición). La membrana celular deja pasar con facilidad:
a)moléculas pequeñas no polares (hidrofóbicas), como el oxígeno, nitrógeno, benceno
y hormonas esteroideas; y b)moléculas pequeñas polares (hidrofilas) sin carga, como
el agua, urea, glicerol y dióxido de carbono. Sin embargo, es mucho más
impermeable a los iones y moléculas cargadas, por lo que estas sustancias atraviesan
la membrana lentamente. Es decir, para que una partícula pueda atravesar la
membrana celular debe tener un tamaño igual o menor a los poros de la membrana,
debe de tener la carga opuesta a la carga de la membrana o simplemente tener carga
neutra, y si es más grande que los poros deben ser disuelta en una solución,
disminuyendo su tamaño (Paniagua et al 2017).
Por otra parte, el reactivo Lugol, se puede utilizar para reconocer la presencia de
almidón, porque esta sustancia absorbe el yodo produciendo una coloración
azul/morada intensa, coloración que desaparece al calentar porque se rompe la
estructura que se ha producido, pero vuelve a aparecer al enfriar. Además, el yodo es
un agente oxidante débil; sin embargo, es útil en análisis volumétrico debido a su
selectividad y a que son posibles puntos finales muy definidos cuando se usa el
almidón como indicador (Walton, 1970).
La membrana ejerce una permeabilidad altamente selectiva para el paso de
sustancias entre el exterior, sea éste el medio intercelular u otra célula, y el interior;
permeabilidad selectiva que resulta muy importante por tres razones:
● Para proteger la integridad de la célula.
● Para mantener las condiciones químicas de forma que el metabolismo celular
pueda llevarse a cabo.
● Para coordinar la actividad del conjunto de células que forman un organismo
pluricelular.
Aunque al referirse a membrana se va a, pensar en la membrana plasmática, habrá
de tenerse en cuenta que lo que se menciona es también de aplicación para el
conjunto de membranas que constituyen los diferentes orgánulos celulares y la
membrana nuclear. Las membranas celulares son selectivamente permeables o
semipermeables, pues permiten el paso de determinadas moléculas o iones y
restringen el de otros:
● Algunas moléculas no polares de pequeño tamaño (como el oxígeno y el
nitrógeno molecular), moléculas polares sin carga (como el agua o el dióxido
de carbono) o solubles en lípidos (ácidos grasos y alcoholes) pueden atravesar
la membrana libremente.
● Las moléculas con carga, como los ácidos orgánicos, aminoácidos y otros
iones (H+, Na+, Cl-, K+, etc.), no pueden atravesar la membrana y tienen que
utilizar proteínas de transporte específicas.
En relación con el gasto energético que las proteínas transportadoras que se
encuentran en la membrana requieren para cumplir su función, se distinguen dos tipos
principales de transporte: transporte pasivo y transporte activo.
Transporte pasivo
Se denomina pasivo porque no implica consumo alguno de energía por parte de la
célula. Para llevarlo a cabo se aprovecha el gradiente químico y se ha de tener en
cuenta que la membrana plasmática es permeable al agua y sustancias apolares.
También hay que tener en cuenta el tamaño de la molécula, cuanto más pequeña más
rápidamente se dará. Puede tener lugar por diferentes mecanismos.
Difusión simple: ha de existir un gradiente de concentración entre ambos lados de la
membrana y el paso de sustancias se realizará a favor del mismo. A mayor gradiente,
mayor rapidez en el transporte. Es necesario que las sustancias sean hidrófobas para
así disolverse en la matriz lipídica de la membrana. Así, se mueven sustancias tales
como el O2, el CO2, ciertos iones, etc. También existe la posibilidad de que se lleve a
cabo la difusión simple para sustancias menos hidrófobas; en este caso, es necesaria
la colaboración de ciertas proteínas integrales de membrana que crean poros
temporales, por los que las moléculas pueden pasar de un lado otro de la misma; son
las denominadas proteínas canal.
Difusión facilitada:se va a producir a favor de gradiente y, nuevamente, es preciso la
colaboración de proteínas de membrana, denominadas permeasas. Estas proteínas
tienen una alta especificidad estructural para la molécula que van a transportar, de
modo que se unen a ella; tras la unión sufren un cambio conformacional que permite
la translocación de la molécula a través de la membrana, soltándose una vez se
encuentra en el otro lado y recuperando así la estructura original.
Transporte activo
El transporte activo implica un gasto de energía necesaria para vencer el gradiente
contra el que se realiza el mismo. Este tipo de transporte tiene dos características
fundamentales por un lado, la necesidad de que existan unas proteínas integrales de
membrana, denominadas transportadoras, que actuarán a modo de bombas de
impulsión de las sustancias, y, por otro, la hidrólisis de ATP a ADP para la obtención
de la mencionada energía. Quizá el modelo mejor conocido sea la llamada bomba de
sodio-potasio. Este transporte permite que se mantengan las diferencias de potencial
químico entre ambos lados de la membrana: la concentración de Na+ es mucho
menor en el interior que en el exterior, a pesar de que la entrada de dicho ión está
facilitada, ya que el interior celular es eléctricamente negativo, y la concentración de
K+ es mucho menor en el exterior que en el interior. Lo más interesante del modelo es
que la fosforilación y desfosforilación de la proteína llevan consigo cambios
conformacionales que permiten el transporte. Se consideran tres tipos de moléculas
transportadoras, distinguiéndose aquéllas que transportan sólo una molécula cada
vez y otras en las que el transporte de dos moléculas diferentes está compaginado,
hablándose en estos casos de sistemas acoplados o cotransportadores:
Uniporte: moléculas transportadoras que conducen una sola molécula y en un solo
sentido.
Simporte: sistema acoplado en el que la molécula transportadora mueve dos
moléculas de forma simultánea y en el mismo sentido.
Antiporte: sistema acoplado en el que se produce el transporte de dos moléculas, de
forma simultánea o sucesiva, pero en sentido contrario. Éste es el caso de la bomba
de sodio-potasio.
Planteamiento del problema
El proceso de la permeabilidad celular permite el paso de solutos a través de esta de
una forma selectiva los gases penetran libremente la membrana, así mismo las
moléculas pequeñas sin carga pasan rápidamente a través de la doble capa lipídica.
Justificación
Identificar que la permeabilidad sea un método de regulación donde permita a la
célula mantener el medio interno relativamente constante a la membrana debido a sus
características hidrofóbicas.
Objetivos
- Conocer la función de la membrana celular
- Identificar el fenómeno de la permeabilidad en una membrana artificial
Hipótesis
El uso del calor actuará cómo catalizador para que la membrana pueda tener una
mayor permeabilidad y el almidón que se encuentra al interior de esta membrana
pueda atravesar.
Método
● Lavamos el material para posteriormente usarlo
● Servimos 600 ml de agua destilada en un vaso de precipitado
● Calentamos primero a 50 grados en la parrilla, posteriormente tomamos la
temperatura agitando el termómetro sin tocar el fondo
● Subimos la temperatura a 120 grados, se estaba esperando una temperatura
de 90 grados, pero al darnos cuenta que iba un poco lento, decidimos pasar al
siguiente paso cuando el agua tenía una temperatura de 80 grados, agregamos
el papel celofán, cronometramos 15 minutos, sacamos el papel, dejamos
enfriar y secamos las gotas restantes.
● Unimos las orillas y colocamos 15ml de solución de almidón al 1% y
amarramos con un hilo, ya teníamos un vaso de precipitado con agua adentro y
5 gotas de fenolftaleína, agitamos ahí la bolsa por 5 minutos, abrimos el
celofán y colocamos 5 gotas de lugol directo al almidón
Resultados
Foto 1. Calentamiento de agua
En la foto 1. Se puede observar que Foto 3. Papel en secado
iniciamos calentando 600 ml de agua En la foto 3. Se puede percibir el papel
destilada con una temperatura inicial de con una medida aproximada de 20x20
90°C, posteriormente, debido al tiempo cm una vez que lo sacamos del agua
se aumentó la temperatura hasta caliente. Su textura se sentía un poco
120°C. más delgada que la del inicio, además
que también tomó una forma rugosa.
Foto 4. Solución de Almidón
En la foto 4. Se puede visualizar la
Foto 2. Tiempo de calentamiento del papel
solución de almidón que nuestra
En la foto 2. Se visualiza el tiempo que
docente elaboró con: 5g de almidón
tuvimos de espera en donde el papel
soluble en un vaso de 250 ml,
se añadió al agua durante 15 minutos.
agregando 5 ml de agua destilada. Una
Durante este lapso de tiempo y debido
vez calentada 400 ml de agua destilada
a la temperatura notamos que en el
se agregó la pasta anterior y finalmente
papel se creó una capa de burbujas.
se ajustó el volumen a 500 ml.
Foto 7. Agua con Lugol
En la foto 7. Se puede visualizar el
Foto 5. Solución de almidón en agua momento en que agregamos 4 gotas
En la foto 5. se puede reflejar el cómo de Lugol al agua de nuestro vaso
una vez que colocamos la solución de precipitado. En este caso no
almidón en el papel celofán, lo visualizamos algún cambio brusco de
amarramos correctamente y coloración en el agua, pero sí una
comenzamos a agitarlo en otro vaso de ligera tonalidad de azúl.
precipitado con 500 ml de agua de la
llave que contenía 5 gotas de
fenolftaleína.
Foto 8. Resultados finales
En la foto 8. Se puede observar la
coloración final de nuestras sustancias.
Foto 6. Almidón con Lugol
En la foto 6. Se puede ver la reacción
del Lugol con la solución de almidón,
creando una coloración intensa azul, lo
cual fue lo esperado ya que el Lugol
reacciona de esta manera en la
presencia de almidón.
Análisis de resultados
El primer resultado que observamos es cuándo agregamos el lugol a la solución de
almidón lo cual nos dió una coloración de azúl intenso, está coloración fue la
esperada ya que el almidón absorbe el yodo del Lugol produciendo está coloración
intensa, que es posible que desaparezca al calentarla, pero reaparece cuando se
enfriará.
El último resultado que observamos es cuándo agregamos 4 gotas de lugol a los
500ml de agua en el que sumergimos la bolsa de celofán con almidón, este se le
agregó para poder observar las moléculas de almidón que pudieron haber cruzado a
través del papel celofán simulando una membrana. Lo que pudimos observar es una
ligera tonalidad de azúl en el agua, difícil de percibir, pero está ligera tonalidad nos
indica que en realidad sí hubo moléculas de almidón que traspasaron del interior de la
membrana al exterior.
Conclusiones
Después de realizar esta práctica donde simulamos la permeabilidad de una
membrana, concluimos que la hipótesis planteada es correcta. El calor nos ayudó a
qué la membrana pueda tener una mayor permeabilidad y que al momento de agregar
la solución de almidón, formar una "bolsita" y sumergirla en el agua, las moléculas de
almidón pudieran atravesarla y llegar al agua. Para comprobar esto se le agregó lugol
a la solución de almidón, lo cual nos dió una coloración de azúl intenso; y al agua, que
aquí nos mostró una coloración casi imperceptible de azúl, pero significó que en
realidad si logró pasar moléculas de almidón.
Referencias
- Kimelberg HK (1997). La influencia de la fluidez de la membrana en la actividad
de las enzimas unidas a la membrana. Revisiones de superficie celular. Vol 3.
pp. 205-293. Elsevier Amsterdam
- Robertson, JD. (1959). La ultraestructura de las membranas celulares y sus
derivados. Vol 16. pp. 3-43. Simposios de la Sociedad Bioquímica
- Engelman, DM. Steitz, TA. Goldman, A. (1986). Identificación no polar hélices
de transbicapa en secuencias de aminoácidos de membrana. Vol 15. pp.
321-353. Revista Química Biofísica
- Paniagua R. Nistal [Link] P. Álvarez-Uria M. Fraile B. Anadón R. Saéz F.
(2017). Membranas celulares. Biología celular y molecular. Cuarta edición
- Walton, HE. (1970). Principios y métodos de análisis químico. México: Reverté
- [Link]. Permeabilidad celular: difusión y transporte. (n.d.). [Link].
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