Identificación de especies de Aspergillus
[Link] métodos microbiológicos y
espectrometría de masas
Diagnóstico de Aspergilosis
• Genero Apergillus, de distribución universal, lo encontramos en suelo, aire, plantas, materia
orgánica en descomposición etc. son inhalados constantemente y la inmunidad innata es
suficiente para eliminarlos.
• Los cuadros clínicos: Aspergilosis invasora, Aspergilosis cavidades y aspergilosis
brocopulmonar, siendo la aspergilosis invasora es una enfermedad grave que afecta a
pacientes inmunocomprometidos, provocando mortalidad elevada, hasta 90%
• Si bien existen más de 400 especies de Aspergillus
• El Aspergillus fumigatus es la mayor frecuencia se relaciona con aspergilosis pulmonar, ya que
tiene conidios de pequeño tamaño (2-6 μm) que pueden sobrepasar con mayor facilidad el
epitelio ciliado y llegar a los alvéolos, mientras que el Aspergillus flavus, que tiene conidios de
mayor tamaño, se vincula más frecuentemente con patología de los senos paranasales.
Diagnóstico de Aspergilosis
Las especies del género Aspergillus son ascomicetes
En el año 2020 , en la revista Studies in Mycology 95: 5-69. 202 J. Houbraken, et
col, se realizó un estudio de los géneros Aspergillus, Penicillium, Taralomyces
entre otros
Se hizo una clasificación basándose en estudios filogenéticos de 9 genes
diferentes.
Del cual se propone para en género Aspergillus 27 secciones y 447 especies
Diagnóstico de Aspergilosis
Muestras biológicas
• Sangre
• Lavado broncoalveolar
• Biopsias
• Suero
Las biopsias, una parte transportar en solución salina estéril para el
estudio microbiológico y la otra en formol al 10% para el estudio
histopatológico
Las muestras biológicas para el estudio microbiológico se deben
procesar de inmediato
Diagnóstico:
Diagnóstico Microbiológico
Muestra biológica
Examen directo KOH 10% Cultivo: sembrar en Agar Sabouraud Glucosado,
Agar Infusión Cerebro corazón
Hifas hialina
septadas
dicotómicas Evaluación periódica
Forman ángulo
de 45ºC Observar las características
macroscópica y microscópicas
40x
Se caracteriza con ayuda de las
10x claves taxonómicas
Evaluación Macroscópica
Consideraciones a tener encueta :
Aspecto de la colonia
Color anverso
Color reverso
Velocidad de crecimiento
Pigmentos
Pruebas de identificación : Evaluación Microscópica
Compuesto por
Célula pie
Estípite o conidióforo
Vesícula o cabezuela
Métula
Fiálide
Conidios
Algunas presenta célula de Hülle
Las cabezas conidiales con cuatro
formas básicas: globosa, radiada,
columnar o claviforme.
Pruebas de identificación : Evaluación Microscópica
(C)
Vesícula o cabezuela:
(A)Globosa
(B)Hemisferica
(C)Columnar
(A)Globosa
(D)Calviforme Aspergillus fumigatus Aspergillus lentullus
(D)
(B)
Aspergillus clavatus
Aspergillus flavus
Pruebas de identificación :
Evaluación Microscópica
Estípite o conidióforo
Conidióforo rugoso
Conidióforo liso
Fiálide.-Célula conidiogenica
Métula.-Estructura unicelular que
se encuentra entre la fiálide y la
vesícula
Pruebas de identificación :
Evaluación Microscópica
Células de Hülle:
Son estructuras
especilizadas que se pueden
observar en diferentes
especies fúngicas.
Presentan paredes gruesa
Aspergillus nidulans
Aspergillus fumigatus
• Las colonias de crecimiento rápido
• Al inicio algodonosas que rápidamente
adquieren apariencia pulverulenta
• Color azul verdoso o grisáceo. Conidias Pared rugosa o lisa
• Cabezuelas columnares típicas.
• Los conidióforos cortos, de pared lisa
• Las fialides, uniseriadas, cubren dos
tercios superiores de de la vesicula.
• Las conidias de forma globosa a
subglobosa, de pared rugosa
(equinulada)de color verde,
Aspergillus flavus
• Colonias al inicio presenta micelio blanco
algodonoso de crecimiento rápido que en poco
tiempo adquiere la coloración verde-amarillenta
y una textura pulverulenta gruesa.
• Cabezas conidiales uniseriadas y biseriadas,
principalmente radiales
• Estipes normalmente rugosos, hialinos o de
color marrón pálido.
• Vesícula esférica;
• Métulas ocupan toda la superficie de la vesícula.
• Conidios globosos o elipsoidales, lisos o
ligeramente rugosos.
Aspergillus terreus
• Colonias de color marrón canela o marrón
amarillento, reverso amarillo, dorado o
marrón.
• Colonia aterciopelada, lanosa en la zona
central, plana o con surcos radiales.
• Cabezas conidiales biseriadas, en columna
• Estipes de pared lisa, hialinos.
• Vesículas de forma variable, esférica o
subglobosa
• Métulas ocupando la mitad o dos tercios
de la vesícula.
• Conidios lisos, globosos o subglobosos.
Aspergillus niger
• Las colonias de rápido crecimiento, al inicio
blanco luego de color negro o marrón muy
oscuro; reverso incoloro a amarillo
• Cabezuelas son grandes, de color café
oscuro, biseriadas con métula y fiálides de
color marrón oscuro que cubren toda la
vesícula dando la forma radiada típica.
• Los conidióforos largos, pared lisa y oscura.
• Las conidias son globosas a subglobosas,
de color marrón oscuro a negro y de
paredes rugosas con crestas irregulares y
protuberancias
Aspergillus section fumigati
• Agrupa a 59 especies como:
A. fumigatus, A. lentulus, A.
udagawae, A. felis, A. hiratsukae,
[Link], [Link].
• Es termófila A. fumigatus crece a 50°C.
• CIM elevada anphotericina y azoles
• Colonias de color verde azulado oscura
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula de clava ancha
• Cabeza uniserida columnares
• Conidio con rufgocidad fina, hialinas
subesféricos
Aspergillus section fumigati
• Agrupa a 59 especies como:
A. fumigatus, A. lentulus, A.
udagawae, A. felis, A. hiratsukae,
[Link], [Link].
• Es termófila A. fumigatus crece a 50°C.
• CIM elevada anphotericina y azoles
• Colonias de color verde azulado oscura
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula de clava ancha
• Cabeza uniserida columnares
• Conidio con rufgocidad fina, hialinas
subesféricos
Aspergillus section flavi
• Agrupa a 35 especies como: A.
flavus, A. parasiticus, A. tamarii, A.
nominus, A orizae A. sojae, A.
pseudonomio.
• Colonias pulvurulentas al inicio las
colonias son blancas y luego verde
amarillentas.
• Reverso incoloro a amarillo a
marrón rojizo
• Estípite hialino con paredes
finamente rugosa.
• Cabeza aspergilar uniseriada o
biseriada
• Conidios subesféricos finamente
equinulada
Aspergillus section nigri
• Agrupa a 29 especies como: A.
niger, , A. carbonarius, A
brasiliensis, A. tubingensis, A.
japonicus
• Colonias de color de marron a
negro
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula subesferica
• Cabeza biserida radiada
• Conidios subesfericos
pigmentados finamente
ornamentados
Aspergillus section terrei
• Agrupa a 17 especies como: A.
terreus, A. alabamensis,
[Link] A. hortae, A.
pseudoterreus.
• Colonias de color de marrón
amarillento a canela
• Estípite hialina de pared lisa
• Cabeza biserida columnares
• Conidio hialinos esféricos a
elipsoidales
• CIM elevada para anphotericina
B y algunos azoles
• Prepara el gel de agarosa
• Repartir aproximadamente 3 mL en lámina portaobjeto.
• Realizar pozos equidistantes con respecto al pozo central y
añadir 8 mL de cada insumo, según diagrama.
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
Es una técnica de
determinación estructural
que permite estudiar la
distribución de las
moléculas de una sustancia
en función de su masa
Consta de 3 elementos
• Fue desarrollada en 1987 por Koichi ■ La fuente de ionización, laser ultravioleta
Tanaka que produce la desorción e ionización
■ El analizador, separa los iones
procedentes de la muestra en relación
con su ratio masa/ carga.
■ El detector, recoge la información del
tiempo de vuelo de un ion al alcanzarlo y
lo representa en una grafica.
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
Identificación directa
(levaduras) y método
de extracción
proteica (hongos
filamentosos)
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
PROPUESTA DE ESTUDIO MOLECULAR
PARA IDENTIFICACIÓN DE Aspergillus sp y Aspergillus fumigatus
GRACIAS-
email: furcia@[Link]