NORMA TÉCNICA NTC
COLOMBIANA 4449
1998-08-26
CALIDAD DEL AGUA.
EVALUACIÓN DE LA BIODEGRADABILIDAD
AÉROBICA “ÚLTIMA” DE COMPUESTOS
ORGÁNICOS EN UN MEDIO ACUOSO. MÉTODO DE
ANÁLISIS DEL DIÓXIDO DE CARBONO LIBERADO
E: WATER QUALITY. EVALUATION IN AN AQUEOUS MEDIUM
OF THE “ULTIMATE” AEROBIC BIODEGRADABILITY OF
ORGANIC COMPOUNDS. METHOD BY ANALYSIS OF
RELEASE CARBON DIOXIDE.
CORRESPONDENCIA: esta norma es equivalente (EQV) con
la ISO 9439: 1992
DESCRIPTORES: calidad de agua; biodegradabilidad;
método de ensayo; medio ambiente.
I.C.S.: 13.060.01
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435
Prohibida su reproducción
PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional
de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica
está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.
La NTC 4449 fue ratificada por el Consejo Directivo de1998-08-26.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través
de su participación en el Comité Técnico 352302 jabones y detergentes en Consulta Pública.
AQUA VITA S.A. FUNDACIÓN POLITÉCNICO GRAN
ALPINA COLOMBIANO
ANALJA HADA S.A.
ANDI INEXTRA
ANFALIT INGENIERÍA ESTUDIOS CONTROL
AMBIENCOL INGENIEROS LIMITADA
AZUL K INGENIESA
CARTÓN COLOMBIA INGEOMINAS
CARVAJAL INGENIERÍA DE AGUA Y DESECHOS
CERVECERÍA LEONA LTDA
CERVECERÍA UNIÓN INTEGRAL S.A.
CENICAÑA ISAGEN S.A. ESP
CEGA ILAM LTDA
CODENSA INVIMA
CONSEJO COLOMBIANO DE LA JOYA
SEGURIDAD LARKING LTDA
COLINAGRO MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE
COLGATE PALMOLIVE MINISTERIO DE SALUD
CORPORACIÓN UNIVERSITARIA MINISTERIO DE DESARROLLO
AUTÓNOMA DE OCCIDENTE NESTLÉ DE COLOMBIA
DAMA PRODUCTOS BEISBOL
DERSA SECRETARÍA DEL MEDIO AMBIENTE
ECOPETROL-ICP SIDERÚRGICA DE BOYACÁ
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ
SOCIEDAD DE ACUEDUCTO UNIVERSIDAD DE CALDAS
ALCANTARILLADO Y ASEO DE UNIVERSIDAD LIBRE
BARRANQUILLA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
TECNOLOGÍA INGENIERÍA Y MEDIO UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
AMBIENTE UNIÓN CARIBE
TEFCO LTDA VARELA S.A.
UNILEVER ANDINA
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
CALIDAD DEL AGUA.
EVALUACIÓN DE LA BIODEGRADABILIDAD AÉRÓBICA “ÚLTIMA”
DE COMPUESTOS ORGÁNICOS EN UN MEDIO ACUOSO. MÉTODO
DE ANÁLISIS DEL DIÓXIDO DE CARBONO LIBERADO
1. OBJETO
La presente norma especifica un método de evaluación de la biodegradabilidad última de los
compuestos orgánicos en un medio acuoso, mediante el análisis del dióxido de carbono
liberado, a una concentración dada de microorganismos aeróbicos.
El método se aplica a compuestos orgánicos que son:
a) Solubles en las condiciones de ensayo.
b) Insolubles en las condiciones de ensayo, en cuyo caso se pueden necesitar medidas
especiales para obtener una buena dispersión del compuesto.
c) No volátiles o con una presión de vapor insignificante bajo las condiciones del ensayo.
d) No inhibidores de los microorganismos de ensayo en la concentración escogida para el
ensayo. La presencia de un efecto inhibitorio se puede determinar como se especifica
en el numeral 8.3, o usando cualquier otro método para determinar el efecto inhibitorio
de un compuesto sobre las bacterias (véase, por ejemplo, la norma ISO 8192).
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Las siguientes normas contienen disposiciones que, a través de su referencia en este texto,
constituyen disposiciones de la presente norma. En el momento de su publicación eran válidas
las ediciones indicadas. Todas las normas están sujetas a revisión y se recomienda a las
partes que realizan acuerdos con base en esta norma, estudiar la posibilidad de aplicar las
ediciones más recientes de las normas indicadas en seguida.
ISO 7827: 1984, Water Quality - Evaluation in an Aqueous Medium of the “Ultimate” Aerobic
Biodegradability of Organic Compounds - Method by Analysis of Dissolved Organic Carbon
(DOC).
ISO 8192: 1986, Water Quality- Test for Inhibition of Oxygen Consumption by Activated Sludge.
1
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
3. DEFINICIONES
Para los propósitos de esta norma se aplican las siguientes definiciones:
3.1 Biodegradación última: nivel de degradación alcanzado cuando el compuesto de ensayo
es utilizado totalmente por los microorganismos, dando como resultado la producción de
dióxido de carbono, agua, sales minerales y nuevos componentes celulares microbianos
(biomasa).
3.2 Sólidos suspendidos (de un lodo activado): sólidos removidos mediante filtración o
centrifugado, de un volumen conocido de lodo, bajo condiciones especificadas, y para el
propósito de esta norma, secado a 100°C aproximadamente.
3.3 Preexposición (o preadaptación): la preincubación de un inóculo en presencia del
compuesto de ensayo, con el fin de incrementar su capacidad para degradarlo.
3.4 Preacondicionamiento (o preaclimatización): la preincubación de un inóculo bajo las
condiciones del ensayo y en ausencia del compuesto de ensayo, para mejorar el desarrollo del
ensayo.
4. PRINCIPIO
Determinación de la biodegradación de los compuestos orgánicos por microorganismos
aeróbicos, usando un medio de ensayo.
El compuesto orgánico es la única fuente de carbono y energía en el medio. El nivel de
biodegradación se determina indirectamente por la medición del dióxido de carbono liberado
durante el tiempo del ensayo (generalmente 28 d). La concentración de los compuestos usados
es tal que el contenido de carbono orgánico inicial del medio normalmente se encuentra entre
10 mg/l y 40 mg/l. Si se requiere, se pueden usar más de 40 mg/l para obtener información
adicional.
Para compuestos suficientemente solubles en agua, se puede determinar la remoción del
dióxido de carbono disuelto al final del ensayo.
5. AMBIENTE DE ENSAYO
La incubación debe ocurrir en la oscuridad o en luz difusa, en una cubierta que se mantenga a
una temperatura constante (al menos dentro de ± 1 °C) entre 20 °C y 25 °C y que se encuentre
libre de vapores tóxicos.
6. REACTIVOS
Se deben usar solamente reactivos de grado analítico reconocido.
6.1 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA
Debe contener menos del 10 % del contenido inicial de carbono orgánico disuelto introducido
por el compuesto orgánico que se va a ensayar.
2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
6.2 MEDIO DE ENSAYO
6.2.1 Composición
[Link] Solución a)
Fosfato diácido de potasio anhidro (KH2PO4) 8,5 g
Fosfato ácido de potasio anhidro (K2HPO4) 21,75 g
Fosfato ácido de sodio dihidratado (Na2HPO4.2H2O) 33,4 g
Cloruro de amonio (NH4Cl) 0,5 g
Agua (véase el numeral 6.1) en cantidad necesaria para completar 1 000 ml.
El pH de la solución debe ser de 7,4 aproximadamente.
[Link] Solución b)
Se disuelven 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4.7H2O) en 1 000 ml de
agua (véase el numeral 6.1).
[Link] Solución c)
Se disuelven 27,5 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) ó 36,4 g de cloruro de calcio
dihidratado (CaCl2.2H2O) en 1 000 ml de agua (véase el numeral 6.1).
[Link] Solución d)
Se disuelven 0,25 g de cloruro férrico hexahidratado (FeCl3.6H2O) en 1 000 ml de agua (véase
el numeral 6.1). Esta solución se prepara justo antes de usarla.
Nota 1. No es necesario preparar esta solución justo antes de usarla si se agrega una gota de ácido clorhídrico
concentrado (HCl) ó 0,4 g/l de ácido etilendiamintetraacético (EDTA).
6.2.2 Preparación del medio de ensayo
Para 1 l del medio de ensayo, justo antes de usarlo, se agregan 800 ml de agua (véase el
numeral 6.1):
- 10 ml de la solución a)
- luego 1 ml de cada solución, b), c) y d) (para evitar la formación de turbiedad en
el medio final).
Finalmente, se completa con agua (véase el numeral 6.1) hasta 1 000 ml.
3
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
7. EQUIPO
Es necesario asegurarse de que todo el material de vidrio está completamente limpio y, en
particular, libre de materia orgánica o tóxica.
El equipo de laboratorio usual, y
7.1 RECIPIENTES DE VIDRIO
Erlenmeyer o recipientes que permitan la purga con gas y agitación mecánica (véase el
numeral 8.3).
7.2 SISTEMA DE PRODUCCIÓN DE AIRE LIBRE DE CO2
Con capacidad para alimentar a una tasa de flujo entre 50 ml/min y 100 ml/min cada balón
(mantenido constante dentro del 10 %), véase el ejemplo del ensamble en el Anexo A.
Comprobar la ausencia del dióxido de carbono, en el sistema de producción de aire.
7.3 EQUIPO PARA LA DETERMINACIÓN DE DIÓXIDO DE CARBONO
Un analizador de dióxido de carbono o dispositivo para determinación por titulación después de
absorción completa en una solución básica (véase el principio de un sistema de ensayo con
dióxido de carbono liberado, en el Anexo A).
7.4 DISPOSITIVO PARA FILTRACIÓN
Con filtros de membrana de porosidad apropiada (diámetro de abertura nominal entre 0,2 µm y
0,45 µm) que adsorben los compuestos orgánicos o liberan carbono orgánico a un grado
mínimo.
7.5 INSTRUMENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE
CARBONO ORGÁNICO DISUELTO
7.6 CENTRÍFUGA
7.7 pH-metro
8. PROCEDIMIENTO
8.1 PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES DE ENSAYO
8.1.1 Solución del compuesto de ensayo
Se prepara una solución madre del compuesto de ensayo en el medio de ensayo (véase el
numeral 6.2). Se diluye una cantidad adecuada de esta solución en el medio de ensayo
previamente aireado (véase el numeral 8.3) para obtener una concentración final de carbono
orgánico entre 10 mg/l y 40 mg/l.
Nota 2. Los compuestos de baja solubilidad en agua se pueden agregar directamente en forma sólida o líquida al
medio, en el balón apropiado.
4
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
8.1.2 Solución del compuesto de referencia
Se prepara una solución madre del compuesto de referencia (un compuesto orgánico de
biodegradabilidad conocida tal como acetato de sodio, benzoato de sodio, anilina) en el medio
de ensayo (véase el numeral 6.2), en la misma forma que en el numeral 8.1.1, con el fin de
obtener una concentración final de carbono orgánico de 20 mg/l.
8.1.3 Solución para verificar la inhibición.
Si es necesario, se prepara en la solución que contiene, en el medio de ensayo (véase el
numeral 6.2), el compuesto de ensayo y el compuesto de referencia en las concentraciones
respectivas usadas para la preparación de las soluciones de los numerales 8.1.1 y 8.1.2.
8.2 PREPARACIÓN DEL INÓCULO
El inóculo se prepara usando las siguientes fuentes, o usando una mezcla de ellas para
obtener una población microbiana que ofrezca suficiente actividad de degradación. Esta
actividad se verifica mediante el compuesto de referencia (véase el numeral 8.1.2).
La producción de dióxido de carbono de la solución blanco se recomienda que esté en el
intervalo de 30 mg/l a 40 mg/l pero máximo en 70 mg/l. Para reducir la influencia del blanco,
puede ser útil preacondicionar los lodos aireándolos durante una semana antes de usarlos
(véase el numeral 10, b).
La cantidad de carbono orgánico disuelto proporcionado por el inóculo debe ser menor del 10%
de la concentración inicial de carbono orgánico introducido por el compuesto de ensayo.
Nota 3. En algunas circunstancias se pueden usar inóculos preexpuestos, siempre y cuando se establezca
claramente en los resultados de ensayo (por ejemplo: porcentaje de biodegradación = x % usando inóculos
preexpuestos) y el método de preexposición sea detallado, en el informe de ensayo,
Los inóculos preexpuestos se pueden obtener de los ensayos de biodegradación en laboratorio
realizados bajo una variedad de condiciones (por ejemplo: ensayos Zahn-Wellens y SCAS) o
de muestras recolectadas de sitios en donde existen condiciones ambientales pertinentes (por
ejemplo: plantas de tratamiento que trabajan con compuestos similares, áreas contaminadas,
etc.).
8.2.1 Inóculos de un efluente secundario
Se toma una muestra de un efluente secundario recolectado de una planta de tratamiento que
trabaja básicamente con aguas residuales domésticas. Esta muestra se debe mantener en
condiciones aeróbicas y se debe usar el mismo día de su recolección.
A partir de esta muestra, se prepara un inóculo como sigue:
- Se deja que la muestra de efluente se asiente durante 1 h.
5
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
- Se toma un volumen adecuado1 de sobrenadante, que se va a usar como
inóculo para el ensayo realizado ese día.
8.2.2 Inóculo de una planta de lodos activados
Se toma un volumen adecuado1 de inóculo, por ejemplo, una muestra de lodos activados del
tanque de aireación de una planta de tratamiento de aguas residuales, preferiblemente
domésticas.
Se mezcla bien, se mantiene bajo condiciones aeróbicas y se usa el mismo día de la
recolección.
Justo antes de su uso, se determina la concentración de los sólidos suspendidos1. Si es
necesario, se concentran los lodos por asentamiento, de manera que el volumen de los lodos
agregados para obtener 30 g de materia seca por litro sea mínimo.
8.2.3 Inóculo de agua superficial o de un sistema de efluentes de una estación de tratamiento
doméstico.
Se toma una muestra de agua superficial apropiada.
Esta muestra, mantenida bajo condiciones aeróbicas, se debe usar el mismo día de la
preparación.
Se toma un volumen adecuado (véase la Nota 1 del numeral 8.2.2) de inóculo de esta muestra.
Si es necesario, el inóculo se puede concentrar por filtración o centrifugado.
8.3 ENSAYO
Se debe contar con un número de recipientes (véase el numeral 7.1) de manera que en el
ensayo se incluyan como mínimo los siguientes:
a) Recipientes para el compuesto de ensayo (símbolo FT) .
b) Dos recipientes para el ensayo de blancos (símbolo FB)
c) Un recipiente para verificar la actividad del inóculo (símbolo FC).
Y si es necesario,
1
Volumen “adecuado” significa:
- suficiente para obtener una población que ofrece suficiente actividad de biodegradación
- que degrada el (los) compuesto(s) de referencia en el porcentaje estipulado
3 5
- que produce entre 10 y 10 de células activas/ml
- la producción de CO2 en los blancos de control no debe ser mayor de 70 mg/l (normalmente 30
mg/l a 40 mg/l)
- no es superior al equivalente de 30 mg de sólidos de lodos activados por litro en la mezcla de
reacción final
6
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
d) Un recipiente para examinar que el producto no ha sufrido degradación abiótica
(símbolo FS).
e) Un recipiente para examinar cualquier efecto inhibidor del compuesto (símbolo Fl).
Se agregan las cantidades adecuadas del medio de ensayo (véase el numeral 6.2) y el inóculo
(véase el numeral 8.2) a cada recipiente, como se indica en la Tabla 1.
Se mezcla el contenido en los recipientes y se conectan estos al sistema de producción de aire
libre de CO2 (véase el numeral 7.3 y el Anexo A).
Se airean los recipientes con aire libre de CO2 durante 24 h para purgar el sistema de dióxido
de carbono. Después del período de aireación se introduce una solución de Ba(OH)2 ó una
solución de NaOH (véase el Anexo A) dentro de los recipientes de absorción de CO2 y se
conectan en serie a la salida de cada recipiente, o se conectan al sistema de medición de CO2.
Se adicionan las soluciones madres del compuesto de ensayo (numeral 8.1.1) y el compuesto
de referencia (véase el numeral 8.1.2) a los recipientes respectivos de acuerdo con la Tabla 1 y
se incuba a una temperatura constante (dentro de ± 1 °C) entre 20 °C y 25 °C durante 28 d.
Se verifica que la tasa de flujo de aire sea la misma en todos los recipientes y que esté entre 50 ml/min
y 100 ml/min.
Se mide la cantidad de dióxido de carbono liberada de cada recipiente a intervalos de tiempo
intermedios (por ejemplo: 1 d, 7 d, 14 d, 21 d, 28 d). Si es necesario, se mide a intervalos más
cortos y/o durante un período de tiempo superior a 28 d.
Tabla 1. Distribución final del medio de ensayo y el inóculo
Soluciones
1)
Medio de Solución del Solución del Solución de Inóculo
Erlenmeyer ensayo compuesto de compuesto de verificación de (véase el
(véase el ensayo (véase referencia inhibición numeral 8.2)
numeral 6.2) el numeral (véase el (véase el
8.1.1) numeral 8.1.2) numera 8.1.3)
Litros
Ensayo FT 0 2,5 0 0 n
Ensayo FT 0 2,5 0 0 n
Blanco FB 2,5 0 0 0 n
Blanco FB 2,5 0 0 0 n
Verificación del inóculo FC
(opcional) 0 0 2,5 0 n
Verificación de degradación
2)
abiótica Fs 0 2,5 0 0 0
Verificación de la inhibición
(opcional) Fl 0 0 0 2,5 n
1) El volumen del inóculo (n ml) se recomienda que sea compatible con el numeral de validez para el blanco (véase
el literal 10, numeral b) y para obtener una población microbiana suficiente (véase el numeral 8.2).
2) El volumen de la solución de ensayo (véase el numeral 8.1.1) en el vaso de precipitados Fs se debe esterilizar
mediante adición de 1 ml de solución que contiene 10 g/l de cloruro de mercurio (HgCl2) u otro compuesto
tóxico capaz de evitar actividad microbiana.
7
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
En el Anexo B se describe un método de titulación para la determinación del CO2 cuando se
usa el dispositivo presentado en el Anexo A.
Si se obtiene un nivel constante de degradación antes de finalizar el período de 28 d, el ensayo
se considera completo.
El último día del ensayo se acidifican todas los recipientes con 1 ml de ácido clorhídrico
concentrado para descomponer los carbonatos y bicarbonatos. Se continúa la aireación
durante 24 h y luego se mide la cantidad de dióxido de carbono liberado de cada recipiente.
Nota 4. Ya que la capacidad reguladora del medio es relativamente alta, es esencial acidificar el medio de ensayo
en la fecha del muestreo final para asegurar la remoción de todo el dióxido de carbono disuelto. Si la remoción del
carbono orgánico disuelto (COD) se mide para suministrar información adicional sobre la biodegradación, se toma
una muestra de cada recipiente el día 0 y al final del ensayo (antes de acidificar todos los recipientes) y se
determina el COD.
9. CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
9.1 CÁLCULOS
9.1.1 Cantidad de dióxido de carbono resultante de la degradación teórica del
compuesto
La cantidad teórica de dióxido de carbono (ThCO2), expresada en miligramos, se obtiene
mediante la fórmula
44
ThCO 2 =C xV x
12
Donde:
C = es la concentración del compuesto de ensayo en la solución de ensayo,
medida o calculada a partir de la concentración obtenida en la solución
madre del compuesto de ensayo (numeral 8.1.1) teniendo en cuenta la
dilución, expresada en miligramos de carbón orgánico por litro.
V = es el volumen de la solución de ensayo, expresado en litros.
44 y 12 = son las masas molar y atómica relativas del dióxido de carbono y del
carbono, respectivamente.
9.1.2 Porcentaje de degradación
Se determina el porcentaje de degradación (Dt) para los recipientes FT , el recipiente para
verificación de inóculo FC y el recipiente de verificación de inhibición Fl (si se incluyó), de la
cantidad de CO2 liberado durante cada intervalo, usando la siguiente fórmula:
8
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
(CO 2 )T −(CO 2 ) B
DT = x 100
ThCO 2
Donde:
(CO2)T = es el promedio, expresado en miligramos, de la cantidad total de
dióxido de carbono liberada en los recipientes FT entre el
comienzo del ensayo y el tiempo t.
(CO2)B = es el promedio, expresado en miligramos, de la cantidad total de
dióxido de carbono liberada en los vasos de precipitados FB entre
el comienzo del ensayo y el tiempo t.
ThCO2 = es la cantidad teórica de dióxido de carbono, expresada en
miligramos, determinada de acuerdo con el numeral 9.1.1.
Notas:
5) La degradación abiótica (recipiente Fs) se calcula de la misma manera pero sin considerar (CO2)B.
6) La determinación del carbono orgánico disuelto se puede usar para determinar el porcentaje final de
degradación Dt (véase la norma IS0 7827).
9.2 EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Se organiza una tabla de degradación porcentual para cada intervalo de determinación y cada
recipiente. Si se obtienen resultados comparables para los duplicados de los recipientes de
ensayo, se traza una curva de degradación media en función del tiempo (véase el ejemplo del
Anexo C).
Se registra la cantidad de dióxido de carbono que se puede liberar en los recipientes para
verificar la degradación abiótica (Fs) y para verificar cualquier efecto inhibitorio del compuesto
(Fl), si los recipientes se incluyeron en el ensayo.
10. VALIDEZ DE LOS RESULTADOS
El ensayo se considera válido si:
a) El porcentaje de degradación en el recipiente FC para verificar la actividad del
inóculo es mayor del 50 % en el día 14.
b) La cantidad de CO2 que se obtuvo de la solución blanco durante el ensayo es
insignificante: la evolución de total de CO2 en la solución blanco al final del
ensayo se recomienda que esté en el intervalo de 30 mg/l a 40 mg/l y que no
exceda 70 mg/l.
9
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
Si el recipiente F1 (verificación de inhibición) se incluyó en el ensayo, podemos suponer que el
compuesto de ensayo es inhibitorio si el porcentaje de degradación en este vaso es menor del
25 % en 28 d. En este caso, se repiten las series de ensayo con concentraciones más bajas del
material de ensayo.
11. INFORME DE ENSAYO
El informe de ensayo debe brindar toda la información pertinente, particularmente la siguiente:
a) una referencia a la presente norma.
b) Cualquier información necesaria para identificar el compuesto sometido a
ensayo.
c) El nombre y concentración del compuesto de referencia usado.
d) Todos los resultados obtenidos (en forma de tabla) y la curva de degradación,
incluyendo los resultados obtenidos de los ensayos de verificación de la
actividad del inóculo (recipientes FC), los ensayos de verificación de inhibición
(recipientes Fl) y los ensayos de verificación de degradación abiótica (recipientes
Fs), si se incluyeron.
e) Las principales características del analizador de carbono empleado.
f) Las principales características del dispositivo usado para determinar el dióxido
de carbono.
g) Las razones para cualquier rechazo de los resultados de ensayo (véase el
numeral 10).
h) cualquier preacondicionamiento o preexposición del inóculo.
l) La concentración del compuesto de ensayo usado y el contenido de carbono
orgánico disuelto de esta concentración.
j) La fuente, los caracteres y la cantidad de inóculo usado.
k) Cualquier otro hecho pertinente al procedimiento seguido.
DOCUMENTO DE REFERENCIA
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Water Quality - Evaluation in an
Aqueous Medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of Organic Compounds - Method by
Analysis of Released Carbon Dioxide. Geneve, ISO: 1992. 9 p. (ISO Technical Corrigendum 9439).
10
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
Anexo A (Informativo)
Principio de un sistema de ensayo con liberación de dióxido de carbono
Figura A.1
El aire comprimido o aire sintético libre de dióxido de carbono se suministra a una presión baja
constante al sistema de ensayo.
El dióxido de carbono en el aire se remueve pasándolo a través de una solución de hidróxido
de sodio. Para indicar la ausencia total de dióxido de carbono se usa una segunda trampa que
contiene solución de hidróxido de bario.
El aire se usa entonces para airear la mezcla de ensayo en los recipientes. Si ocurre
biodegradación, se produce dióxido de carbono y se absorbe en una segunda trampa de
dióxido de carbono que contiene hidróxido de sodio o hidróxido de bario. En el primer caso, el
dióxido de carbono se determina como carbono inorgánico disuelto en un analizador adecuado.
En el segundo caso, el dióxido de carbono se analiza por un método de titulación como se
describe en el Anexo B y una serie de tres trampas, si es necesario.
11
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
Anexo B (Informativo)
Método de titulación para la determinación del dióxido de carbono liberado
B.1 INTRODUCCIÓN
El método de titulación para la determinación del dióxido de carbono liberado se da como
ejemplo. Se pueden usar otros métodos, por ejemplo, absorción de CO2 en NaOH y
determinación del carbono inorgánico disuelto (DIC).
B.2 OBJETO
En este Anexo se describe un método de titulación para la determinación del dióxido de
carbono liberado que queda atrapado con hidróxido de bario (véase el principio del ensamble
en el Anexo A).
B.3 PRINCIPIO
El CO2 producido reacciona con el hidróxido de bario [ Ba(OH)2] y se precipita como carbonato
de bario (BaCO3). La cantidad de CO2 producida se determina mediante titulación del Ba(OH)2
restante, con HCl.
B.4 APARATO
Equipo usual de laboratorio.
B.5 REACTIVOS
B.5.1 Hidróxido de bario, solución de 0,012 5 mol/l .
B.5.2 Ácido clorhídrico, solución 0,05 mol/l.
B.5.3 Fenolftaleína, indicador.
B.6 PROCEDIMIENTO
Al comienzo del ensayo, se vierten 100 ml de Ba(OH)2 (véase el numeral B.5.1) en cada uno
de los absorbedores de CO2 y se conectan en una serie de tres a la salida de aire de cada
botella de ensayo.
Periodicamente y antes de que ocurra precipitación del BaCO3 en el segundo absorbedor, se
remueve el absorbedor de CO2 más cercano al vaso de precipitados de ensayo para titulación
(véase el numeral 8.3). Se mueven los dos absorbedores restantes a una posición más
cercana al recipiente de ensayo y se coloca al final de la serie un nuevo absorbedor que
contenga 100 ml de Ba(OH)2 (véase el numeral B.5.1).
Se titula inmediatamente el Ba(OH)2 restante con HCl (véase el numeral B.5.2) usando
fenolftaleína como indicador (véase el numeral B.5.3).
12
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
B.7 CÁLCULOS
La cantidad de CO2 atrapado en el absorbedor y removido mediante titulación se da por la
fórmula
m = [100 x 2 x c [Ba(OH)2 ] - V x c (HCl)] x 22
Donde:
m = es la masa, en miligramos, de CO2 atrapado en el absorbedor
V = es el volumen, en mililitros, de HCl (véase el numeral B.5.2) usado para la
titulación
c [Ba(OH)2 ] es la concentración, en moles por litro, de solución de hidróxido de
bario
c(HCl) = es la concentración, en moles por litro, de la solución de ácido clorhídrico.
Cuando c [Ba(OH)2 ] = 0,012 5 mol/l, c(HCl) = 0,05 mol/l, entonces: m = 1,1 (100 - V)
13
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4449
Anexo C (Informativo)
Ensayo de evolución del dióxido de carbono
Figura C.1. Ensayo de evolución del dióxido de carbono. Curva de biodegradación
14