Qca. Orgánica II- Qca.
Biomoléculas 2018
Trabajo Práctico de Laboratorio 1:
Extracción y purificación de cafeína de té
Tema: Estructura y química de compuestos heterocíclicos
Objetivo: Extraer, purificar e identificar un alcaloide de a partir de material vegetal
Introducción
La purina es un compuesto orgánico de tipo heterociclo, que también puede clasificarse
como una base nitrogenada. Su estructura está compuesta por dos anillos fusionados, uno de seis
átomos tipo pirimidina y el otro de cinco átomos tipo imidazol. Tres de los cuatro átomos de
nitrógeno presentes en la purina presentan carácter básico. Esta molécula puede presentar
equilibrio tautómerico.
A través del análisis del núcleo de purina por teoría de la resonancia es posible observar que las
posiciones 2, 6 y 8 son centros con déficit de electrones, por lo que son susceptibles de
sustitución nucleófila.
De esta manera podemos justificar la existencia de gran variedad de derivados aminados e
hidroxilados, todos ampliamente distribuidos en la naturaleza (tanto en animales como en
plantas), en forma libre o combinada. Como ejemplo se destaca el ácido úrico cuya estructura
corresponde a la de 2,6,8-trihidroxipurina. Este es un producto del metabolismo de purinas que
se puede cristalizar en las articulaciones produciendo gota, o en los riñones o vías urinarias
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produciendo litiasis úrica. Otro ejemplo son las bases nitrogenadas adenina y guanina,
componentes de ácidos nucleicos y cofactores enzimáticos.
Las xantinas, son un grupo particular de bases derivadas del núcleo de la purina, cuya
estructura básica es la 2,6-dihidroxipurina. Desde el punto de vista farmacológico existen tres
xantinas de importancia: la cafeína, la teobromina y la teofilina. Las mismas xantinas metiladas,
por lo que también se les conoce como metilxantinas. Son consideradas alcaloides, ya que son
sustancias fisiológicamente activas, contienen nitrógeno y se encuentran en plantas.
La cafeína (1,3,7-trimetilxantina) se encuentra presente en hojas, semillas y frutos de té
(Camelia sinensis), café (Coffea arabica) y yerba mate (Ilex paraguariensis). Asimismo, se
encuentra en muchas otras especies vegetales. Este compuesto tiene acción estimulante sobre el
sistema nervioso central (más activa que la de teofilina y teobromina), acción diurética y
cardioestimulante ya que actúa por estímulo directo del músculo cardíaco. La dosis efectiva de
cafeína para un efecto estimulante es de 150 a 250 mg, que son los ingeridos en 1 ó 2 tazas de café
o de té. Al ingerir cafeína, esta se absorbe por vía intestinal y se distribuye muy rápidamente,
siendo su tiempo de vida media en el organismo de 3-7 horas. Es importante destacar que la cafeína
no se acumula en el torrente sanguíneo ni se almacena en el organismo. La misma es metabolizada
principalmente por hígado, el cual la transforma en mono metilxantina y ácido mono- y dimetil
úrico, que posteriormente se degradan a urea eliminándose por orina, muchas horas después de
haber consumido el alcaloide. Así, en el organismo el 80% se transforma en urea y el resto se
excreta como cafeína inalterada o parcialmente desmetilada. Algunos contenidos de cafeína en
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productos de origen vegetal son aproximadamente: granos de café: 1,5%; yerba mate: 1%; hojas de
té: 5%.
La teofilina (1,3-dimetilxantina) se encuentra principalmente en hojas de té. Tiene un
carácter ácido más fuerte que el de fenol, y la sal resultante de la combinación de 8-cloroteofilina
con benadril (difenilmetil-dimetilaminoetíl éter) se conoce comercialmente como dramamina,
droga utilizada para combatir mareos por movimientos. Se utiliza la teofilina como base libre o en
sales dobles en angina de pecho, estados asmáticos y como diurético. La teobromina (3,7-
dimetilxantina) se halla presente principalmente en el cacao (Theobroma cacao) en un 1,5-2% y en
pequeñas cantidades en el café y en el té. Tiene uso como agente diurético.
Entre estas tres N-metilxantinas hay una gran correlación entre la posición de los grupos
metilos y las acciones farmacológicas. El grupo metilo (Me) de la posición 1 tiene acción
estimulante sobre el sistema nervioso central, el Me de la posición 3 presenta acción diurética y
el Me de la posición 7 se encuentra asociado a una acción cardioestimulante. En cafeína, con
tres grupos metilo en posiciones 1, 3, 7 se dan las tres acciones.
Las infusiones realizadas a partir de hojas de té contienen principalmente los alcaloides
cafeína y teofilina. Si se realiza una extracción con una mezcla de CHCl3-MeOH, ambos se
solubilizan principalmente en la fase orgánica. Al realizar un lavado de esta última con una
solución acuosa básica (NaOH) es posible separarlos debido a que teofilina se comporta como
un ácido débil de acuerdo al siguiente esquema:
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Protocolo de laboratorio
Extracción de cafeína: En un vaso de precipitado de 200 mL colocar 5 g de hojas de té (té en
hebras), agregar 150 mL de agua y calentar a ebullición durante 10 minutos. Filtrar en caliente,
descartar las hebras de té y agregar a la solución filtrada 20 mL de solución de acetato de plomo al
10% (este último procedimiento se aplica para precipitar compuestos polifenólicos, tales como
taninos). Calentar nuevamente durante 5 minutos con agitación y dejar reposar en baño de hielo
durante 20 minutos. Centrifugar y conservar el sobrenadante.
Purificación: En ampolla de decantación extraer el sobrenadante acuosos dos veces con una
solución de CHCl3-EtOH (3:1) con volúmenes de 15 mL en cada caso. Combinar los extractos
clorofórmicos y, utilizando la misma ampolla de decantación, lavar la fase orgánica con 20 mL de
hidróxido de sodio 2 N (en caso de observar emulsiones, agregar pequeños volúmenes de etanol
sobre las paredes de la ampolla). Finalmente lavar la fase clorofórmica con 30 mL de H2Od.
Colocar la fase orgánica en un vaso de precipitado perfectamente seco, agregar Na2SO4 anhidro
(agente desecante o deshidratante), dejar reposar durante 10 minutos y filtrar. Evaporar a seco los
extractos clorofórmicos (en evaporador rotatorio) y observar las características de los cristales
obtenidos.
Identificación:
- Cromatografía en capa delgada: En una placa de sílica gel, sembrar, previa disolución en un
volumen pequeño de CHCl3, la cafeína obtenida y un patrón de cafeína. Desarrollar la placa
utilizando como solvente de corrida la mezcla CHCl3:EtOH en una proporción 9:1. Posteriormente
observar la placa al UV y revelar con solución etanólica de ácido fosfomolíbdico al 10%.
- Espectroscopia de RMN: Analice y asigne las señales de los correspondientes espectros de 1H-
RMN y 13C-RMN.
Cálculo de rendimiento: Trasvase toda la cafeína obtenida disuelta en CHCl3 a un tubo
previamente pesado. Dejar evaporar a seco el solvente y pesar la cantidad de cafeína obtenida.
Realice el cálculo de rendimiento obtenido expresándolo por cada 100 g de té.
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H -RMN (solvente CHCl3, 200 Hz)
C13-RMN (solvente CHCl3, 200 Hz)