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Determinación de CO en Sangre por Espectrofotometría

Este documento describe el procedimiento para determinar el nivel de monóxido de carbono en la sangre mediante microdifusión. El procedimiento implica colocar muestras de sangre y reactivos químicos en compartimentos separados y permitir que el CO difunda durante una hora. Luego, se miden las absorbancias de las muestras para cuantificar los niveles de CO.

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KATHERINE ANDREA IÑIGUEZ ZUÑIGA
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Determinación de CO en Sangre por Espectrofotometría

Este documento describe el procedimiento para determinar el nivel de monóxido de carbono en la sangre mediante microdifusión. El procedimiento implica colocar muestras de sangre y reactivos químicos en compartimentos separados y permitir que el CO difunda durante una hora. Luego, se miden las absorbancias de las muestras para cuantificar los niveles de CO.

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En el compartimento

Determinación de CO En el compartimento
interno (muestra): 2 ml
en sangre por micro interno (blanco): 2 ml
de solución de cloruro
difusión de solución de cloruro
de paladio (agente
de paladio.
absorbente).

1 ml de sangre.
Colocar 4 gotas de En el compartimento
1 ml de Ac. Sulfúrico
agua destilada en las externo (blanco): 1 ml
al 10% (con la tapa
esquinas de la tapa de solución de ácido
semicerrada, agente
de inicio. sulfúrico al 10%.
liberante).

Cerrar la cámara
Tiempo de difusión: Colocar en un tubo de
herméticamente y de
una hora en reposo a centrifuga la solución
forma rápida.
temperatura del compartimento
Homogenizar en
ambiente. interno.
forma circular.

En otro balón de Centrifugar para extraer


aforo añadir 0,1 mL Colocar en un balón el paladio en suspensión,
de solución de cloruro de aforo de 10 mL. tomar 0,1 ml de la
de paladio (blanco). solución sobrenadante.

A cada balón añadir 1 Establecer la


Homogenizar
mL de solución de absorbancia del blanco y
adecuadamente y
goma arábica al 0.1 % del desconocido a 500
aforar a 10 mL con
y 1 mL de solución de nm, encerando a cero
agua destilada.
IK 15%. con agua destilada.
Se debe de disponer En un tubo añadir 12
de sangre venosa ml de solución
Espectrofotometría hemolizante y luego
tomada con heparina
UV/VIS de sodio refrigerada de añadir 100 ul de
4-8 grados centígrados. sangre.

Tomar 100 ul del


Homogenizar 3 veces y
Cubrir con Parafilm. hemolizado y colocar
dejar a temperatura
Homogenizar varias 2,3 ml de solución
amiente por 10
veces. diluyente
minutos.
carboxihemoglobina.

Blanco: solución
Dejar a temperatura Leer las absorbancias a diluyente de
ambiente por 10 min. 420 y 432 nm. carboxihemoglobina.

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