Practica 3: SECRECIONES GENITALES

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
El procesamiento de la muestra de secreciones genitales para cultivo implica la realización de:
 Examen en fresco
 Coloración de Gram.
 Siembra en medios de aislamiento primario e identificación bacteriana.
Tipos de muestras a recepcionar:
 Secreción de glándula de bartholino
 Secreción cervical o endocervital
○ Las secreciones endocervicales se toman en mujeres, pero los microorganismos que se buscan en estas
secreciones son Mycoplasma, Ureaplasma y Chlamidya. Estos microorganismos también se pueden
buscar en hombres, pero no en la región endocervical, sino en muestras de orina (primer chorro). En las
mujeres también se podría buscar en la orina, pero como mayormente se les toma más secreciones
vaginales o uretrales se les pide el combo completo y se toma una vez nomas.
 Secreción vaginal
○ En secreción vaginal buscamos la presencia de Lactobacillus sp., Corynebacterium, Streptococcus
agalactiae, Gardnerella vaginalis y Candida sp. De los cuales:
 Lactobacillus sp. y Corynebacterium forman parte de la microbiota habitual y mantienen el
equilibrio de la microbiota vaginal.
 Streptococcus agalactiae, Gardnerella vaginalis y Candida sp son los principales
microorganismos que causan molestias y síntomas en los pacientes.
- Gardnerella vaginalis causa una afección llamada Vaginosis bacteriana
- Candida sp causa una afección Vaginitis o litiasis vaginal.
○ Por debajo de estos microorganismos existen otros: estreptococos, diferentes S. agalactiae
principalmente α hemolíticos, enterococos, bacilos gram negativos anaerobios, bacilos gram positivos.
PERO estos microorganismos NO causan afección, no causan síntomas ni molestias, entonces no se
buscan. Siempre crecen, pero no se les hace seguimiento.
○ Sin embargo, aislar S agalactiae en una embarazada SÍ es importante porque la embarazada no presenta
síntomas. El S. agalactiae es IMPORTANTE principalmente en embarazadas porque causa infecciones
como: Septicemia neonatal y meningitis neonatal. Pueden colonizar a los recién nacidos, por eso es
importante controlar la colonización de S. agalactiae. Lo que se hace es una profilaxis antes del parto,
no se le trata durante el embarazo, se le trata 48-72 horas antes del parto.
 Secreción uretral
○ Se puede tomar tanto en mujeres como en hombres.
○ Es más común que el pedido llegue para pacientes masculinos, pero en raras ocasiones también puede
llegar a pedirse en mujeres.
○ El fundamento de secreción uretral en mujeres no se conoce porque esta zona es sumamente colonizada
por microorganismos, entonces hay que seleccionar el tipo de microorganismo que estamos buscando,
(así como también en secreciones vaginales).
○ En mujeres molestias uretrales está más relacionada a una uretritis, una infección urinaria, puede ser
repetición o asintomática, más que una infección genital
 Muestras a partir de 4 años en adelante, en esos casos se hace una diferenciación: secreción vulvovaginal,
no se introduce el hisopo en el canal vaginal, solamente se toma de los bordes: labios superiores
(principalmente) e inferiores.

TOMA DE MUESTRA
Mayormente llega un hisopo en el medio Stuart para conservar la muestra y unos tubos con solución fisiológica.
Se le toma una muestra para el cultivo y el hisopo para examen en fresco.
Indicaciones previas
 No tomar antibióticos 48 hs antes de la toma de muestra.
 No colocarse óvulos ni tabletas vaginales.
 No tener relaciones sexuales 48 hs antes de la toma de muestra.
 Higiene de genitales externos con agua y jabón (no ducha vaginal).
 Apreciación

Informar número exacto de leucocitos observados por campo. Ej: 2-3 /c

Leucocitos Si se observa mayor a 30 células por campo se informa > 30 /c
Si se observa campo cubierto de leucocitos se informa > 100 /c

Hematíes Se informa de igual forma que los leucocitos.

Cél. Epit. Planas o Se informa de igual forma que los leucocitos.

redondas

La cantidad se informa en forma cualitativa (escasos, regular y abundantes). Ej.:

Elementos micóticos
Levaduras: abundante cantidad

Parásitos Si se observan, deben ser informados. Ej: Se observan Trichomonas vaginalis.

La identificación se basa en tres aspectos:

1. Examen macroscópico: síntomas, aspecto, olor, Ph.
 Estos aspectos los realiza el técnico generalmente.
 El técnico debe hacer preguntas al paciente con respecto a los síntomas: si tiene flujo, picazón, molestias
al orinar, dolor bajo vientre, irritación, si esta con tratamiento y anotar en una ficha de trabajo. También
anotar si está embarazada y cuantas semanas de embarazo tiene.
 Aspecto: claro, blanco, cremoso, verdoso, amarillento, abundante, escaso, nulo.
 Olor: principalmente cuando hay casos por colonización de Gardnerella en pacientes que no son tratados
o que es recurrente o que no tiene buena higiene el paciente ya presenta un olor muy fuerte a pescado
podrido. Al llegar el paciente a la toma de muestra ya se siente el olor, porque la Gardnerella causa una
secreción/flujo liquido como la orina, que es amarillento medio verdoso. Entonces la paciente tiene
constantemente la ropa interior mojada, como si fuese que todo el tiempo se está orinando. Ese ambiente
que se genera tiene un olor muy fuerte. Para sospecha de Gardnerella, en el que no se siente tanto el olor,
se realiza un test que se llama test de amina, en el que se pone se pone el hisopo con la muestra en un
tubo con KOH 10%, y uno huele y siente el olor a pescado podrido. En casos en que ya se siente el olor a
la hora de la toma de muestra no es necesario realizar esta prueba.
 Para determinar el pH se pone en varios tubos aparte con solución fisiológica al hisopo, se colocan las
tiras (igual que las de orina), se le pasa a cada tubo y se compara con la cajita para ver en qué rango de
pH se encuentra la muestra. Normalmente se encuentra a 4-4,5. A medida que aumenta este pH se
considera anormal, como si fuera que se va alcalinizando, pero en realidad no llega a alcalinización porque
a lo máximo que se llega con respecto a colonización por Gardnerella es 5-5,5 que es todavía pH acido,
pero ya es una alteración de pH.
 Todos los microorganismos de los que estamos hablando son afecciones endógenas, que están luego
dentro del organismo. Pero por un desequilibrio ya sea en el pH o en la microbiota empiezan a predominar
uno de estos por encima de los demás. Los microorganismos responsables de mantener en equilibrio ese
pH principalmente Lactobacillus sp. Cuando uno encuentra abundante cantidad de Lactobacillus se
considera una microbiota normal, debe haber una abundante cantidad para que proteja esa microbiota.
Cuando empieza a aumentar el pH de la región vaginal los Lactobacillus se refugian en las células
epiteliales planas para sobrevivir, por ello hay un desequilibrio de microbiota y empieza a colonizar otros
microorganismos.
o Factores que alteran este equilibrio de microbiota: sobrepeso, vida sedentaria, alimentación,
cambios hormonales, ropa interior, tipo de prenda que uno usa, la higiene, otros.
-Entonces, cuando hablamos de estas afecciones hablamos de nuestros propios microorganismos que
hay un desbalance entre ellos y causan estas afecciones.
Si hablamos de afecciones exógenas ya entra: Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Chlamydia,
Neisseria gonorrhoeae (hombres principalmente) Trichomonas vaginalis y todos los virus que se contraen a
través de las relaciones sexuales: VIH, sífilis…

2. Examen microscópico:
 Examen en fresco: se busca celularidad;
 Leucocitos: reacción inflamatoria: mayor cantidad mayor reacción inflamatoria.
 Células epiteliales planas (calidad …)
○ Diferente a muestras de orina, donde debe haber baja cantidad de células epiteliales planas,
porque si hay mucha cantidad significa que se tomó mal la muestra. En mujeres significa
arrastre de flujo vaginal.
○ En una muestra, principalmente de secreción vaginal, debe haber abundante cantidad de
células epiteliales planas. Cuanto mayor cantidad hayan, mejor es la muestra.
 ○ Una baja cantidad de células epiteliales planas en secreción vaginal y uretral ocurre en:
pacientes adultas, niñas, niños, hombres. Si hay mucha cantidad significa que no se tomó
bien la muestra.
 Células redondas: no es una célula normal de la microbiota ni en orina ni en secreciones genitales.
Mayormente se ve en pacientes adultas mayores y va acompañada con el desplazamiento de la
microbiota.
 Levaduras; Si veo en mi examen en fresco levaduras o pseudohifas lo más probable que se aísle
es Candida. Escasa cantida1d de bacterias porque en la candidiasis hay desplazamiento de la
microbiota.
 Estructuras nicóticas
 Parásitos: principalmente Trichomonas vaginalis
 Si veo hematíes, células redondas, informo solo si hay.
 En casos de desplazamiento de microbiota se observan cocos en duplos que podrían ser
enterococos, no se aísla mas nada que no sean enterococos o estreptococos viridans.
 FROTIS TEÑIDO POR EL MÉTODO DE GRAM
Se buscará presencia de:
 Bacilos Gram positivos largos: Lactobacillus sp
 Bacilos Gram positivos cortos Coryunebacterium sp
 Cocobacilos Gram Negativos (Gardnerella vaginalis)
 Bacilos Gram negativos pleomorficos: Gardnerella
○ Mayormente cuando uno ve Gardnerella en un examen microscópico siempre hay otros
tipos de células como los diplococos o bacilos que empiezan a migrar hacia las células
epiteliales planas y la tapizan. A estas células epiteliales planas tapizadas le llamamos
Clue cells.
○ La Gardnerella eleva el pH de esa zona, comienza a alcalinizarlo, no llega a ser alcalino,
pero pasa de 4,3 a 5,5. Este pH ya no es tolerable para los lactobacilos ni para los estrepto
por lo que empiezan a migrar dentro de las células epiteliales planas. Una vez que estos
microorganismos cronifican, empieza a agudizarse la infección, lo que ocurre es que
empieza a ser colonizado por otros microorganismos y genera un ambiente propicio para
la proliferación de anaerobios. Entonces, cuando vemos cocobacilos gram negativos y
bacilos pleomorficos siempre hay microbiota anaerobia asociada.
 Diplococos Gram positivos y/o cadenas cortas o largas: S. agalactiae
 Diplococos Gram negativos intra y extracelulares (Neisseria gonorrhoeae)
 Cocos Gram positivos (Enterococcus sp, Streptococcus agalactiae)
 Flora anaerobia (Complejo GAMM). Gardnerella está asociada a microbiota anaerobia porque
cuando los cuadros de vaginosis bacteriana no se tratan a tiempo es como si van de forma
recurrente y van empeorando el cuadro clínico del paciente y está dentro del grupo que se
denomina complejo GAMM (Gardnerella vaginalis, Anaerobios, Mobiluncus, Mycoplasma). Uno
de estos microorganismos puede estar asociado a la vaginosis bacteriana, entonces va
empeorando el cuadro del paciente.

3. CULTIVO DE LAS MUESTRAS

No se enfoca mucho al cultivo de este tipo de muestras porque crece cualquier tipo de microorganismo, todo
lo que forma parte de la microbiota.
Lo hace una persona con mucha experiencia que se dedique a hacer mesada de secreciones vaginales todos
los días porque debe aprender a reconocer la morfología de la colonia de estos microorganismos. Si no se
logra identificar se hace gram y en base a ello se informa. Por ello es que los aspectos anteriores predominan
sobre el cultivo.
Medios utilizados
 En general las muestras deben ser sembradas en agar sangre o chocolate.
 Para secreción uretral, si se dispone de medio Thayer Martin es preferible que este sea el primer agar a
ser sembrado aparte de agar chocolate y agar sangre.
 En el caso de observar algunos microorganismos específicos se puede utilizar medios específicos para su
aislamiento. Ej: Si se observan levaduras en el examen en fresco se puede utilizar agar sabouraud. En el
caso de verse Neisseria en gram, se puede aislar en Thayer Martin. Agar cromogenico.
 Como identificar a Candida: por el color. Normalmente tienen un tono rosadito, azul, verde agua. Candida
albicans tiene una tabla de colores, dependiendo del tipo de color que expresen es una diferente especie.
Candida albicans es de color verde agua. Colonias blancas, que tienen patitas.
 Lactobacilos: Colonias puntillosas, pequeñas, color verde en el fondo como una hemolisis.
 Estreptococos o enterococos: colonias chicas, puntillosas, brillosos, centros lisos, bordes transparentes.
Para confirmar se hace bilis esculina: si es positiva es enterococo y si es negativa es estreptococo,
posiblemente S. agalactiae. Para confirmar eso se hace la prueba de CAMP, utilizando otro agar sangre,
una estría de S. aureus y en forma transversal coloco la colonia de estrepto. En esta placa se debe
 observar una sinergia entre las hemolisis en forma de punta de flecha. Si CAMP da positivo se informa S.
agalactiae.
 Las placas deben ser incubadas a 35º C y observadas a las 24 y 48 hs de incubación.
 De todas las colonias que crecen no se le va a seguir a todas porque hay mucha microbiota habitual. Se
siguen a los microorgamismos potencialmente patógenos:

Microrganismos Interpretación
De la Microbiota
Lactobacillus sp. Microbiota normal
habitual
Estreptococos beta-hemolíticos del grupo B
Microbiota alterada o
Enterococcus sp.
intermedia
Patógenos potenciales Corinebacterias.

Gardnerella vaginalis. Vaginosis bacterina

Candida albicans. Candidiasis vaginal
Neisseria gonorrhoeae. Gonorrea
Mycoplasmas.
Ureaplasma ETS
Chlamydia
Patógenos poco
frecuentes Enterobacterales (Escherichia coli, Klebsiella-
Enterobacter-Serratia, Proteus-Morganella-Providencia)
Probable ITU
Staphylococcus aureus.
Staphylococcus saprophyticus

Estreptococos beta-hemolíticos del grupo B deben ser confirmados por test de CAMP.

Los microorganismos poco frecuentes que pueden ser debidos a una infección urinaria, se debe pedir una muestra
de orina, descartar ITU y posteriormente informar que MO se aisló y tratar. ¿En qué caso el agente patógeno de
ITU es el causante de vaginitis? En embarazadas, que tienen vaginitis recurrente y tienen síntomas como dificultad
para orinar, irritación. Se le hace examen de orina y no tiene nada, se le hace examen de secreción vaginal se
aísla E coli. Estos son casos raros, esporádicos, pero hay. Primero se debe descartar la probabilidad de ITU para
posteriormente informar. En este caso se informa: se observa abundantes bacilos gram negativos y se aísla E.
coli. Favor remitir muestra de orina para descartar probable infección urinaria. Si se aisla E. coli en la orina se hace
el antibiograma. Si no se aisla, se informa antibiograma en secreción vaginal. Normalmente secreción vaginal no
lleva antibiograma a no ser que el medico solicite. Pero es raro porque por métodos convencionales casi no se
hace. Se necesita equipos automatizados, por ejemplo, para aislar Candida y hacer antibiograma se necesita un
panel especial; para Neisseria gonorrhoeae se hace por métodos moleculares; Mycoplasma y ureaplasma se hace
por métodos inmunológicos. Por cultivos casi poco o nada.