MANUAL DE PRÁCTICAS DE
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA I
2021
PRÁCTICA No 7
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN
1. Introducción
En la realización de las prácticas de laboratorio de Microbiología es necesario conocer los métodos por los
cuales se eliminan, controlan o disminuyen la carga bacteriana en los ambientes de trabajo.
El término esterilización se refiere a los procedimientos que tienen como finalidad la destrucción de los
microorganismos por medio de agentes físicos como el calor, la filtración y radiación. O químicos mediante el
uso de desinfectantes y antisépticos.
Para controlar el crecimiento bacteriano se realizan procedimientos estandarizados de limpieza y
esterilización que normalmente involucra el uso de agentes bactericidas o bacteriostáticos. Dependiendo la
finalidad y ambiente en el que se apliquen. Es necesario realizar verificación de la efectividad de los procesos
de limpieza aplicados.
2. Objetivos
Observar el funcionamiento y conocer el fundamento de los equipos de esterilización de un laboratorio
de Microbiología.
Observar el procedimiento de lavado y desinfección de manos.
Verificar la eficacia de un procedimiento de esterilización química y física aplicados en dos superficies.
3. Materiales
Equipo de laboratorio:
Autoclave
Cabina de flujo laminar.
Horno de esterilización.
Filtro Seitz.
Kitasato
Bomba de Vacío.
Incubadora 37°C
Materiales de laboratorio
Hisopos estériles.
Plantilla para toma de muestra en superficies.
Caldo nutritivo
Placas de contacto Rodac (Replicate Organism Direct Agar Contact) con agar Plate Count
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Cinta testigo de control de esterilidad
Ampolla Sterikon plus bioindicador
Cronómetro
Agentes Químicos:
Jabón de manos
Desinfectante (amonio cuaternario)
Antiséptico (alcohol al 70%
4. Procedimiento
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a. Observación del funcionamiento, fundamento y usos de los equipos utilizados para esterilización:
Observar el video de la presentación de la práctica de laboratorio.
b. Comprobación de la eficacia de un procedimiento de lavado y desinfección de manos (desinfección
química en superficies vivas):
Observar el proceso de lavado y desinfección de manos siguiendo las instrucciones del procedimiento
de la OMS.
Se tomarán 3 muestras por medio de hisopados de las manos en los siguientes puntos del proceso:
Antes de iniciar el lavado de manos.
Al terminar de realizar el procedimiento de lavado.
Al terminar el procedimiento de desinfección de manos.
Realizar la siembra masiva de cada muestra en placas de petri con agar plate count. Se incuban a 37°C
por 24 horas.
Observar resultados (realizar lectura de resultados)
c. Comprobación de un procedimiento de desinfección química en superficies inertes:
Elegir una superficie de interés (por ejemplo: mesa de trabajo, manija o manecilla de puerta, paredes,
superficies de baños, etc.) a muestrear.
Realizar una toma de muestra de la superficie, previo a limpieza y desinfección
Realizar limpieza y desinfección de la superficie en estudio con un producto químico de desinfección
(amonio cuaternario)
Realizar una toma de muestra de la superficie limpia y desinfectada, para esto puede realizarse de dos
maneras, ya sea realizando un hisopado (especialmente en superficies irregulares y corrugadas) o
utilizando una placa Rodac, la cual se llena de agar Plate Count hasta obtener una superficie convexa que
sobresale del borde de la placa, esta placa se abre y del lado del agar se presiona en la superficie plana y
lisa a muestrear durante 1 minuto y luego tapar la placa.
En el caso de haber realizado un hisopado, se deberá realizar una siembra masiva de placas de Petri con
agar Plate count.
En cualquiera de los dos casos, llevar las placas a Incubación a 37°C durante 24 horas.
Realizar conteo de las Unidades formadoras de colonias UFC /área en cada placa.
d. Comprobación de la eficacia de un procedimiento de esterilización física:
Realizar la toma de muestra de la superficie de la cabina de flujo laminar con hisopo o placa rodac.
Encender la luz ultravioleta y dejar actuar durante 15 minutos.
Tomar una muestra de la superficie esterilizada.
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Realizar la siembra masiva de placas de petri con agar Plate count (en el caso de los hisopados). O
colocar las placas rodac sobre la superficie.
Incubación de las placas a 37°c durante 24 horas.
Realizar conteo de las Unidades formadoras de colonias UFC/área en cada placa.
5. Actividades:
5.1. Lea el artículo Control antimicrobiano integral: estrategia contra las infecciones nosocomiales en
veterinaria. Revista Colombiana de Ciencia Animal, Vol. 5, No. 1, 2012
[Link]
Ponga énfasis en los siguientes temas
Importancia de la adquisición de enfermedades nosocomiales en hospitales veterinarios.
Las recomendaciones dadas por la CDC para reducir las cargas microbiológicas y prevenir infecciones
en animales.
Aprender los diferentes conceptos importantes que aparecen en el artículo.
5.2. Observar los siguientes videos que enriquecerán sus conocimientos sobre el tema visto en esta práctica.
[Link]
[Link]
[Link]
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