Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas.
Informe de laboratorio N°5
Compartimientos celulares
1. Nombres:
Nota:
Carrera:
Fecha:
Sección:
Puntaje: /32
Instrucciones:
1. Utilizando los espacios asignados desarrolla cada uno de los ítems planteados.
2. Para guiar tus respuestas, te sugerimos revisar la rúbrica que se utilizará para la revisión del informe.
INTRODUCCIÓN
En el espacio asignado, redacta un texto en el que expliques brevemente la temática de esta sesión de
laboratorio. Te sugerimos desarrollar los siguientes temas: los organelos celulares, la separación de la célula
en los diferentes organelos y macromoléculas que la componen, fraccionamiento subcelular, usos del
fraccionamiento subcelular.
En esta sesión de laboratorio, veremos la temática de los organelos celulares y su separación en
componentes individuales, como macromoléculas y distintos organelos, incluyendo
mitocondrias, núcleos y glóbulos rojos. Estas estructuras especializadas se encuentran en el
interior de las células y cumplen funciones específicas para el correcto funcionamiento celular.
El fraccionamiento subcelular es el proceso mediante el cual se separa la célula en sus diferentes
componentes. Esta técnica nos permite aislar y purificar organelos y macromoléculas específicas,
preparándolas para su posterior análisis e investigación. Se basa en las diferencias de
propiedades físicas y químicas de los componentes celulares, tales como tamaño, densidad, carga
eléctrica o afinidad hacia ciertos reactivos.
Existen diversos métodos de fraccionamiento subcelular, entre ellos la centrifugación diferencial,
que fue utilizada en este laboratorio, así como la centrifugación en gradiente de densidad y la
cromatografía de afinidad. Cada método presenta ventajas y limitaciones, y la elección del más
adecuado dependerá del tipo de organelo o macromolécula que se desee separar.
El fraccionamiento subcelular es una herramienta esencial en la investigación científica y tiene
múltiples aplicaciones. Permite el estudio de la estructura y función de los organelos celulares,
así como la investigación de los procesos bioquímicos y metabólicos que tienen lugar en ellos.
También se utiliza para el análisis de proteínas y ácidos nucleicos específicos, el descubrimiento
de nuevos biomarcadores y el desarrollo de terapias específicas.
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OBJETIVOS
Con tus palabras, indica el o los objetivos del práctico realizado. Recuerda que, para redactar un objetivo, la
oración debe iniciar con verbos como: determinar, medir, identificar, explicar etc. En caso de ser más de uno,
debes enumerarlos. Copiar los objetivos de la guía será evaluado con 0 punto.
Comprender la técnica de fraccionamiento subcelular de fracción nuclear por medio de la ruptura
de la célula y la separación de organelos por el proceso de centrifugación; además de indicar
observaciones en la observación microscópica como la identificación de organelos mediante
la coloración resultante con el Azul de Tripano.
Evaluar y comprender el fraccionamiento subcelular en las distintas muestras (grupo control)
resultantes de homogeneización, y resultantes de centrifugación) antes y después de
ser expuestas a un baño termorregulado de 37°C por 10 minutos, e identificar la
presencia o ausencia de mitocondrias.
RESULTADOS PRÁCTICO “COMPARTIMIENTOS CELULARES”
Utilizando los resultados obtenidos de las actividades experimentales, completa los elementos de presentación
(tablas y esquemas) que se muestran a continuación (no olvides incorporar un título para cada uno).
Actividad A.2.1.
Título: Observación microscópica de fracción celular
Figura N°: 1
Nombre: Fraccionamiento Celular
Tipo de muestra: Temporal
Tinción: Sin tinción
Aumento del objetivo: 40x
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) Podemos observar núcleos que están fuera de las células
Se pueden diferenciar por el tamaño, ya que estos son
Pequeños, esto se debe que en el momento de la
Homogeneización se rompió el tejido
2) Se pueden observar glóbulos rojos
3) Es una solución heterogénea ya que las células están separas entre si, se pueden observar correctamente
mediante microscopio
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Figura N°: 2
Nombre: Fraccionamiento Nuclear
Tipo de muestra: Temporal
Tinción: Azul de tripano
Aumento del objetivo: 40x
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) Se pueden ver los núcleos gracias a la tinción de azul de
Tripano debido a que este se une con el ADN.
2) Presencia de Glóbulos rojos sin teñir ya que estos no tienen
Núcleo.
3) También se observa células que no captan el colorante mostrado que tienen su membrana intacta, mientras las
que están teñidas de azul son las que tienen la membrana dañada.
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Actividad A.2.2.
Título: Evaluación de fraccionamiento celular mediante marcadores moleculares
TUBO Muestra Color de la muestra Color de la muestra Indique si la reacción es negativa o
antes de someterla después de someterla positiva, y si hay gran cantidad, poca o si
a calor a calor no hay mitocondrias en la fracción en
estudio*
1 Blanco Celeste Celeste Negativo debido a que hay poca cantidad
de mitocondrias
2 HC Plomo Rojo Es positivo debido hay que hay gran
(Homogeneizado cantidad de mitocondrias
crudo)
3 Pellet 1 Celeste Celeste Negativo debido a que hay poca cantidad
(P1; Fracción de mitocondria
nuclear)
4 Pellet 2 Verde turquesa Es positivo debido a que hay gran cantidad
(P2; Fracción Amarilloso de mitocondrias
mitocondrial)
5 Sobrenadante 2 Azul Azul Negativo debido a que hay poca cantidad
(SN2; Fracción de mitocondrias
microsomal)
Tabla N°: 1
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ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS
Para dar explicación a los resultados obtenidos, responda los siguientes planteamientos:
Actividad 1.2: Responda las preguntas en relación con lo que observó durante el laboratorio.
a) ¿Con qué finalidad se debe lavar el tejido (hígado de pollo) antes de homogeneizarlo?
El tejido, en este caso el hígado de pollo se debe lavar antes de homogeneizarlo con el propósito de eliminar
cualquier contaminación o impureza que pueda afectar los resultados o la calidad de los datos obtenidos en el
análisis. Además, el lavado también ayuda a eliminar cualquier sangre o líquido que pueda interferir en la
homogeneización y el análisis del estudio.
b) Explique por qué las muestras deben permanecer constantemente en hielo.
Mantener las muestras de hígado de pollo constantemente en hielo ayuda a preservar su calidad, controlar la
temperatura, retrasar la degradación enzimática.
c) ¿Cuál es la función del suero fisiológico?
La función del suero fisiológico es contribuir a la eliminación de bacterias presentes en la muestra y remover los
residuos de sangre que puedan estar presentes.
d) ¿Por qué se filtra el homogenizado?
El filtrado del homogenizado se lleva a cabo para eliminar/separar fragmentos solidos grandes no deseados que
hayan quedado, para así obtener una muestra líquida más limpia y homogénea.
e) Describa la técnica de centrifugado considerando lo siguiente: a) Cantidad de centrifugaciones llevadas a
cabo, b) Fracciones centrifugadas en cada centrifugación, c) Velocidad y tiempo empleado para cada
una de ellas.
La técnica de centrifugado se utiliza para separar los componentes de una muestra líquida. Se llevan a cabo una o
varias centrifugaciones secuenciales para obtener diferentes fracciones basadas en la sedimentación. En esta
actividad práctica, se realizaron tres centrifugaciones.
La primera centrifugación consistió en homogeneizar la muestra a 1000 RPM durante 5 minutos a 4°C. Esto
permitió obtener la fracción nuclear y el sobrenadante.
En la segunda centrifugación, se centrifugó el sobrenadante obtenido en la primera etapa a 6000 RPM durante 20
minutos a 4°C. Esto resultó en la obtención de la fracción mitocondrial y un nuevo sobrenadante.
Finalmente, se realizó una tercera centrifugación al sobrenadante obtenido anteriormente a 6000 RPM durante
20 minutos a 4°C. Esto permitió obtener la fracción microsomal y un pellet.
En cada etapa, se ajustó la velocidad y el tiempo de centrifugación para garantizar una separación efectiva de los
componentes según su densidad y tamaño.
Es importante destacar que estos parámetros pueden variar según el tipo de muestra y los objetivos del
experimento, por lo que es necesario ajustarlos de acuerdo con las necesidades específicas de cada caso
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Actividad 2.1:
¿Cómo el azul de tripano le ayudaría a determinar si la etapa de homogeneización del fraccionamiento
subcelular se realizó de manera apropiada?
N Esta tintación debería mostrar claramente las células muertas y vivas, distinguiéndolas ya que las muertas se tintan, y
esto nos ayuda a distinguir estas mismas, al ver azules y no tintadas se puede deducir que se realizó de manera correcta
Actividad 2.2:
¿A que se debe el cambio de coloración observado en las fracciones? Especifique.
El cambio de coloración observado en las fracciones se debe a que entre mayor sea la cantidad de mitocondrias, haya mayor
cambio de color
CONCLUSIONES
Redacta las conclusiones de este trabajo haciendo énfasis en los resultados más relevantes, indicando si se
cumplieron o no los objetivos propuestos.
A lo largo de la historia, las técnicas de fraccionamiento celular han experimentado avances significativos, lo que ha
mejorado el estudio de los organelos. Estas técnicas permiten la investigación de las estructuras celulares al separarlas
sin afectar sus propiedades bioquímicas, lo que brinda una visión más clara de ellas como entidades individuales.
Estos avances fueron evidentes en los experimentos realizados en el laboratorio.
En la Actividad n°1, se logró el objetivo planteado al identificar, analizar y comprender la información obtenida a
través de las imágenes microscópicas. El fraccionamiento nuclear y la posterior tinción de la muestra revelaron la
presencia de núcleos, ya que la reacción entre el Azul de Tripán y el ADN los tiñó de un color azul vibrante. Además,
se pudo observar la ausencia de reacción del Azul de Tripán con los glóbulos rojos, ya que carecen de núcleos y, por
lo tanto, de ADN.
En la Actividad n°2, se cumplió el objetivo establecido al observar y evaluar el fraccionamiento subcelular en las
muestras mediante la detección de modificaciones en su color al interactuar con el Azul de Metileno después de
someterlas a procesos de centrifugación y diferentes temperaturas. Estos cambios de color indicaron la presencia de
mitocondrias. Además, el proceso demostró cómo las enzimas del ciclo de Krebs a una temperatura óptima permiten
identificar la presencia o ausencia de mitocondrias 6