TINCIÓN SIMPLE.
INTRODUCCION:
La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La
tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo
colorante (violeta de genciana, azul de metileno o fucsina diluida).
La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se
observen las formas y las estructuras celulares básicas.
En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y
contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la
pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y
enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las
células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción
simple mejora la observación de la célula completa. Si se utiliza un mordiente (sustancia
química utilizada para intensificar la coloración), hay que añadirlo justo antes
del colorante.
PROPÓSITO ESPECÍFICO DE LA PRÁCTICA
1. Estudiar la afinidad al colorante en las bacterias.
2. Estudiar la respuesta en cuanto al tipo de pared celular bacteriana.
OBSERVACIONES.
CULTIVO DE KLEBSIELLA CULTIVO DE STAPHYLOCOCCUS
Se lavó perfectamente el portaobjetos, secarlos con papel y rotularlos dependiendo de la
muestra que se colocara. Después se esterilizó el asa en la flama del mechero hasta que
se ponga rojo vivo.
Se colocó en el centro una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña
muestra del cultivo (colonia), se extendió la muestra suavemente y se dejó secar al aire.
Los cultivos de los medios sólidos completamente secos se fijaran con calor. Para esto se
pasara el frotis rápidamente de 2 a 3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama
del mechero.
Se cubrió el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto.
Se eliminó el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente o con la ayuda de
una piseta con agua. Y por último se dejó secar al aire.
RESULTADOS EN LA VISTA AL MICROSCOPIO.
Vista en el objetivo de 100 x (inmersión) de Staphylococcus.
Vista en el microscopio con el objetivo de 100 x (inmersión) de Klebsella.
DISCUSION DE RESULTADOS.
La clave de la realización de la tinción simple en seco, está en que al momento de la
fijación, esta se debe de hacer cuidadosamente, pues se corre el riesgo de que se queme
la muestra; por otro lado también al momento de retirar el exceso de azul de metileno con
agua, debe ser de una manera lenta y cuidadosa, pues se corre el riesgo de que se vaya
con todo y muestra.
Tanto de Klebsiella como de Staphylococcus, se observaron que son muy similares, sin
embargo las Klebsiellas se veían como si se hubieran agrupado en pequeños grupos en
todo el frotis, en cambio los Staphylococcus estaban más dispersos en todo el frotis, por
lo que nos surgió la duda en cuanto a la morfología de las Klebsiellas, la cual es una
forma tubular delgada que no deja de estar en el género de bacilos. y es Gram negativa, y
el Staphylococcus es Gram positiva.
CONCLUSIÓN.
Al realizar esta práctica se puede concluir que primero para hacer cualquier técnica,
estudio, etc., se debe tener una muestra problema (ya sea bacteria o algún otro cultivo), la
tinción simple nos ayuda a ver la morfología de cualquier bacteria que se encuentra en el
cuerpo humano que nosotros mismos las tenemos pero algunas son patógenas y hay
otras que son normales.
Se puede concluir que para tener un frotis adecuado, y una observación buena de la
bacteria es importante usar un portaobjetos limpio, y desengrasado para que no interfiera
o contamine la bacteria.
El colorante que se utilizó fue el azul de metileno y se concluye que es un colorante débil,
razón por la cual se usa más concentrado y se deja actuar durante más tiempo. También
a la solución de azul de metileno de uso se le agrega un álcali (KOH) como intensificante,
que actúa haciendo más rápida e intensa la reacción de coloración. Generalmente como
intensificante se usa un álcali para un colorante básico y un ácido para un colorante ácido.
Debido a que el protoplasma bacteriano tiene una débil carga negativa que aumenta al
aumentar el pH, se explica que en medios alcalinos las coloraciones de bacterias se
hagan más intensas. La coloración positiva es la tinción de los microorganismos,
efectuada con colorantes básicos que, como ya dijimos, poseen afinidad por los
constituyentes celulares y se combinan químicamente con el citoplasma microbiano.
CUESTIONARIO.
1. ¿Cuáles considera son las fuentes de error más frecuentes en la preparación y fijación
de frotis?
Tomar mucha o muy poca muestra.
Contaminación de la muestra o del agua.
Portaobjetos sucios.
Hacer la fijación de la muestra en el mechero más tiempo de lo indicado en el
manual.
No esterilizar el asa bacteriológica.
2. ¿Cuáles considera son las fuentes de error más frecuentes en la tinción de Gram?
Contaminación de los reactivos.
Precipitación del colorante por exceso de calor en el portaobjetos.
Artificios coloreados, procedentes de la muestra o de la suciedad del
portaobjetos.
Mala técnica de coloración que no refleja las características tintoriales del
microorganismo.
3. Si se aplica la tinción de Gram de Bacillus sp. con endosporas ¿Cómo se observarían
la célula vegetativa y la endospora? ¿Por qué?
Se observaría la tinción de endoesporas, la coloración es verde por el colorante
verde malaquita y en el citoplasma se fija la safranina tomando una coloración
rosada.
BIBLIOGRAFÍA
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[Link] consultado el dia 10
de marzo
[Link]/[Link] consultado el dia 09 de
marzo.
