6Usando el microscopio
Orden recomendado:
El muestreo de bacterias (anteriormente equipo de laboratorio
desechable ) debe ser seguido por tinción de Gram y luego usando
un microscopio
Capítulo 1- Introducción
¡Hola, ayudante de laboratorio! Hoy,
veremos la muestra de yogur teñida con Gram con un microscopio para
tener una idea del tipo de bacterias que la contaminan.
Para obtener más información sobre el propósito y las técnicas de la
tinción de Gran, consulte el laboratorio virtual de tinción de Gram.
Usaremos un microscopio óptico con lentes de 10x, 40x y
100x. La lente 100x es una lente de inmersión en aceite.
Microscopio de inmersión en aceite
Hay muchos modelos y estilos diferentes de microscopio.
Esta imagen muestra una versión del microscopio de
inmersión.
Este microscopio funciona magnificando la muestra en el
portaobjetos usando una serie de lentes. ¡Empecemos!
Capítulo 2. Configuración
Comience asegurándose de que el
microscopio esté enchufado.
Eche un
vistazo más de cerca a la pieza de la nariz.
El número al costado de la lente del
objetivo indica cuántas veces más grande
hará la imagen.
Gire la pieza de la nariz al aumento más
bajo, el objetivo de 10x. Siga girando el
revólver hasta que escuche un clic. Esto significa que la lente está en la
posición correcta para su uso.
Multiplique el número en la lente del
objetivo por 10, el aumento de la lente
del ocular, para encontrar el aumento
total. Por ejemplo, el objetivo de 10x le
daría 10 x 10. O un aumento de 100x.
Ahora enciende la luz. Esto ilumina la imagen
que ve a través del ocular.
Capítulo 3. Bajo aumento
Miremos el portaobjetos. Contiene la
muestra de yogur cultivado de la planta
láctea. La muestra ha sido teñida con
Gram para diferenciar bacterias Gram-
positivas y Gram-negativas.
Portaobjetos teñido con Gram.
Esta imagen muestra un portaobjetos
teñido con Gram, una vez finalizado el
proceso de tinción de Gram.
Usando los clips en la platina del microscopio, asegure el portaobjetos al
microscopio.
Capítulo 1. Información de Laboratorio
¡Hola, ayudante de laboratorio! Bienvenido a la sección tuya de la planta
de procesamiento de lácteos.
Parece que nuestro último lote de yogur podría haber sido contaminado
por algunas bacterias indeseables.
Todo yogur tiene bacterias, ya que el yogur se elabora añadiendo
bacterias específicas a la leche. Estas bacterias son beneficiosas para los
humanos.
Desafortunadamente, bacterias indeseables como Salmonella o [Link] cal
también terminan en su cuerpo. Estas bacterias pueden enfermar
gravemente a las personas.
Así es como se ve un buen yogur natural. Observe la
textura y el color uniformes.
Ahora echa un vistazo a este yogur. ¿Ves cómo se separan
el suero y el agua? ¿Se están formando esas burbujas de
aire cerca del fondo de la botella? Estos pueden ser signos
de contaminación.
Este yogur parece sospechoso, pero para saber si está contaminado,
debemos observarlo mucho más de cerca.
Recolectemos muestras de yogur y preparémoslas para verlas bajo el
microscopio haciendo una tinción de Gram
Capítulo 2. Información sobre la tinción de Gram
En el proceso de tinción de Gram, utilizaremos diferentes productos
químicos para teñir las bacterias que se encuentran en el yogur. Luego,
los miraremos bajo el microscopio. Las bacterias se teñirán de diferentes
colores según el tipo que sean.
Las bacterias que tiñen un color rosa o rojizo como este se llaman
Gram-negativas, y su presencia significa que el yogur está
contaminado.
Bacterias Gram-negativo
Esta imagen muestra una
vista microscópica de bacterias Gram-negativas. Las bacterias que se
tiñen de un color rosa o rojizo son Gram-negativas.
Las bacterias que se usan para hacer yogur a partir de la leche se
tiñen de color púrpura, se ven así en un microscopio y se llaman
Gram-positivas. Las bacterias rosadas se llaman Gram-negativas.
Bacterias grampositivas
Esta imagen muestra una vista microscópica de bacterias Gram-
positivas. Las bacterias que tiñen un color púrpura son Gram-positivas.
Se está dando una muestra de yogur para tinción de Gram para que
podamos ver qué tipos de bacterias están presentes. Muy bien,
¡preparemos nuestros portaobjetos para la tinción de Gram!
Capítulo 3. Preparación de portaobjetos
Para evitar que las bacterias contaminen nuestra área de trabajo,
hemos limpiado la mesa con una solución de etanol al 70%. También
encenderemos un mechero Bunsen para esterilizar los asas de
inoculación que usaremos más adelante y ayudar a mantener un
ambiente de trabajo estéril.
Vas a usar un delantero para encender el
mechero Bunsen. El gas ya está abierto,
así que lleva el percutor al mechero
Bunsen con el lado de pedernal hacia abajo
y aprieta el percutor para crear chispas.
Necesitamos diluir el yogur antes de
ponerlo en el portaobjetos del microscopio.
Usaremos un líquido PBS (solución salina
tamponada con fosfato) como diluyente
para diluir el yogur. Eso nos ayuda a ver
las bacterias con el microscopio.
Comience colocando 1 ml (mililitro) del
diluyente en un tubo de ensayo con una pipeta.
Este es un asa de inoculación, un pequeño asa de alambre que se
utiliza para recolectar simples. Lo usaremos para colocar una
pequeña cantidad de yogur en el tubo de ensayo con el diluyente.
Esterilización del asa de inoculación
Esta imagen muestra la esterilización de un asa de inoculación. Para
esterilizar un bucle, sosténgalo directamente en la llama hasta que se
caliente.
Comience por esterilizar el asa de iniciación en la llama del mechero
Bunsen. Sostenlo directamente en la llama hasta que brille al rojo vivo.
after it has cooled down, use the loop to obtain a small simple of yogurt
from the suspect container. To get a good sample, reach deep into the
container or thoroughly mix the yogurt first
use the inoculation loop to transfer a small amount of sample from the
test tube to your prepared slide
utilice el asa de inoculación para transferir una
pequeña cantidad de muestra del tubo de ensayo al
portaobjetos preparado
now use de bottle of gram’s iodine. Gram’s iodine will fix the dry to the
cell wall of the bacteria and make it permanent
squeeze several drops onto the sample. Enough to cover it completely.
look at all those Gram-neative bacteria!
It’s a good thing we caught this before the product shipped. Now we will need to do some
investigating to determine how the yogurt became contaminated, and identify the exact strain of
bacteria that contaminated the yogurt