Microscopía Óptica
Microscopía
Es la ciencia basada en el uso de microscopios para la observación de objetos que no
pueden ser visualizados a simple vista. Actualmente existen dos grandes ramas:
Microscopia óptica Microscopia electrónica
Difracción y Difracción de la luz, haz de electrones (que
Involucra refracción de la luz interactúan con el objeto) y radiación (recogida
para construir una imagen del objeto).
Microscopio
De micro (pequeño) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. En general,
cualquier microscopio requiere:
1. Una fuente (haz de fotones o electrones)
2. Una muestra sobre la que actúa dicha fuente
3. Un receptor de la información proporcionada por la interacción de la fuente con
la muestra.
Microscopio Óptico
También conocido como microscopio de luz, microscopio fotónico o microscopio de
campo claro, se trata de un microscopio basado en lentes ópticas. Puede ser:
Características Simple Compuesto
Cantidad de Lentes Solo una Más de una
El objeto por observar se coloca Posee objetivos que proyectan una
Funcionamiento entre el foco y la superficie de la imagen de la muestra, misma que luego
lente. es ampliada por el ocular.
Virtual, derecha y de mayor Virtual, invertida y de mayor tamaño.
Imagen Formada tamaño.
Es el microscopio más básico. Un Se utilizan para estudiar especímenes
ejemplo es la lupa. delgados, puesto que su profundidad de
Particularidades campo es muy limitada. Por lo general, se
utilizan para examinar cultivos,
preparaciones trituradas o una lámina
muy fina del material que sea.
Microscopía Óptica
Tipos de microscopios ópticos
1. Microscopio de campo claro
Microscopio compuesto utilizado en la mayoría de laboratorios. Utiliza luz visible
para formar una imagen, por lo que la muestra debe ser lo bastante fina como
para que los haces de luz puedan atravesarla. Es compatible con métodos de
tinción de la muestra para aumentar los detalles de la imagen.
2. Microscopio de contraste de fase
Posibilita la observación de muestras y tejidos sin colorear, por lo que resulta útil
para estudiar seres vivos (como células, por ejemplo). Existen modificaciones de
este tipo de microscopios que permiten la cuantificación de masa en los tejidos,
o el estudio de propiedades de superficie de las células.
3. Microscopio de fluorescencia
Permite detectar moléculas fluorescentes naturales (autofluorescentes), pero su
aplicación más difundida es detectar la fluorescencia artificial asociada a una
sustancia determinada, como es el caso de la detección de antígenos /
anticuerpos. También se pueden observar moléculas fluorescentes específicas
que son inyectadas a un animal o a células y usadas como marcadores.
4. Microscopio de barrido confocal
Microscopio compuesto al que se le ha añadido un detector fluorescente y una
fuente láser que barre la muestra con un ángulo de incidencia pequeño,
excitándola para obtener cortes ópticos muy finos. Luego, la luz emitida se
almacena y se procesa digitalmente. Las imágenes obtenidas pueden
integrarse informáticamente para obtener imágenes en tres dimensiones.
5. Microscopio de luz ultravioleta
Se utiliza tanto para analizar la absorción de luz UV por los componentes de la
muestra como para detectar ciertos componentes específicos en las muestras,
tales como ácidos nucleicos o ciertos aminoácidos. Permite registrar los
resultados como una fotografía.
6. Microscopio de luz polarizada
Microscopio que se basa en el comportamiento que presentan ciertos tejidos y
estructuras celulares cuando se luz polarizada. Posee un prisma polarizador en
la lente condensadora que, cuando es atravesado por la luz, permite conservar
un determinado plano de polarización, y también un prisma analizador en los
oculares capaz de convertir la luz polarizada en normal. Permite observar
sustancias cristalinas y moléculas fibrosas.
Microscopía Óptica
Partes de un microscopio óptico
Sistema óptico
Complejo sistema de lentes
Una lente óptica es un cuerpo transparente delgado (normalmente de vidrio) capaz de
desviar los rayos de luz y que está limitado por dos superficies de las cuales al menos
una es curva. De acuerdo con la dirección que siguen los rayos refractados cuando la luz
pasa a través de la lente, estas se clasifican en convergentes o divergentes. En el
microscopio óptico compuesto se distinguen:
1. Ocular
Lente situada cerca del ojo del observador. Amplia la imagen del objetivo.
2. Objetivo
Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de esta.
3. Condensador
Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
Características de los objetivos
1. Escala de reproducción
Relación entre el tamaño del objeto y su imagen (por ejemplo: 4:1, 40:1, 65:1, etc.).
2. Poder definidor
Capacidad de formar imágenes de contornos nítidos.
3. Límite de resolución
Menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan
visualizarse por separado.
4. Poder de resolución
Capacidad de mostrar la imagen con mayor detalle. Es inversamente
proporcional al límite de resolución.
Microscopía Óptica
5. Poder de penetración
Capacidad de observar simultáneamente varios planos del preparado. Es
inversamente proporcional a la escala de reproducción.
6. Distancia frontal
Distancia de la lente frontal (enfocada) al preparado en la platina. Disminuye
con el aumento de la escala de reproducción.
7. Aumento total
Producto entre el aumento del objetivo y el aumento de los oculares.
Sistema mecánico
1. Soporte
Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: la base y el brazo.
2. Platina
Lugar donde se coloca el preparado (porta-objetos).
3. Cabezal
Contiene el sistema de lentes oculares. Puede ser monocular o binocular.
4. Revólver
Contiene el sistema de lentes objetivos. Permite seleccionar distintos objetivos.
5. Tornillos de enfoque
Posee un macrométrico (aproxima el enfoque) y un micrométrico (consigue el
enfoque correcto).
Sistema de iluminación
Tiene como finalidad dirigir la luz de tal manera que ilumine la preparación de manera
adecuada. Comprende:
1. Fuente de iluminación
Puede ser una lámpara incandescente de tungsteno o, en versiones más
modernas, LEDs.
2. Diafragma
Diafragma-iris del condensador que regula su apertura ajustándola a la del
objetivo para evitar que el haz de luz exceda el campo de observación.
3. Condensador
Sistema de lentes situado debajo de la platina y cuyo objetivo es concentrar
los rayos luminosos sobre la preparación formado un cono de luz con el
mismo ángulo que el del campo del objetivo. Puede deslizarse verticalmente
mediante un tornillo.