Práctica 8
“ El pK de un indicador”
Carrillo Juarez Nancy Cecilia
García Ortiz Ketzel Estefania
Ortiz Torres Carlos Raul
Quimico Farmaceutico Biologo
4to E
Quimica Analitica III
(Análisis Instrumental)
Unidad Academica de Ciencias Quimicas, UAZ
Carr. Zacatecas - Guadalajara Km 6
Col. Ejido “La Escondida”
Zacatecas, Zacatecas, Mexico
C.P. 98160
Elaboración: 17/ABR/2023. Entrega: 24/ABR/2023
Resumen del reporte
En esta práctica se determina el pK de un indicador ácido-base mediante la
espectrofotometría, en este caso con un espectrofotómetro, se determinaron los espectros de
absorción de las soluciones de azul de bromotimol a varios valores de pH y se determinó la
absorbancia de las soluciones de 400nm a 600 nm en intervalos de 10 nm. Se determinó el
pK, también se realizó una gráfica y tabla donde seleccionamos la longitud de onda máxima
de acuerdo al punto máximo de la absorbancia y también se logró determinar el In/ HIn y Log
In/HIn.
Palabras Clave
pK, punto isosbéstico, indicador, espectrofotometría, pH
Introducción
El pk es un valor que indica la acidez o basicidad del medio en que se encuentra el indicador
y que permite determinar el rango de pH en el que se produce el cambio de color. Cuanto
menor sea el valor de pk, mayor sera la acidez del indicador y menor sera el pH en el que se
producira el cambio de color. Por el contrario, cuanto mayor sea el valor de pK, menor la
acidez del indicador y mayor será el pH.
El punto isosbéstico es aquel en el que dos especies diferentes tienen la misma absorción a
una longitud de onda particular. Este punto puede ser utilizado para la identificación de
especies en una mezcla, ya que ambas tendrán la misma absorción y no podrán ser
distinguibles entre sí. Además, se puede utilizar para la construcción de curvas de calibración
de un analito, ya que si se encuentra el punto isosbéstico entre el analito y una especie
interferente, ésta última no afectará la absorción medida del analito.(Skoog, Holler, 2014,
p.39). 1
La determinación del pK de un indicador ácido-base por espectrofotometría implica la
medición de la absorbancia de la especie ácida y básica del indicador a diferentes longitudes
de onda, y la construcción de una curva de absorbancia versus pH. A partir de la curva, se
puede identificar el punto de inflexión, que corresponde al pK del indicador.
Para calcular el pK del indicador, se utilizan las ecuaciones de Henderson-Hasselbalch, que
relacionan el pH, el pK y la proporción de la especie ácida y básica del indicador:
pH = pK + log([base]/[ácido])
dónde [base] y ácido] representan las concentraciones de la especie básica y ácida del
indicador, respectivamente.
Además, se puede utilizar la ecuación de absorción de Beer-Lambert para calcular la
concentración de las especies ácida y básica del indicador a partir de su absorbancia:
A = εbc
donde A es la absorbancia, ε es el coeficiente de extinción molar del indicador, b es la
longitud del camino óptico, y c es la concentración de la especie ácida o básica del indicador.
(Christian,2004, p.184)2
Con base a la práctica el objetivo es poder determinar el pK del indicador que se nos dio en el
laboratorio.
Material y Métodos
Primero se encendió el espectrofotómetro y se ajustó con el blanco de reactivos (H20
destilada), se nos dieron tres celdas con una solución A con un pH de 1, una solución B con
un pH de 6.9 y una solución C con un pH de 13, se determinaron las absorbancias de las
soluciones de 400 a 600 nm en un intervalo de 10 nm y con base a los resultados se realizaron
unas gráficas para poder determinar el punto isosbéstico. Posteriormente, se seleccionaron las
longitudes de onda de acuerdo a la absorción máxima de la solución con pH 1 Y pH 13 en
este caso (440 nm y 600 nm).
Posteriormente se realizaron los cálculos necesarios para saber el pH y concentración de
KH3PO4 Y Na2HPO4 y así poder medir la absorbancia en las longitudes de ondas
seleccionadas así elaborando una gráfica en base a los resultados. Posterior a esto se
determinó In, HIn y Log In/HIn y se realizaron cálculos para determinar el pKa del indicador.
Resultados
El azul de bromotimol es un indicador químico utilizado en análisis volumétricos y
titulaciones ácido-base. Este indicador tiene un rango de viraje de pH de 6.0 a 7.6 y su color
varía desde amarillo a verde y luego a azul a medida que el pH aumenta. Es una sustancia
cristalina de color amarillo, soluble en agua y alcohol. El azul de bromotimol se utiliza
comúnmente en química analítica y bioquímica como un indicador de pH, y también se
utiliza en la industria alimentaria y en la fabricación de productos químicos y farmacéuticos.
Se realizaron las medidas de las absorbancias en las soluciones con azul de bromotimol a pH
´s de 1, 6.9 y 13 a una longitud de onda que empieza en 400nm y termina en 600 nm cada 10
nm para poder realizar los espectros de absorción de cada una de las soluciones (Tabla 1).
Tabla 1. Absorbancia de las soluciones con pH 1, pH 6.9 y pH 13 con azul de bromotimol
Soluciones con el Longitud de onda A Sol’n a pH 1 A Sol’n a pH 6.9 A Sol’n a pH 13
indicador azul de (nm)
bromotimol Color: Amarillo Color: Verde Color: Azul
400 0.543 0.429 0.324
410 0.606 0.457 0.278
420 0.655 0.465 0.204
430 0.672 0.435 0.144
440 0.658 0.435 0.09
450 0.622 0.408 0.08
460 0.562 0.382 0.09
470 0.481 0.339 0.112
480 0.391 0.298 0.145
490 0.317 0.265 0.187
500 0.239 0.222 0.228
510 0.174 0.203 0.287
520 0.129 0.195 0.369
530 0.091 0.2 0.45
540 0.064 0.231 0.564
550 0.048 0.254 0.669
560 0.034 0.287 0.782
570 0.024 0.33 0.913
580 0.014 0.388 1.062
590 0.014 0.431 1.208
600 0.014 0.478 1.344
Se muestra que en la absorción de la solución a pH 1 fue disminuyendo continuamente hasta
llegar a un punto donde no cambió su absorbancia, de manera contraria, en la solución a pH
6.9, hubo muchas variaciones, fue disminuyendo de manera continua hasta la longitud de
onda de 530 nm donde fue aumentando, por otro lado la solución a un pH 13 fue
disminuyendo hasta la longitud de onda de 460 nm y a partir de ahí fue aumentando
considerablemente.
Figura 1. Valores de absorbancia de los tres espectros (Solución con pH 1,6.9 y 13)
En la figura 1, se muestran los tres espectros de absorción de las soluciones con azul de
bromotimol, el punto isosbéstico está entre la longitud de onda de 490 nm y 500 nm, podría
interpretarse que está ubicada en 495 nm el cual está marcado con un punto de color negro.
Se calcularon las concentraciones de Na2HPO4 y KH2PO4 junto con el pH, se realizaron las
mediciones de absorbancia con longitudes de onda seleccionadas con base a la Tabla 1, las
longitudes de onda se seleccionaron de acuerdo a la absorbancia máxima de las soluciones a
pH 1 y 13.
Tabla 2. Mediciones de absorbancia en la longitud de onda seleccionada de las soluciones con azul de
bromotimol
No. Indicador KH2PO4 Na2HPO4 Vol. Conc. Conc. pH Aλ(440) Aλ(600)
Matraz (ml) (ml) (ml) Final Na2HPO4 KH2PO4
(ml)
- - - - - - - 1 0.658 0.014
1 1.0 5.0 0.0 50 0.0 0.01 ~4.5 0.666 0.029
2 1.0 5.0 0.1 50 0.002 0.01 6.2 0.626 0.134
3 1.0 10.0 5.0 50 0.01 0.02 6.6 0.531 0.330
4 1.0 5.0 10.0 50 0.02 0.01 7.2 0.378 1.355
5 1.0 0.1 5.0 50 0.01 0.002 7.6 0.218 0.987
6 1.0 0.1 10.0 50 0.02 0.002 7.9 0.187 1.144
7 1.0 0.0 10.0 50 0.02 0 ~9.1 0.113 1.280
- - - - - - - 6.9 0.435 0.478
- - - - - - - 13 0.090 1.344
En la tabla 2, se muestran los resultados de las mediciones de absorbancia de las soluciones
con un pH distinto cada uno con azul de bromotimol y también los pH de los siete matraces
ya calculados previamente , en la longitud de onda de 440 nm se muestra como la
absorbancia va disminuyendo de acuerdo a que el pH va aumentando y de manera opuesta en
la longitud de onda de 600 nm la absorbancia va aumentando de acuerdo a como el pH va
aumentando también.
Figura 2. Absorbancia en función del pH a las longitudes de onda seleccionadas
En la figura 2 se muestra la absorbancia en función del pH calculado, de ambas longitudes de
onda, en color rojo la de 600 nm y en color azul, la de 440 nm, con una variación
considerable tomando en cuenta los errores de medición al realizar la práctica.
Sacando el pKa de cada gráfica pKa=pH + Log10[(A-AIn-)/(AHIn-A)] da como resultado en
la longitud de onda de 600 un valor de 8.2 y en la longitud de onda de 440 un resultado de
11.03.
La relación In/HIn se refiere a la proporción de la forma disociada (In-) y la forma no
disociada (HIn) de un indicador ácido-base en solución. Esta relación está directamente
relacionada con el pH de la solución y la constante de disociación ácida o básica (pK) del
indicador.
En la Tabla 3 se muestra la relación de In-/HIn y los resultados de los cálculos hechos
posteriormente.
Tabla 3. Resultados y determinación de In-/HIn y LogIn-/HIn
No. Matraz pH In- HIn In-/HIn LogIn-/HIn
1 4.5 -0.008 0.576 0.013 log ind
2 6.2 0.632 -0.064 -9.875 log ind
3 6.6 0.127 0.441 0.287 -0.540
4 7.2 0.28 0.28 1 0
5 7.6 0.44 0.128 3.437 0.536
6 7.9 0.471 0.097 4.855 0.686
7 9.1 0.545 0.023 23.695 1.374
6.9 0.223 0.545 0.646 -0.189
13 0.658 0 0 log ind
Cuando el pH de la solución es menor que el pK del indicador, la forma no disociada (H
In) del indicador es predominante y la relación In/HIn es baja. A medida que el pH aumenta y
se acerca al pK del indicador, la forma disociada (In-) del indicador comienza a predominar y
la relación In/HIn aumenta. Cuando el pH es mayor que el pK del indicador, la forma
disociada (In-) del indicador es predominante y la relación In/HIn es alta.
Figura 3. Relación de LogIn-/HIn con el pH
Con base a los resultados obtenidos, se pudo determinar el pKa donde se muestra que la línea
que cruza el eje vertical es el pKa del indicador (pKa=pH) por lo tanto se puede interpretar
que el pKa es de 7.2 como se muestra en la gráfica.
Discusión y Conclusiones
La determinación del pK de un indicador ácido-base a partir de datos espectroscópicos es importante
porque proporciona una forma precisa y no destructiva de medir la constante de disociación ácida o
básica de una molécula en solución, lo que es útil en la química analítica, la síntesis de compuestos
orgánicos y la investigación farmacéutica.
La absorbancia es una medida de la cantidad de luz que se absorbe al pasar a través de una
solución, y está relacionada con la concentración de una sustancia en la solución. La
variación de la absorbancia en función del pH se refiere a cómo la absorbancia de una
solución cambia cuando se varía el pH de la solución. Esto se debe a que la cantidad de
protones en la solución puede afectar la estructura de la molécula de la sustancia en cuestión,
lo que puede afectar su capacidad para absorber la luz.
En algunos casos, las moléculas de la sustancia pueden estar cargadas, y el pH de la solución
puede afectar la carga neta de la molécula. Esto puede cambiar la manera en que la molécula
interactúa con la luz, y por lo tanto, la absorbancia de la solución puede cambiar con el pH.
La variación de la absorbancia en función del pH se utiliza a menudo en la espectroscopia
UV-visible para estudiar la estructura de moléculas, como proteínas, ácidos nucleicos y
pigmentos. Al variar el pH de la solución, se puede estudiar cómo la estructura de la molécula
cambia en respuesta a los cambios en las condiciones del entorno.
Este tipo de análisis químico puede ser especialmente útil en la biología y la bioquímica, ya
que permite a los investigadores estudiar cómo las proteínas y otras biomoléculas se pliegan y
despliegan en respuesta a los cambios en el pH. Además, la variación de la absorbancia en
función del pH puede ser utilizada para determinar el punto isoeléctrico de una molécula, que
es el pH en cual la molécula no tiene carga neta. Esto puede ser útil para la separación y
purificación de proteínas y otras biomoléculas.
Anexos
Referencias
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2014). Fundamentos de Química Analítica.
1
Cengage Learning Editores.
2
Christian, G. D. (2004). Analytical chemistry. John Wiley & Sons.
Harris, D. C. (2010). Análisis Químico Cuantitativo. Reverté
Krygowski, T. M., & Cysewski, P. (2000). Electronegativity equalization method:
Application to the estimation of pK (a) values. Journal of Chemical Information and
Computer Sciences, 40(3), 715-717.