TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tehuacán

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

EQUIPO 6

PRÁCTICA No. 8

PREPARACIÓN Y SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO

SÓLIDO Y SEMISÓLIDO EN TUBO.

PRESENTAN:

PACHECO FLORES ARELY 20360438

ORTIZ MARTINEZ AIDEE JACQUELINE 20360609

MARROQUÍN REMIGIO ALEJANDRA 19361430
MONFIL CANSECO JULIO LIZANDRO 20360424
CASTRO VILLEGAS JAIR 20360348

ASESORA:
ING. ROSA MARÍA ZAVALETA MARTÍNEZ

ENERO – JUNIO

TEHUACÁN, PUEBLA, FEBRERO DEL 2023

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 Objetivo
Realizar la preparación de medio de cultivo sólido en tubo (agar inclinado o
en pico de flauta) y de agar semisólido en tubo.
Realizar el procedimiento de siembra en ambos medios de cultivo.
 Fundamento teórico
Generalmente cuando mencionamos el término tubo de cultivo se cree que
es aquel producto utilizado para realizar diferentes procedimientos de laboratorio,
un tubo de plástico o de vidrio que se usa rutinariamente para realizar actividades
de laboratorio, por ejemplo, en el laboratorio de microbiología. En este tubo, se
pueden realizar y contener pequeñas muestras liquidas o incluso sólidas y se usa
mucho también para realizar reacciones químicas en pequeñas escalas. Son
ideales para usar reactivos de laboratorio y tareas de cultivo, viene en diferentes
tamaños para satisfacer las necesidades presentadas en el laboratorio, ya sean
clínicos o industriales. Es un producto que cuenta con un tapón y rosca, por un
extremo tiene la rosca y tapa, mientras que el otro extremo es cerrado y casi
siempre redondeado, son biológicamente inertes, con superficie uniforme, estéril
y desechable. Además, resisten temperaturas de hasta 70°C.
Siembra en tubos de ensayo: Los tubos de ensayo son los menos usados para
aislamiento por que ofrecen poca superficie de siembra, lo que dificulta en gran
medida la separación de las colonias y la extracción de las mismas. Se emplea
en aislamiento con medios específicos donde otras especies no crecen o lo
hacen lentamente o para conservar colonias puras.
A) Por estría: se utilizan tubos de ensayo con medio solidificado en pico de
flauta, para así aumentar la superficie de siembra. Con el ansa se toma el
material a sembrar y se lo introduce en el fondo del mismo, luego se hace
una estría desde el fondo hacia arriba en toda la superficie.

B) Por picadura o punción: con una aguja se toma el material que se quiere
sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio solidificado en forma
vertical, formando una canal de punción. A lo largo de ese canal se
desarrollaran los microorganismos y según lo hagan en la parte superior o
inferior de tubo, se está indicando su comportamiento frente al
requerimiento de oxígeno.

En la Siembra por estrías en superficie, Se siembra el material en la

superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la
superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el
material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy
estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se
termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo. Medio de cultivo: agar
base inclinado, Instrumento: asa o aguja bacteriológica
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Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se

colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja
enfriar, en profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a
sembrar y se introduce mediante tensión en el medio contenido en la parte
inferior del tubo y en superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a
sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

 Materiales
Autoclave
Hot plate
Agua destilada
2 matraces Erlenmeyer de 300ml
Mechero Fisher
Papel encerado
2 Pipetas de vidrio
2 jeringas con manguera
1 vaso de pp de 250ml
10 tubos de ensaye de 15x125mm con tapón de rosca
Inóculo de la práctica anterior
Asa bacteriológica
REACTIVOS
Agar nutritivo
Agar citrato de Simmons

 Metodología

1ra Sesión
A) PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO EN
TUBO (PARA AGAR INCLINADO).

1. Antes de sacar nuestro material, empezamos limpiando

nuestra área de traba bajo y desinfectando echo esto
sacamaos el material correspondiente
2. Como prepararemos dos medios de cultivo usaremos dos
matraces para cada uno
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3. En uno calculamos la cantidad de agar citrato de Simmons a utilizar

considerando que por cada tubo de ensayo de 15x125mm se agrego 10ml de medio.

4. Pesamos nuestra muestra con ayuda de un papel encerado posteriormente agregarlo a

nuestro matraz junta con agua destilada y calentar suavemente utilizando un Hotplay hasta
que se observe una fase homogénea y agítanos bien para que no se derrame nuestro cultivo

5. Ahora distribuimos el medio de cultivo en los tubos de ensayo con ayuda de una pipeta de
vidrio y colocamos el tapón a media rosca con un trozo de cinta masking se lo colocamos a
los lados del tapón para evitar que se caiga.

6. Acomodar los tubos en un vaso de precipitados y meter a esterilizar en condiciones estándar.

7. Después de esterilizar, colocamos los tubos en una superficie inclinada, para que el medio se
solidifique a una distancia aproximada de 1-2cm de la boca del tubo, el medio deberá ocupar
las dos terceras partes del tubo cuidando que la columna del fondo tenga aproximadamente
1cm de profundidad y evitar el contacto entre el pico de flauta y el tapón.
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B. PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO SEMISÓLIDO

1. Comenzamos preparando 50ml de caldo ICC o caldo nutritivo pesando la cantidad necesaria
de agar bacteriológico para que la concentración final de agar en el medio sea de 0.3%

2. Una vez pesado agregamos el agar bacteriológico al matraz que contiene el caldo nutritivo
para calentar suavemente utilizando un hotplay hasta que se observe una fase homogénea
tuvimos que agitar durante todo el proceso de calentamiento, evitando que el medio de cultivo
se derrame.
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3. Distribuimos el medio de cultivo en los tubos de ensayo con ayuda de una pipeta de vidrio y
colocamos el tapón a media rosca con un trozo de cinta masking pegamos a los llados del
tapón para evitar que se caiga

4. Acomodamos los tubos en un vaso de precipitado y meter a esterilizar en condiciones

estándares, Después de esterilizar, dejar entibiar el medio manteniendo los tubos en la
gradilla para permitir que la gelificación sea en forma vertical.
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2da Sesión

Siembra en agar semisólido.

1. Antes de comenzar con nuestra siembra primero tenemos que desinfectar muy bien nuestra
área de trabajo al igual que nuestras manos para después poder sacar nuestro material
encender nuestro mechero y sacamos nuestras muestras.
2. A partir del cultivo de la práctica anterior, tomamos una asada con un asa recta, previamente
esterilizada flameamos la boca del tubo con agar semisólido e introducir el asa al centro del
tubo y sin llegar al fondo del mismo. Retíramos el asa del tubo, flamear nuevamente la boca
del tubo y taparlo.
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3. Esterilizamos el asa bacteriológica y repetimos la operación según el

número de tubos preparados.

4. Esto se hará de dos maneras las de citrato se harán por picadora y estriado mientras que el
otro solo será inclinado.

5. Una vez finalizada nuestra siembra llevamos a incubar nuestros tubos y esperamos 24hrs
para ver nuestro crecimiento.
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 Cuestionario
1.-Investigar al menos tres tipos de diferentes de asa de siembra y su uso en
microbiología
Asa recta o en hilo: Sirve para trasladar una sola colonia a medios de
identificación o subcultivo. (Fig. 1).

Fig. 1
Asa de platino en anillo: Esta se encuentra calibrada para tomar 0.001mL para
uro-cultivo. (Fig. 2).

Fig.2

Asa espatulada: Sirve para manipular colonias duras y tomar muestras.

(Fig.3).

Fig.3

Asa de alambre grueso en L: Sirve para purificar colonias de hongos y

procedimientos especiales. (Fig. 4).

Fig.4

Aguja de disección con punta aguda: Sirve para purificar colonias pequeñas y
distribuir las preparaciones de hongos en fresco. (Fig.5).

Fig.5
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Tomado de:
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2.-Investigar el nombre de tres microorganismos móviles y tres inmóviles.

Móviles
Helicobacter Pylori, las bacterias helicoidales causan inflamaciones en el
revestimiento de la mucosa intestinal.
Pseodomonas aeruginosa es una bacteria encapsulada en forma de bastón
con alta resistencia a los antibióticos, causa sepsicemia nosocomial en humanos.
Salmonella typhi, estas bacterias en forma de bastón causan la fiebre tifoidea
en los humanos, en su mayoría contaminados por hábitos de alimentación
antihigiénicos.

Inmóviles
Streptococcus pneumoniae, también conocido como neumococo es un coco
grampositivo, es una bacteria inmóvil ya que carece de flagelos en su estructura.
Coliformes, comúnmente conocidas como organismos indicadores, son
bacilos gramnegativos que no generan esporas. Dichas bacterias pueden ser
móviles o no móviles.
Clostridium perfringens es una bacteria anaeróbica grampositiva que tiene
forma de bastón y no es móvil.

3.-Investigar que otros medios de cultivo aparte del citrato de Simmons se

pueden preparar como agar inclinado o en pico de flauta.

TSI (Agar triple azúcar hierro) empleado para la diferenciación de

enterobacterias, en base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa,
lactosa y sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico (Fig.6).

Fig.6
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Lisina hierro Agar utilizado para diferenciar microorganismos,

especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación y desaminación de
la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico (Fig. 7).

(Fig. 7).
Christensen Medio (Urea), utilizado para diferenciar microorganismos en base
a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea,
tales como Proteus spp. otras enterobacterias y estafilococos (Fig.8).

(Fig.8).
Kligler Hierro Agar, es un cultivo frecuentemente usado en microbiología de
alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación
de hidratos de carbono y a la producción de ácido sulfhídrico (Fig.9).

(Fig.9).
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 Conclusión
Se concluye por logrados los objetivos al preparar dos tipos de siembras en
agar citrato e inclinado y semisólido con caldo ICC, para ambos se pesaron las
preparaciones correspondientes se calentaron en el hot play y posteriormente se
llevaron a esterilizar en la autoclave en las condiciones ya conocidas. Previo a
esto se debió enfriar el agar inclinado poniendo el tubo en cierto Angulo a modo
que el líquido quedara de 1 a 2 cm alejado de la boquilla y el semisólido quedo
totalmente vertical, se enfrío, solidifico y refrigeró. Previo a esto se procedió a la
siembra de bacillos que quedaron de la práctica anterior a esta. Se encendió el
mechero para desinfectar aza y tubos y proceder a la siembra usando una aza
recta para tomar poca muestra y picar en ambos medios exactamente por mitad,
con la diferencia que en el citrato en la parte superior inclinada se podía hacer
estrías previamente al terminar de picar. En concreto, esta práctica tuvo como
finalidad de que se observara si había crecimiento aerobio y anaerobio en los
medios.
 Referencias web

[Link]
it?rtpof=true&sd=true

[Link]
ecnm_mx/EYE0g9MAkLNCul80tNGqkAcBZHBf57xsFEsPEOMkrL5Ygg?rtime=5
uQtJb0T20g

La práctica fue realizada en dos sesiones el día 2 y 7 de marzo del presente año,
en el laboratorio de biología de las instalaciones académicas.