TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tehuacán

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

EQUIPO 6

PRÁCTICA No. 4
ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO

PRESENTAN:

PACHECO FLORES ARELY 20360438

ORTIZ MARTINEZ AIDEE JACQUELINE 20360609

MARROQUÍN REMIGIO ALEJANDRA 19361430
MONFIL CANSECO JULIO LIZANDRO 20360424
CASTRO VILLEGAS JAIR 20360348

ASESOR:
ING. ROSA MARÍA ZAVALETA MARTÍNEZ

ENERO – JUNIO

TEHUACÁN, PUEBLA, FEBRERO DEL 2023

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 Objetivo
Conocer y practicar el correcto uso de la autoclave.
 Fundamento teórico
La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo
que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilización
deficiente o manipulación incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a
contaminaciones, resultados erróneos o pérdida del material biológico. Por ello,
se requieren buenas prácticas de laboratorio para su adecuado manejo. La
esterilización por calor seco o húmedo son los métodos que se utilizan con mayor
frecuencia en el Laboratorio de Microbiología. El calor húmedo destruye los
microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares, es decir que utiliza
la coagulación en forma de vapor altamente presurizado para desnaturalizar las
proteínas dentro de los microorganismos.
La esterilización por autoclave se trata de un proceso que utiliza vapor
presurizado y altas temperaturas para conseguir descontaminar los materiales
colocados en la cámara de esterilización. Siempre hay una etapa de
vacío durante todos los ciclos en la cámara antes de la adición de vapor caliente.
Esto asegura que el vapor penetre completamente en el material y pueda
esterilizarlo correctamente. El objetivo de la esterilización es matar los patógenos
que puedan estar presentes en el material. Cuando el proceso se realiza
adecuadamente, se alcanza un alto nivel de garantía de esterilización y se
destruyen los microbios. Para que la autoclave de vapor sea efectivo, los
materiales a esterilizar deben estar saturados de vapor. Si no hay suficiente
vapor o bolsas de aire en los materiales, la descontaminación no tendrá lugar.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
C. (2022, 25 agosto). Qué es el proceso de esterilización por
autoclave. Productos y Servicios para Salas blancas y Laboratorios-
SOLMEGLAS. [Link]
esterilizacion-por-autoclave/

 Materiales

 Autoclave
 Agua destilada
 Lienzo de tela
 Tina pequeña
 Materiales preparados en la práctica anterior
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 Metodología

Colocación del material en la autoclave:

1. Introducimos a la autoclave un solamente nuestros tubos de ensayo junto a un vaso

precipitado y nuestras 3 pipetas ya que no alcanzaba para meter más material.

2. No se debe esterilizar al mismo tiempo material ya utilizado con material recién lavado y
envuelto.

3. Colocamos el material de manera espaciada sin sobrecargar la canastilla para que la

circulación del vapor sea adecuada.

Esterilización Por Calor Húmedo

1. Llenamos la autoclave con agua destilada hasta el nivel marcado.
2. Conectamos la autoclave
3. Colocamos en el contenedor de aluminio el material por esterilizar
4. Cerramos y atornillamos la tapa de la autoclave girando todas las llaves de
forma encontrada.
5. Dejamos la válvula de seguridad abierta. Y colocar el termostato al máximo
de calentamiento.
6. Una vez que este saliendo el vapor por la válvula de seguridad, esperamos
al menos 5 minutos para permitir que todo el aire del interior sea expulsado,
posteriormente cerramos la válvula (aproximadamente de 90°C)
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7. Cuando la presión fue de 1 atm o una temperatura de 121ºC,

disminuimos la intensidad de calentamiento para mantener constante las
condiciones requeridas.

NUNCA DEJAR DE OBSERVAR EL AUTOCLAVE.

8. Al finalizar el tiempo de esterilización apagamos la autoclave bajando el
termostato apagado /desc. Y desconectarlo.
9. Posteriormente abrimos la válvula de seguridad, para permitir que el vapor
remanente salga libremente.
10. Cuando la temperatura disminuya a 70 °C, abrimos la tapa. Utilizamos
guantes de carnaza o asbesto para evitar quemarnos, las llaves deben aflojarse
de la misma forma en que se apretaron, es decir, de forma encontrada.

11. AL ABRIR, COLOCAMOS A UN LADO DEL AUTOCLAVE NUNCA DE

FRENTE PARA EVITAR QUEMADURAS.
12. Aseguramos que la tapa de la autoclave se encuentre completamente
abierta.
13. Sacamos cuidadosamente la canastilla y esperar a que se enfríe.
14. Por ultimo guardamos el material ya frio en un lugar asignado por el docente.
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 Cuestionario
1.- Defina estos conceptos: Estéril, Desinfectante, Germicida, Microbiostatico,
Antiséptico.
Estéril: se conoce como un proceso físico o químico que inactiva a los
microorganismos tales como bacterias, virus y protozoos.
Germicida: Es cualquier sustancia o proceso que destruye gérmenes de las
cuales son bacterias, virus, etc., también es llamada microbicida.
Microbiostatico: Estos son los que solo detienen el crecimiento microbiano sin
matar al microbio.
Antiséptico: Es una sustancia que inhibe el crecimiento o destruye
microorganismos sobre tejido vivo.

2.- ¿Porque es importante vigilar en todo momento la temperatura y presión

del autoclave?
Se hace en dado caso de que llegue a encontrarse algún inconveniente como
𝑙𝑏
que se pase de presión la cual es a 15𝑖𝑛2 o incluso también que llegue a pasarse
de temperatura la cual es de 121°C, en el peor de los casos, el autoclave puede
llegar a explotar por no revisar estos aspectos.

3.- Describa los métodos físicos y químicos para la esterilización y ¿en qué
casos se utiliza cada una de ellas?
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MÉTODOS QUÍMICOS
1. Óxido de etileno: es un poderoso agente esterilizante gaseoso de acción
lenta, inflamable cuando aparece en concentraciones iguales o superiores al 3
%, y altamente tóxico cuando es ingerido o inhalado (mutágeno y carcinógeno).
Se utiliza en la industria de productos médicos y odontológicos para esterilizar
productos termolábiles como plástico, drogas, equipamiento electrónico, etc. La
razón de su uso es la capacidad que tiene de esterilizar a temperatura ambiente.
Su poder de penetración es alto. A este gas son permeables el polietileno, el
nailon y el celofán, por lo que se usan como embalajes. Se emplea en cámaras
parecidas a autoclave.
Su mecanismo de acción es la alquilación de la pared celular del
microorganismo tiempo de esterilización varía entre 10 a 16 h a temperatura
ambiente (25 °C).
Depende de variables como el vacío que se produce, la humedad, la
concentración del gas y la temperatura. La esterilización puede ser válida hasta
5 años, si el embalaje se ha mantenido intacto. Todos los artículos deberán
airearse por 6 h después de una esterilización.

2. Plasma de peróxido de hidrógeno. El plasma es el cuarto estado de la

materia no sólido, no líquido, no gaseoso. Consiste en un conjunto de iones,
electrones y partículas atómicas neutras que se produce mediante temperaturas
altísimas o fuertes campos electromagnéticos. Es un método reciente de
esterilización rápida, a baja temperatura, baja humedad y sin residuos tóxicos
pues sus residuos finales son oxígeno y agua).
- Mecanismo de acción: Los radicales libres, producto de la ionización del gas
por la presencia del campo magnético, interactúan con las membranas celulares,
las enzimas o los ácidos nucleicos y destruyen los microorganismos.
- Etapas del ciclo de esterilización por plasma
a. Disminución de la presión de la cámara a 300 mm Hg (vacío) y aumento de
la temperatura hasta 50 °C
b. Inyección del peróxido de hidrógeno dentro de la cámara y su posterior
evaporación
c. Difusión del gas a toda la cámara por un tiempo fijo
d. Ionización del gas mediante el campo electromagnético
e. Ventilación de la carga con aire filtrado.
Con este método es posible esterilizar instrumental sensible a la humedad,
equipos electrónicos, material cortante, instrumentos delicados e incluso cargas
con diferentes productos (vidrio, metal, plásticos). El mayor inconveniente es el
costo del equipamiento.
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Soluciones químicas (esterilización en frío): El uso de soluciones

salinas para la esterilización consiste en la inmersión del instrumental en
desinfectantes de alto nivel, los cuales tienen acción bactericida, virucida,
fungicida y esporicida.
Métodos FÍSICOS
1. Calor seco: La esterilidad se consigue por las altas temperaturas del aire.
Es un método muy usado en Estomatología. Consisten en el aprovechamiento
de calor que produce una resistencia eléctrica dentro de un recipiente
herméticamente cerrado o cuba, entrepaños para colocar instrumental,
termostato, y un regulador automático de temperatura.
2. Calor húmedo (Autoclave):
Es el medio más práctico y eficaz para la esterilización en el consultorio
estomatológico. La esterilización se logra por el vapor de agua supe calentado y
mantenido a presión, que provee una caldera de metal de paredes resistentes y
tapa de cierre hermético. Se compone de un cilindro de cobre, con una tapa en
su parte anterior, la que cierra herméticamente.

3. Radiaciones Ionizantes:
* Rayos gamma. Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria
de artículos médicos, odontológicos y farmacéuticos. Se caracterizan por una
alta energía y gran penetración. Es un método costoso.
* Rayos beta. Se usan principalmente en la industria. Su poder de
penetración es menor que el de las radiaciones gamma
* Rayos ultravioleta. Son radiaciones no ionizantes. No tienen efecto
esterilizante sobre algunos microorganismos. Son de baja energía y escasa
penetración. Su acción es superficial y se usan para mantener una baja tasa
de microorganismos en el quirófano y para mantener estéril el instrumental una
vez que ha sido ya esterilizado.

4. Ondas Supersónicas: (microondas odontológico): Este aparato está

formado por un foco emisor de alta frecuencia que causa vibraciones en las
moléculas de los microorganismos. Dichas vibraciones se transforman, por
fricción interna, en calor y de esta forma se altera y se desactiva todo tipo de
estructura viva. El instrumental se coloca en un contenedor cubierto por bolitas
de vidrio humedecidas con un líquido (ortobencil paraclorofenato de sodio). El
tiempo de esterilización es de 90 segundos.

5. Filtración: Es un proceso que impide el paso de microorganismos de un

ambiente a otro. Se utiliza en la industria farmacéutica, en soluciones
termolábiles que no pueden sufrir la acción del calor. Actualmente este método
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se usa en los compresores de aire que utilizan filtros coalescentes que

filtran partículas hasta 0,001 m (99,9 % de pureza).

6. Ebullición: se pueden usar 2 tipos de líquidos: agua y aceite.

Agua en ebullición. El agua hierve a 100ºC, este sistema ofrece todas
las garantías de esterilización siempre y cuando se cumpla el tiempo en que el
material debe permanecer en ebullición, para lograr la muerte de las bacterias,
no así las de las esporas que aún siguen resistentes. Aquí por supuesto no se
puede esterilizar gasas, artículos de papel (conos) etc. Tiempo de ebullición
establecido: 20 minutos.
Aceite en ebullición. Para esto se utiliza un aceite especial volátil,
aprovechando la ventaja de que el aceite hierve a una temperatura mayor que la
del agua, la que puede llegar a 300ºC. Desde luego, no hace falta que hierva,
basta con mantener el instrumental a 130ºC Tiempo de ebullición establecido: 20
minutos

7. Flameo: Se trata del calor que produce una llama de gas o alcohol; es un
procedimiento de emergencia y consiste en colocar directamente en la llama el
objeto que se desea esterilizar. Con la llama se consigue una temperatura muy
alta que puede exceder, en la de gas, los 1000ºC. Esta temperatura tan elevada
deteriora el instrumento, y para evitarlo, se debe colocar por encima de la llama
a fin de que no reciba directamente el calor de esta.

8. Microesferas de vidrio (esterilizadora de bolitas): Este tipo de esterilización

se realiza con un equipo que contiene un recipiente con microesferas de vidrio
que son calentadas eléctricamente y que pueden ser sustituidas por sal común
o arena. Se usa para esterilizar instrumental pequeño de Endodoncia, conos de
papel o bolillas de algodón, que se introducen en el compartimiento durante 15 a
20 segundos a temperatura de 250 °C. Su uso es cuestionado.

Tomado de, MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN, 09/19/2013. Dra. Zoila del S.

López Díaz MSc.

4.- ¿Qué es la cinta testigo, cuales son los sensores químicos, su composición
y el fundamento?
La cinta testigo se usa en el proceso de esterilización en autoclaves, esta tiene
como utilidad sujetar paquetes con una variedad de instrumentos en el proceso
de esterilización, los sensores químicos son: piezoeléctricos, electroquímicos,
ópticos.
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Los piezoeléctricos: Se encuentra compuesta por una medición de

cambios de masa que ocurren como una característica de la interacción de las
especies químicas con el sensor, se fundamentan en micro gravimetría la cual
es la medición de cambios de masa que ocurren como una característica de la
interacción de las especies químicas con el sensor.
Electroquímicos: estos se clasifican en potencio métricos, voltimetricos y
conductimétricas y su mecanismo de funcionamiento depende principalmente del
principio físico que los gobierna de acuerdo a su clasificación, presentándose
algunas semejanzas en lo que respecta a la señal medida, este tipo de sensores
se fundamenta al reaccionar con el compuesto que se desea determinar
produciendo una señal eléctrica proporcional a la concentración de gas.
Sensores ópticos: se fundamentan a la detección de un haz de luz u otras
ondas electromagnéticas durante la interacción con las especies químicas que
se desea determinar.

 Conclusión
En concreto y resumiendo lo visto en esta práctica, la docente demostró paso a paso
como hacer el uso correcto y adecuado de la autoclave, indicó cada parte que la conforman,
las medidas de seguridad a seguir para evitar quemaduras, se revisó el nivel justo de agua
necesario para que la máquina comenzará a funcionar. Se introdujo todo el material para
esterilizar, hasta que el aparato empezó a sacar vapor, posteriormente se cerró la llave del
vapor y aumento la presión a 15 libras a 121 °C, se contabilizaron 15 minutos y quedo hecha
esta práctica.

 Referencias web

[Link]
[Link]

La práctica fue realizada el día jueves 09 de febrero del presente año, en el

laboratorio de biología de las instalaciones académicas.