Bacteriófagos.
Explotan la maquinaria metabólica de la célula.
Los virus infectan todo tipo de organismos.
Modelo de estudio para la genética y bioquímica
de procesos celulares (replicación, regulación
génica), desarrollo de enfermedades.
Herramientas importantes para la genética
microbiana y la ingeniería genética.
Genomas virales: ADN o ARN, simple cadena o
doble cadena, circular o lineal.
Bacteriófago infectan bacterias y Arqueas.
Modelo de estudio de la genética y biol.
molecular de la replicación viral
Los bacteriófagos, como
su nombre lo indica, son
virus que infectan
exclusivamente a las
bacterias, cuyo material
genético puede ser RNA o
DNA, el cual está rodeado
por una envoltura proteica.
Estos fagos necesitan de
un huésped viable
(bacteria) en cuyo interior
se replican usando su
maquinaria metabólica y
de esta manera sintetizan
su propio material
genético y las proteínas
de la envoltura.
HISTORIA
Entre los años 20’s y 30’s,
d’Herelle y otros investigadores,
usaron inicialmente la fago
terapia; Eli Lilly & Company,
vendieron “Staphylo jel”, y otro
fago “Jel labeled” para el
tratamiento de infecciones por
Streptococcus y por coliformes;
E.R. Squibb & Sons y la división
Swan-Myers de Laboratorios
Abbott hicieron preparaciones de
filtrados de bacteriófagos de
Staphylococcus, y
combinaciones de filtrados de
bacteriófagos de Staphylococcus
spp. y bacilos coliformes
Entre los años 20’s y 30’s, d’Herelle y otros
investigadores, usaron inicialmente la fago
terapia; Eli Lilly & Company, vendieron
“Staphylo jel”, y otro fago “Jel labeled” para el
tratamiento de infecciones por Streptococcus y
por coliformes; E.R. Squibb & Sons y la división
Swan-Myers de Laboratorios Abbott hicieron
preparaciones de filtrados de bacteriófagos de
Staphylococcus, y combinaciones de filtrados
de bacteriófagos de Staphylococcus spp. y
bacilos coliformesEn 1913, el bacteriólogo
británico Frederick Twort descubrió un agente
bacteriolítico que infectaba y mataba a las
bacterias, pero no fue capaz de saber qué era
exactamente dicho agente.
Independientemente, el microbiólogo
canadiense Félix d’Herelle, anunció el 3 de
septiembre de 1917 su descubrimiento de “un
microorganismo invisible que antagonisaba al
bacilo de la disentería”, al cual llamó
bacteriófago.
Su tamaño oscila
entre 20 y 200 nm,
son ubicuos (están
en todas partes) y
los entes más
abundantes de la
biosfera, y se ha
estimado que existen
10 10 fagos/ litro de
agua de mar, lo que
representa un
excelente
mecanismo de
control de las
bacterias marinas
dado que destruyen
una parte de esa
población bacteriana.
El organismo humano, está acostumbrado al contacto con
los fagos dado que son consumidos regularmente en los
alimentos, por lo que son colonizadores habituales del
intestino humano, el cual contiene aproximadamente 1015
bacteriófagos (el ‘phageoma’), de aquí que no resulte
extraño que los fagos no produzcan graves efectos
inmunológicos sobre los animales.
El phageoma individual varía dependiendo de la edad y
salud de la persona, proporcionando así un biomarcador
útil de la salud humana. Durante los años 40, en la antigua
Unión Soviética, se empezó a investigar lo que se conoce
actualmente como terapia fágica, que es el uso de los
bacteriófagos para la eliminación de patógenos en
sustitución de los antibióticos.
Tipos de bacteriófagos en base a su estructura
Polihédricos: Mu, T4
(a), T2, lambda λ(b)
Filamentosos: M13
(c),
MORFOLOGÍA
Los bacteriófagos complejos
poseen una cabeza de simetría
icosaédrica que contiene el
genoma, unido a ella se
encuentra una estructura
helicoidal denominada cola, la
cual permite inyectar el
genoma viral en la bacteria
hospedera. Según el tipo de
fago, un disco se asocia a esta
cola, al cual se encuentran
unidas fibras flexibles de tipo
proteico que permiten que este
se fije a la superficie de la
bacteria y se produzca la
inyección del genoma en su
citoplasma. Los fagos de la
serie T par son ejemplos
típicos
El genoma de los fagos puede ser RNA simple
cadena (MS2, Qß), RNA doble cadena (phi 6),
DNA simple cadena (phi X174, fd, M13) o DNA
doble cadena (T3, T7, lambda , T5,Mu, T2, T4).
Los ácidos nucleicos pueden contener bases
inusuales que son sintetizadas por proteínas del
fago. En los fagos T-pares que infectan E. coli
genoma no contiene citosina, sino 5'-
hidroximetilcitosina, mientras que en otros tipos de
fago alguna de las bases esta parcialmente
sustituida.
Hay dos tipos de
bacteriófagos, los líticos o
virulentos, que infectan a las
bacterias y las matan, y los
lisogénicos o temperados,
que establecen una relación
simbiótica con la bacteria que
ataca, que tienen un ciclo
replicativo no lítico, es decir
pueden convivir con ella e
incluso pueden causar
cambios fenotípicos en estas.
Estos fagos se han aislado de
muchas especies bacterianas,
incluso de clamidias. La gama
de hospederos, morfología,
tamaño (20-2000nm) y
estrategias de replicación son
muy variadas.
•El ciclo lítico: el fago infecta a una bacteria,
la secuestra para hacer un montón de fagos y
luego mata a la célula al hacerla explotar
(lisar).
•El ciclo lisogénico: el fago infecta una
bacteria e inserta su ADN en el cromosoma
bacteriano, lo que permite que el ADN del fago
(ahora llamado profago) sea copiado y
transmitido junto con el propio ADN de la
célula.
Los fagos lisogénicos o temperados son aquellos
que bien pueden multiplicarse via el ciclo lítico o
entran en un estado quiescente en la célula. En este
estado quiescente la mayoría de los genes
del fago no se transcriben; el genoma
del fago existe en un estado reprimido.
Fagos de ciclo lítico son los que utilizan método de
reproducción viral, este es usualmente el principal
método de duplicación viral e involucra la
destrucción de células infectadas. Fase de
penetración o inyección: el ácido nucleico viral entra
en la célula mediante una perforación que el virus
realiza en la pared bacteriana
La célula que estalla, o se lisa, libera centenares de
fagos nuevos, que pueden encontrar e infectar a
otras células anfitrionas próximas.
De esta manera, unos pocos ciclos de infección
lítica pueden dejar que el fago se propague como
fuego a través de una población bacteriana.
Ciclo lisogénico
El ciclo lisogénico permite que un fago se
reproduzca sin matar a su anfitrión. Algunos fagos
solo pueden utilizar el ciclo lítico, pero el fago que
estamos analizando, lambda puede cambiar entre los
dos ciclos.
En el ciclo lisogénico, los primeros dos pasos (fijación
e inyección del ADN) ocurren tal como sucede en el
ciclo lítico. Sin embargo, una vez que el ADN del fago
está dentro de la célula, no se copia ni se expresa
inmediatamente para hacer las proteínas. En cambio,
se recombina con una región particular del
cromosoma bacteriano. Esto hace que el ADN del
fago se integre al cromosoma.
El fago con el ADN integrado, llamado profago, no
es activo: sus genes no se expresan y promueve la
producción de fagos nuevos. Sin embargo, cada
vez que una célula anfitriona se divide, el profago
se copia junto con el ADN anfitrión, sin hacer
esfuerzo alguno. El ciclo lisogénico es menos
llamativo (y menos violento) que el ciclo lítico, pero
al final del día, es solo otra manera para que el
fago se reproduzca.
En las condiciones apropiadas, el profago puede
volverse activo y salirse del cromosoma
bacteriano, lo que acciona los pasos restantes del
ciclo lítico (copiado del ADN y síntesis de
proteínas, ensamblado del fago y lisis).
¿Lisar o no lisar?
¿Cómo “decide” un fago entrar al ciclo lítico o lisogénico
cuando infecta a una bacteria? Un factor importante es el
número de fagos que infectan a la célula al mismo tiempo Una
mayor cantidad de fagos que infectan conjuntamente, hace más
probable que la infección utilice el ciclo lisogénico. Esta estrategia
puede ayudar a evitar que los fagos extingan a sus anfitriones
bacterianos (al atenuar el ataque si la proporción fago-anfitrión se
vuelve demasiado alto
¿Qué detona que un profago salga del cromosoma y se
incorpore al ciclo lítico? Por lo menos en el laboratorio, los
agentes que dañan el ADN (como la radiación UV y los productos
químicos) provocan que la mayoría de los profagos en una
población se reactiven. Sin embargo, una pequeña fracción de los
profagos en una población “se vuelve lítica” espontáneamente,
incluso sin estas señales externas.
Cuando hay muchos fagos que infectan una sola bacteria,
eso sugiere (desde el punto de vista estadístico) que los
fagos pueden estar en peligro de extinguir a sus hospederos
bacterianos.
Es menos probable que los fagos que se cambian al modo
lisogénico en respuesta a una alta multiplicidad de infección
se queden sin hospederos y “desaparezcan” como población
(porque pueden dejar de matar hospederos estratégicamente
una vez que ellos mismos se vuelven demasiado
numerosos). Particularmente, una vez que una célula tiene
un profago en su genoma, es inmune a la infección por otro
fago del mismo tipo.
Así, la tendencia codificada genéticamente a cambiar al
modo lisogénico cuando hay alta multiplicidad pudo haber
sido favorecida por la selección natural (lo cual explica por
qué los fagos la tienen hoy en día).
Ciclos de vida de los bacteriófagos:
Fagos virulentos: matan al huésped luego de la infección. Ej, fagos T (T4)
Fagos temperados: alternan entre un ciclo lítico y otro lisogénico. Ej. fago lambda (λ),
fago P1.
Infección por un fago
temperado
Bacteriófago lambda (λ)
Fago temperado que infecta células de E coli.
Mapa genético del fago λ.
El fago presenta un genoma de ADN
doble cadena lineal con extremos
cohesivos (sitios cos) que se ligan en el
citoplasma de la célula infectada dando
una estructura circular.
Bacteriófago T4
Fago T4 E. coli
• DNA lineal, doble cadena, grande
• Complejo
• Lítico
• Citocina es modificada por hidroximetil citocina
glucosilada, también fagos T2, T6
• Extremo redundantes(repetición de secuencias en
ambos extremos de la molécula
• Permutación cíclica, como en todos los fagos
• Plegamiento del DNA en rxtremo de cabeza del fago
por proteína tipo poliamina
• Llenado de cabeza mediante corte con formación de
concatámeros.
Replicación del Bacteriófago T4
Esquema del Ciclo de Replicación de un Bacteriófago T4
• El ciclo de replicación de un bacteriófago T4 se
puede dividir esquemáticamente en distintas
etapas, las que son comunes a otros virus
bacterianos y eucarióticos.
• 1. Adsorción
• 2. Inyección del material genético viral
• 3. Replicación del material genético viral
• 4. Síntesis de las envolturas proteicas
• 5. Empaquetamiento del DNA dentro de la
envoltura proteica y ensamblaje de la envoltura
• 6. Lisis y liberación de las partículas viral
Adsorción: El virus se fija o adsorbe a componentes de la superficie celular que
actúan como receptores específicos. La zona de adsorción del virus es
complementaria al receptor celular, por lo tanto un determinado virus sólo puede
infectar un número limitado de cepas celulares que contengan a un determinado
receptor. La naturaleza de la zona de adsorción varía con el tipo de fago. En el T4 se
localiza en el extremo de la cola, en donde se encuentran la placa basal, las
espículas y las fibras de la cola.
Inyección del material genético viral: Después de la adsorción, se produce un
cambio configuracional en las proteínas de la placa basal, alguna de las cuales tienen
actividad enzimática y producen un poro en la membrana citoplasmática de la célula.
La vaina del fago se contrae y el material genético viral ingresa en la célula, mientras
que la envoltura proteica queda en el exterior.
Replicación del material genético viral
El material genético viral que ingresa en una célula contiene
bases modificadas que evitan la degradación por nucleasas
bacterianas.
Esta modificación consiste en la glicosilación y/o metilación de
algunas determinadas bases. En el caso del fago T4 se
glucosila la base 5'-hidroximetilcitosina.
Para lograr una efectiva replicación del genoma viral se deben
sintetizar algunas proteínas el material genético ingresa en la
célula. Esta proteínas tempranas reparan el poro de la
membrana citoplasmática por donde ingresó el genoma viral,
degradan el DNA bacteriano lo que proporciona una fuente de
precursores, evita la síntesis de RNA y proteínas bacterianas, y
proporciona ribosomas para la síntesis de proteínas del fago.
Replicación del material genético viral(cont.)
Algunas de estas proteínas tempranas participan en la
síntesis de las bases inusuales. La forma de replicación del
genoma viral es dependiente del tipo de material genético (si
es RNA o DNA, si es simple o doble cadena).
En el caso del fago T4, las moléculas replicadas se aparean
en los extremos y formando una molécula de DNA más larga
denominada concatámero. Después una enzima corta esta
larga molécula lineal en moléculas más pequeñas de igual
longitud. Las moléculas de DNA del T4 se caracterizan por
estar permutadas circularmente (el DNA del T4 es lineal) de
esta forma todas las moléculas de DNA resultantes contienen
genes completos y funcionales.
La enzima del T4 que corta al concatámero produce
moléculas de DNA de tamaños similares pero no reconoce
sitios específicos sobre la molécula, en cambio la enzima del
T7 reconoce sitios específicos sobre el DNA.
Síntesis de las envolturas proteicas
Las proteínas de la envoltura (cápside, vaina,
fibras, etc) son proteínas tardías que se sintetizan
después de iniciada la replicación del material
genético.
La síntesis de cada componente proteico se
realiza separadamente.
En el caso del fago T4, el material genético es
encapsidado antes del ensamble del resto de los
componentes.
Ensamble
Todas las proteínas de la envoltura se ensamblan para
formar una partícula viral madura capaz de infectar a otra
célula cuando sea liberada.
Lisis celular y liberación de las partículas virales
La lisis celular se debe a la síntesis de proteínas tardías
codificadas en el genoma del fago.
En el fago T4, estas proteínas son enzimas que lesionan la
membrana citoplasmática y la pared celular.
Fago lambda-E. coli
• Constituido de ADN lineal de doble cadena
• Fago temperado
• Forma de replicarse círculo rodante o theta bidireccional
• DNA con dos componentes: un segmento de doble cadena(48000pb)
de secuencias conocidas; y dos prolongaciones de cadena sencilla con
12 nucleótidos conocidos como secuencias “cos”
• Genes agrupados según función
• Secuencias “ter” para empaquetamiento
• Dos ciclos de vida: lisogenico con integración al ADN bacteriano, o
• Sin integración comportandose como plásmido(P1)
• Inmunidad
• Control de ciclo lítico y lisogénico mediante proteínas reguladoras
represor y cro
• Mapa presenta genes reguladores cro, n, q
Fago λposee dos modos de replicación: (a) en Ensamblado del Fago λ. Una enzima viral
estadios tempranos de la infección y (b) al final. corta el ADN doble cadena comprendido
El mecanismo de circulo rodante produce entre 2 sitios cos.
concatenados del genoma viral que son
procesados
En la bacteria, las extremidades cos del fago se aparejan para
formar una molécula circular. Los enlaces diésteres se realizan
por la ligasa y el ATP de la bacteria hospedadora del fago. En
éste estado, el fago puede seguir sea la vía lítica ó la vía
lisogénica.
Fago lambda lisogènico
El ADN del fago puede integrarse al genoma de la bacteria. El por
qué de la elección del fago por la vía lítica ó la vía lisogénica es
todavía estudiado y poco conocido al presente.
Recombinación con el cromosoma de la E. coli :
En la vía lisogénica, una recombinación se produce entre el ADN
circulair del fago y el cromosoma de la E. coli gracias a una
sequencia corta denominada "att" presente a la vez en ambos
genomas: en el de la bacteria y en el del fago.
El gen cI codifica un represor del ciclo lítico:
El ADN del fago insertado en el cromosoma bacteriano se
denomina un profago. La bacteria que contiene un profago se la
conoce como lisógena. El genoma del fago es replicado y
transmitido de una bacteria a la otra sin importar el gen del
cromosoma bacteriano. A lo largo de la fase lisogena, el único
gen de bacteriófago expresado es el gen cI que codifica un
represor. Ese represor bloquea la transcripción precóz de genes
del ciclo lítico y por consequencia también bloquea la expresión
CÓMO SE INDUCE LA VIA LITICA
El profago se integra bien justo hasta el
momento en que una señal induce su
expresión. Si se expone la bacteria a agentes
que, como la luz ultravioleta, dañan el ADN, el
represor cI sufre una separación proteolítica por
la proteína bacteriana RecA. La inactivación del
represor permite la transcripción de genes
tempranos.
Se observa luego de la inducción una reversión
del proceso de crossing-over que conduce a la
excisión de ADN del fago que entra entonces en
la vía lítica.
Morfología Pi- El virión
es similar en estructura
al fago T4 pero más
simple. Tiene una
cabeza icosaédrica
que contiene el
genoma unido a un
vértice de la cola. La
cola tiene un tubo
rodeado por una vaina
contráctil. Termina en
una placa base con
seis fibras de cola. Las
fibras de la cola están
involucradas en
adherirse al anfitrión y
proporcionar
especificidad.
P1 fue descubierto en 1951 por Giuseppe Bertani en el
laboratorio de Salvador Luria , hasta que, también del grupo de
Luria, demostró en 1954-5 que podía transducir material
genético entre bacterias hospedadoras. Este descubrimiento
llevó a que el fago se utilizara para el intercambio genético y el
mapeo del genoma en E. coli , y estimuló su estudio adicional
como organismo modelo. En la década de 1960, Hideo Ikeda y
Jun-ichi Tomizawa mostraron que el genoma del ADN del fago
era lineal y de doble hebra, con redundancia en los extremos.
En la década de 1970, Nat Sternberg caracteriza los Cre- lox
recombinación específica de sitio de sistema, que permite que
el genoma lineal se circularise para formar un plásmido
después de la infección. Durante la década de 1980, Sternberg
desarrolló P1 como vector para clonar grandes trozos de ADN
eucariota. Michael Yarmolinsky y Małgorzata Łobocka
publicaron en 1993 un mapa del gen P1 basado en una
secuencia de ADN parcial, y Łobocka y sus colegas
secuenciaron completamente el genoma en 2004.
Genoma El genoma del fago P1 es moderadamente grande, alrededor
de 93 Kbp de longitud (en comparación con los genomas de, por ejemplo,
T4 - 169 Kbp, lambda - 48 Kbp y Ff - 6,4 Kbp). En la partícula viral tiene la
forma de una molécula de ADN de doble hebra lineal. Una vez insertado en
el anfitrión, se circulariza y se replica como un plásmido. En la partícula
viral, la molécula de ADN es más larga (110 Kbp) que la longitud real del
genoma. Se crea cortando un fragmento de tamaño apropiado de una
cadena de ADN concatemérico que tiene múltiples copias del genoma
Debido a esto, los extremos de la molécula de ADN son idénticos. Esto se
conoce como redundancia terminal. Esto es importante para que el ADN se
circularice en el anfitrión. Otra consecuencia de la extracción del ADN de
un concatámero es que una molécula lineal determinada puede comenzar
en cualquier lugar del genoma circular. Esto se denomina permutación
cíclica. El genoma es especialmente rico en secuencias Chi reconocidas
por la recombinasa bacteriana RecBCD . El genoma contiene dos orígenes
de replicación: oriR que lo replica durante el ciclo lisogénico y oriL que lo
replica durante la etapa lítica. El genoma de P1 codifica tres ARNt que se
expresan en la etapa lítica. El genoma de P1 codifica 112 proteínas y 5
genes no traducidos y es aproximadamente el doble del tamaño del
bacteriófago lambda.
P1 es un bacteriófago templado que infecta a Escherichia coli y
algunas otras bacterias. Cuando se somete a un ciclo
lisogénico, el genoma del fago existe como un plásmido en la
bacteria a diferencia de otros fagos (por ejemplo, el fago
lambda ) que se integran en el ADN del huésped. P1 tiene una
cabeza icosaédrica que contiene el ADN unido a una cola
contráctil con seis fibras de cola.
El fago P1 ha ganado interés en la investigación porque puede
usarse para transferir ADN de una célula bacteriana a otra en
un proceso conocido como transducción . A medida que se
replica durante su ciclo lítico, captura fragmentos del
cromosoma del hospedero. Si las partículas virales resultantes
se utilizan para infectar a un hospedero diferente, los
fragmentos de ADN capturados pueden integrarse en el
genoma del nuevo hospedero. Este método de ingeniería
genética in vivo se utilizó ampliamente durante muchos años y
todavía se utiliza en la actualidad, aunque en menor medida
P1 también puede
usarse para crear el
vector de clonación de
cromosomas
artificiales derivado de
P1 que puede
transportar fragmentos
relativamente grandes
de ADN. P1 codifica
una recombinasa
específica de sitio,
Cre, que se usa
ampliamente para
llevar a cabo la
recombinación de
ADN específica de
célula o específica de
tiempo flanqueando el
ADN diana con sitios
loxP.
El fago P22 es un virus bacteriófago lisogénico, cuyo material
genético es una doble cadena linear de ADN. Infecta a
Salmonella uniéndose al antígeno O, que es parte de los
lipopolisacáridos de la membrana externa. Cuando la célula se
lisa, se liberan 50-100 nuevos fagos.
Este virus puede generar proceso de transducción
generalizada.
En realidad, cuando se ensambla el virus, los enzimas
encargados de reconocer el sitio pac de su genoma también
pueden reconocer, aunque con mucha menos frecuencia, otros
sitios pac presentes en el genoma de Salmonella. Se crea una
competencia y en ocasiones se empaquetan en
la cápside fragmentos del genoma de Salmonella. De esta
forma cuando esta partícula infecta a otra bacteria, le inyecta el
genoma de la anterior, pudiendo incorporarse al genoma de la
célula hospedadora.
P22 tiene un cromosoma de ADN lineal de doble
hebra dentro de su virión que tiene
aproximadamente 44 kilobases de largo con
extremos romos y un mapa genético circular. Sin
embargo, su secuencia de nucleótidos de "tipo
salvaje" tiene una longitud de aproximadamente 42
kilobases.
Se ha secuenciado el genoma de P22 y se han
anotado sesenta y cinco genes. Los resultados de
la secuenciación apoyan la hipótesis de que el fago
P22 es un virus que ha evolucionado mediante una
extensa recombinación con otros virus.
Aplicación a la investigación genética de
Salmonella
La transducción se ha utilizado ampliamente en
genética bacteriana y es útil en la construcción de
cepas.
En general, la transducción dentro de cada especie
bacteriana requiere el uso de un fago específico; por
ejemplo, P22 se ha utilizado para la transducción en
S. enterica sv. typhimurium.
Un factor significativo en el desarrollo de la genética
de S. enterica ha sido la facilidad de uso de P22 para
cruces transduccionales. En particular, P22 es estable
en almacenamiento, se obtienen fácilmente reservas
de alto título y se han aislado mutantes deficientes en
integración y transducción de alta frecuencia (HT)
Fago T7-E. coli
• Fago virulento
• Presenta ADN bicatenario, linea
• Tamaño medio
• No presenta bases raras
• Tiene redundancia terminal de 160pb
• Pocos genes, 92% codifican para proteínas
• No presenta permutación cíclica
• Se conoce secuencia completa de 40,000pb, permitiendo ubicar sitios de
promotores, lugar de terminación, sitios reguladores, codones de inicio y
terminación
• Mecanismo de transcripción en tres etapas:
• 1-transcripto 1° mediante RNA polimerasa de la bacteria
• 2-producción de transcripto II, a apartir del 1°
• 3-Síntesis de transcripto III
• Presenta superposición de genes, replicación inicia en origen único y
procede bidireccionalmente.
Fago X174-E. coli
• Presenta DNA hebra simple, circular, monocatenario
• Primer organismo con ADN de hebra simple, conocida
como hebra positiva de secuencia conocida
• Replicación en círculo rodante en bucle
• Primero en replicarse in vitro
• Pequeño
• Presenta pocos genes (11),
• Presenta superposición de genes
• Ciclo de vida sencillo
• Replicación para formación de RF
• Toda replicación produce hebra negativa, usando
enzimas de la bacteria hospedadora
Fagos filamentosos M13, f,fd
• Tienen DNA de cadena simple, lineal
• Simetria helicoidal
• Infectan células masculinas entrando por piliF(DNA se
circulariza)
• Extremos de DNA presenta poco o ningún
apareamiento
• Replicación en círculo rodante
• Particulas virales son liberadas sin matar la célula
hospedadora por extrución, en extremo de proteína A.
• Muy usado como vehículo de clonación
Fago MS2
• Presenta RNA de cadena sencilla, lineal, que es
hebra codificadora
• No posee bases raras
• Sencillo
• Pequeño de 4000 nucleótidos
• Ataca células masculinas entrando por los lados
• Codifica para 4 proteínas(cubierta, lisis, maduración
y replicasa)
• Regulación traduccional, mediante la formación de
estructura secundaria en RNA
Estructura
Un virión MS2 (partícula viral) tiene
aproximadamente 27 nm de diámetro, según lo
determinado por microscopía electrónica. Consiste
en una copia de la proteína de maduración y 180
copias de la proteína de la cubierta (organizadas
como 90 dímeros) dispuestas en una capa
icosaédrica protegiendo el ARN genómico en su
interior. La estructura de la proteína de la cubierta es
una hoja β de cinco hebras con dos hélices α y una
horquilla . Cuando se ensambla la cápside , las
hélices y la horquilla miran hacia el exterior de la
partícula, mientras que la hoja β mira hacia el
interior.
El genoma de MS2 es uno de los más pequeños conocidos, y
consta de 3569 nucleótidos de ARN monocatenario. Codifica
solo cuatro proteínas: la proteína de maduración (proteína A),
la proteína de lisis , la proteína de la cubierta y la proteína
replicasa . El gen que codifica la proteína de lisis ( lys ) se
superpone tanto al extremo 3 'del gen cadena arriba ( cp )
como al extremo 5' del gen cadena abajo ( rep ), y fue uno de
los primeros ejemplos conocidos de genes superpuestos . El
genoma de ARN de hebra positiva sirve como ARN mensajero
y se traduce tras el desencadenamiento viral dentro de la
célula hospedadora. Aunque las cuatro proteínas están
codificadas por el mismo ARN mensajero / viral, no todas se
expresan en los mismos niveles; La expresión de estas
proteínas está regulada por una interacción compleja entre la
traducción y la estructura secundaria del ARN
MS2 infecta bacterias entéricas que portan el factor
de fertilidad (F) , un plásmido que permite que las
células sirvan como donantes de ADN en la
conjugación bacteriana . Los genes del plásmido F
conducen a la producción de un pilus F , que actúa
como receptor viral.
La MS2 se adhiere al costado del pilus a través de
su única proteína de maduración. Se desconoce el
mecanismo preciso por el cual el ARN del fago
ingresa a la bacteria. Una vez que el ARN viral ha
ingresado a la célula, comienza a funcionar como
ARN mensajero para la producción de proteínas de
fagos.
Fago Mu
• Es fago temperado
• Se replica como transposón
• Posee DNA grande
• Bicatenario, que se acomoda como lineal de
cadena sencilla
• Induce mutación en célula hospedadora,
provocando inactivación de algunos genes.
Cuantificación de fagos mediante el ensayo de la “placa”
Placa: área clara (lisis) sobre el césped
de células sensibles. Se asume que cada
placa se originó de la replicación de
único virus.
Bacteriófagos frente a antibióticos
Antes de que los antibióticos fueran descubiertos,
había investigación considerable sobre los
bacteriófagos como tratamiento para las
enfermedades bacterianas humanas. Los
bacteriófagos atacan solamente a sus bacterias
anfitrionas, no a las células humanas, así que
potencialmente son buenos candidatos para tratar
enfermedades bacterianas en seres humanos.
Después del descubrimiento de los antibióticos, la
estrategia de los fagos fue en gran parte
abandonada en muchos lugares del mundo
(particularmente países de habla inglesa).
Sin embargo, los fagos se siguieron usando para
propósitos médicos en varios países, que
incluyen Rusia, Georgia y Polonia, en donde
siguen en uso actualmente
Está aumentando el interés para
regresar a la “estrategia de los fagos” en
otras partes, a medida que las bacterias
resistentes a los antibióticos se vuelven
un problema cada vez mayor.
Todavía se necesita investigación para
saber qué tan seguros y efectivos son
los fagos, pero ¿quién sabe? Un día, ¡tu
doctor podría recetarte fagos en lugar
de penicilina!