UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA

TITULO

“COMPARACIÓN DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE

PLAQUETAS EN MUESTRAS DE PACIENTES ATENDIDOS
EN EL HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO – 2017”

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN PRESENTADO POR

AUTOR

SALAS VELÁSQUEZ, Briseth Carhet

ESPECIALIDAD
LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA

ASESOR
Lic. T.M. TORRES GARIBAY, Jose Daniel

CO ASESOR
Dra. GIL FERNANDEZ BACA, Mirian

CUSCO – PERÚ
2018
Dedico este trabajo a los forjadores de mi
camino, quienes siempre me acompañan en
cada paso que doy: Heberth y Carmen; al
guiarme por el buen camino y darme las
fuerzas para seguir adelante enseñándome a
no ceder ante las adversidades, a quien les
debo todo lo que soy, no solo como persona
sino como profesional.

A mis abuelitas Carmen y Antonia por su

apoyo, palabras de aliento, consejos, paciencia
y compresión.

II
Agradezco a mis padres por guiarme en el
camino para lograr una meta como es mi
profesión con ejemplo de perseverancia y por
convertirse en los promotores de mis sueños;
tuve caídas y en ello encontré personas que
con sus palabras y su apoyo ayudaron al
culmino de este trabajo de investigación por lo
que agradezco a un gran amigo; German
Salinas, a mis hermanos, amigas que fueron
mi mano firme para seguir adelante, a mis
asesores que pese a los caídas, errores
cometidos en la elaboración de la tesis con su
paciencia, enseñanza y guía se pudo culminar
este proyecto.

III
 PRESENTACIÓN

SEÑOR VICERRECTOR DE LA UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FILIAL CUSCO,

SEÑOR DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MEDICA,
DISTINGUIDOS MIEMBROS REVISORES DEL PRESENTE TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN.
En cumplimiento a los dispositivos legales vigentes y el reglamento general de grados y
títulos de la Escuela profesional de Tecnología Médica a nivel de pregrado, referente a la
obtención del título de Licenciado en Tecnología Médica especialidad de Laboratorio clínico
y anatomía patológica, pongo a vuestra consideración el presente trabajo de investigación que
lleva por título:
“COMPARACIÓN DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS EN
MUESTRAS DE PACIENTES ATENDIDOS EN EL HOSPITAL REGIONAL DEL
CUSCO – 2017”.
El trabajo de investigacion cumple con aportar nuevos conocimientos que serviran como una
base de informacion y de referencia para estudios posteriores y permitir reforzar los
conocimientos para futuros profesionales del Area de Laboratorio Clinico y Anatomia
Patologica mejorando asi espectos cientificos y tecnicos, los resultados de esta investigacion
tambien podran ser utilizados en estudios inherentes.

La autora

IV
 RESUMEN

El presente trabajo fue realizado en el Hospital Regional del Cusco, Departamento de Apoyo
al Diagnostico, Servicio de Patología Clínica – Laboratorio clínico, área de Hematología de
mencionado centro nosocomial, para lo cual se utilizaron muestras sanguíneas de pacientes
atendidos y las mismas que fueron procesadas en dicho servicio con el objetivo de determinar
y comparar la relación que existe en la aplicación del método Brecher & Cronkite
(metodología determinada como el Gold estándar para el recuento de plaquetas), en contra
posición a los métodos manuales Masper & Jamra (método directo), Fonio y método de
Dameshek (métodos indirectos) y el método automatizado en un equipo hematológico de 5
estirpes celulares (MINDRAY BC 5380) para el recuento de plaquetas.

Se analizaron 138 muestras de sangre venosa, entre los meses de Octubre y Noviembre del
2017, las cuales fueron procesadas de manera independiente por cada uno de los métodos
mencionados. Con los resultados obtenidos se realizó el análisis de regresión lineal,
coeficiente de correlación y el coeficiente de variación para determinar su relación y
reproducibilidad.

Concluimos que la comparación de metodologías mostró una correlación positiva

mayoritariamente muy alta, al ser comparado con la metodología Gold estándar (Brecher &
Cronkite), resultando factible el uso de la metodología manual (directa e indirecta) y la
metodología automatizada por presentar una valoración similar.

Asimismo, la mayor correlación entre los métodos manuales, directos e indirectos, y el

método automatizado se observó en la técnica de Brecher y Cronkite, considerado el Gold
estándar y el método de Fonio, el cual requiere menor cantidad de insumos para su cálculo.

Palabras clave: Recuento de Plaquetas, Grado de Correlación, Coeficiente de variación.

V
 ABSTRACT

The present work was carried out in the Clinical Pathology Service - Clinical Laboratory, in
the area of Hematology of the Regional Hospital of Cusco, in which blood samples from
patients processed in said service were used, in order to determine the relationship that exists
in the application of the Brecher & Cronkite method (methodology determined as the gold
standard for the platelet count), in contrast to the manual methods Masper & Jamra (direct
method), Fonio and Dameshek method (indirect methods) and the automated method of
hematological equipment of 5 cell lines (MINDRAY BC 5380) for the platelet count.

138 venous blood samples were analyzed, between the months of October and November
2017, which were processed independently by each of the methods mentioned. With the
results obtained, the linear regression analysis, correlation coefficient and the coefficient of
variation were performed.

It was concluded that the comparison of methodologies showed a positive correlation mostly
very high, when compared to the gold standard methodology (Brecher & Cronkite), being
feasible the use of manual methodology (direct and indirect) and automated methodology by
present a similar assessment.

Likewise, the greater correlation between manual methods, direct and indirect, and the
automated method was observed in the Brecher and Cronkite technique, considered the
standard Gold and the Fonio method, which requires less quantity of inputs for its calculation.

Key words: Platelet Count, Degree of Correlation, Coefficient of variation.

VI
 INTRODUCCIÓN

Considerado como un problema, así como las falencias y limitaciones de los laboratorios
clínicos de nuestra Región se realiza el presente trabajo de investigación titulado:
“COMPARACIÓN DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS EN
MUESTRAS DE PACIENTES ATENDIDOS EN EL HOSPITAL REGIONAL DEL
CUSCO – 2017”, que se basa en identificar el grado de correlación entre los métodos
manuales en comparación al método automatizado en el recuento de plaquetas siendo estos
fragmentos citoplasmáticos anucleados producidos de la ruptura y liberación del citoplasma
de los megacariocitos los cuales son esenciales para la coagulación sanguínea ya que
intervienen formando un tapón hemostático en el sitio de la lesión (1), es por ello que este
trabajo de investigación busca determinar el número de trombocitos en un volumen
determinado de sangre, utilizando diferentes métodos manuales.

Se evidencia que en los diferentes laboratorios que no cuentan con automatización, se utiliza
distintos métodos manuales para el recuento de plaquetas los cuales estarán clasificados en
métodos directos que se caracteriza cada uno por la solución diluyente que utilizan, y los
métodos indirectos caracterizados por la utilización de diferentes parámetros del hemograma.

Cabe mencionar que cada personal encargado utiliza el método que considera conveniente o
práctico, por lo cual se llega a identificar variaciones en los resultados de un mismo paciente
en la lectura del número de plaquetas.

El objetivo de esta investigación es de determinar la relación que existe en la aplicación del

método Brecher & Cronkite (metodología determinada como el Gold standard para el
recuento de plaquetas), en contra posición a los métodos manuales Masper & Jamra (método
directo), Fonio y método de Dameshek (métodos indirectos) y el método automatizado del
equipo hematológico de 5 estirpes celulares (MINDRAY BC 5380) para el recuento de
plaquetas, tomándose como muestra de estudio aquellos resultados hematológicos de
pacientes atendidos en edad adulta joven comprendidos entre 20 a 40 años de edad, rango de
edad que constituye como el de mayor capacidad física, y corresponde a la inserción activa
del hombre en el mundo laboral y social, (según Erick Ericson - Kaplan-Sadock en su
publicación sobre la Teoría psicosocial “Sinopsis de psiquiatría. Ciencias de la conducta/ y
Psiquiatría clínica Holland; jmclih, 2006.

VII
Donde se analizará el coeficiente de variación, el coeficiente de correlación y la
interpretación de esta, para identificar la eficacia de cada uno de estos métodos teniendo en
cuenta también el tiempo de procesamiento y lectura de cada uno de estos.

Para alcanzar los objetivos se realizó una investigación descriptiva, transversal y

correlacional, a través de la recolección de datos mediante la aplicación de una ficha de
evaluación, utilizando un instrumento confiable y valido.

En el CAPITULO I, se desarrolló el planteamiento de problema de la investigación; donde

se describe la situación problemática, se formulan los problemas, objetivos del estudio, para
finalmente exponer la justificación e importancia del mismo; además de mencionar las
delimitaciones y limitaciones relacionadas con el estudio.

En el CAPITULO II, el desarrollo del marco teórico conceptual, se ha estructurado

tomando en consideración criterios metodológicos para el desarrollo, los antecedentes del
estudio a nivel internacional, nacional y local, las consideraciones del marco legal y el
desarrollo de las bases teóricas científicas a partir de las fuentes utilizadas para el desarrollo
de temas de estudio comprendidas variables de estudio hasta la delineación del marco
conceptual.

En el CAPITULO III, se formularon las hipótesis e identificaron las variables de la

investigación, para desarrollar la respectiva operacionalización de las mismas; se presenta
también una matriz de consistencia que resume el cuerpo básico de la investigación.

En el CAPITULO IV, se describió el diseño metodológico de la investigación, especificando

el tipo y diseño de investigación, la unidad de análisis, población y muestra; así como
también las técnicas de recolección de datos, el análisis e interpretación de la información.

En el CAPITULO V, se realizó el procesamiento y análisis de resultados, para lo que se

expone la descripción, análisis e interpretación de resultados.

Finalmente se formula las CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES a las que se

arribó después de realizar el trabajo de investigación.

Además se presentan las REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Y LOS ANEXOS con

información complementaria y otras que puedan optimizar la comprensión del estudio.

VIII
 ÍNDICE

Resumen................................................................................................................................... v

CAPÍTULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. Descripción de la realidad problemática. ....................................................................... 1

1.2. Formulación del problema ............................................................................................... 3

1.2.1. Problema general: ................................................................................................... 3

1.2.2. Problemas específicos: ............................................................................................ 3

1.3. Objetivos:........................................................................................................................... 4

1.3.1. Objetivo general: ..................................................................................................... 4

1.3.2. Objetivos específicos: ............................................................................................. 4

1.4. Justificación e importancia del estudio: ......................................................................... 5

1.4.1. Justificación teórica ................................................................................................ 5

1.4.2. Justificación práctica ............................................................................................... 6

1.4.3. Justificación metodologica...................................................................................... 6

1.5. Delimitación del problema de investigación ................................................................... 6

1.5.1. Delimitación espacial: ............................................................................................. 6

1.5.2. Delimitación temporal: ........................................................................................... 7

1.5.3. Delimitación social ................................................................................................. 7

1.6. Limitaciones de la investigación ...................................................................................... 7

CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO Y CONCEPTUAL

2.1. Antecedentes del trabajo de investigación ...................................................................... 8

2.2. Bases teóricas científicas ................................................................................................ 10

2.3. Marco conceptual ............................................................................................................ 34

CAPÍTULO III: HIPÓTESIS Y VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN

3.1. Hipótesis de la investigación .......................................................................................... 37

IX
 3.1.1. Hipótesis general ................................................................................................... 37

3.1.2. Hipótesis específicas: ............................................................................................ 37

3.2. Variables del trabajo de investigación .......................................................................... 38

CAPITULO IV: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

4.1. Tipo, nivel y diseño de investigación ............................................................................. 40

4.1.1. Tipo de investigación ............................................................................................ 40

4.1.2. Nivel de investigación........................................................................................... 40

4.1.3. Diseño de investigación ........................................................................................ 40

4.2. Universo, población y muestra de estudio .................................................................... 41

4.2.1. Universo ................................................................................................................ 41

4.2.2. Población............................................................................................................... 41

4.2.3. Muestra ................................................................................................................. 41

4.3. Métodos, técnicas e instrumentos de colecta de DATOS ............................................ 43

4.3.1. Diseño y elaboración de los instrumentos de recojo de información.................... 43

4.3.2. Validación de los instrumentos de recojo de información .................................... 45

4.3.3. Aplicación y recojo de la información requerida ......................................... 45

4.3.4. Técnicas e instrumentos de colecta de información..................................... 45

4.4. Técnicas de análisis de los datos obtenidos................................................................... 45

4.5. Aspectos Eticos ............................................................................................................... 44

CAPÍTULO V: ANÁLISIS DE RESULTADOS

5.1. Resultados........................................................................................................................ 47

5.2. Comprobación de hipótesis ............................................................................................ 57

DISCUSIONES ...................................................................................................................... 61

CONCLUSIONES ................................................................................................................. 63

RECOMENDACIONES ....................................................................................................... 66

BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................... 67

X
ANEXOS ............................................................................................................................... 70

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 01: Ilustración de la producción de plaquetas ......................................................... 16

FIGURA 02: Fotografia de las plaquetas................................................................................ 17

FIGURA 03: Lectura en cámara en hemocito metro o cámara de Neubauer .................................... 22

FIGURA 04: Lectura en cámara en Neubauer por el método de Masper y Jamra ............................. 25

FIGURA 05: Representación gráfica del procesamiento de frotis de sangre periférica .................... 26

FIGURA 06: Fotografía de la observación de plaquetas por el método de Dameshek ...................... 27

FIGURA 07: Fotografía de la observación de plaquetas por el método de Fonio ............................. 28

FIGURA 07: Esquema grafico del principio de Coulter .................................................................... 29

LISTA DE TABLAS

Tabla 01: Factores de conversión plaquetas/mm3 plasma para plaquetas/ mm3 sangre, por
hematocrito. ............................................................................................................................. 23

Tabla 02: Escala de interpretación del valor de Correlación de Karl Pearson ........................ 44

Tabla 03: Comparacion del coeficiente de correlacion, media, desviacion estandar y el

coeficiente de variacion obtenidos en el recuento plaquetario con los metodos manuales y el
equipo automatizado, de las muestras procesadas en el servicio de Hematología de pacientes
atendidos en el laboratorio del Hospital Regional del Cusco – 2017. ..................................... 48

XI
 LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 01: Regresión lineal del equipo automatizado en comparacion con el metodo de
Brecher & Cronkite .................................................................................................................. 49

Gráfico 02: Regresión lineal del método de Masper y Jamra en comparación con el método
de Brecher & Cronkite ............................................................................................................. 51

Gráfico 03: Regresión lineal del método de Fonio en comparación con el método de Brecher
& Cronkite ............................................................................................................................... 51

Gráfico 04: Regresión lineal del método de Dameshek en comparación con el método de
Brecher & Cronkite .................................................................................................................. 52

Gráfico 05: Campana de Gaus del método automatizado en comparación con el método
de Brecher & Cronkite… ........................................................................................................ 53
Gráfico 06: Campana de Gaus del método de Masper & Jamra en comparación con el
método de Brecher & Cronkite ............................................................................................... 54
Gráfico 07: Campana de Gaus del método de Fonio en comparación con el método de
Brecher & Cronkite… ............................................................................................................. 55

Gráfico 08: Campana de Gaus del método de Dameshek en comparación con el método
de Brecher & Cronkite… ........................................................................................................ 56

XII
 CAPÍTULO I

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. Descripción de la realidad problemática.

En la actualidad, los servicios de salud en los centros de atención medica presentan
marcada deficiencia en cuanto a sus prestaciones de servicios, estos se podrían evidenciar en
sus distintas áreas de atención pero con más relevancia en un área de vital importancia como
es el caso del servicio de Laboratorio Clínico, estas deficiencias que datan de diversa
casuística pueden ser; de índole presupuestario, de gestión administrativa entre otros y
permite contar con los insumos, materiales e instrumentos necesarios para brindar una
atención de calidad a los pacientes que recurran a los ya mencionados; es por ello que
dependerá de la experiencia del personal que labora para cumplir con la demanda y
confiabilidad en los distintos procedimientos analíticos que se debe brindar a los pacientes y
haciendo un hincapié en que dadas las condiciones de equipamiento deficiente sería casi
imposible que los sistema automatizados inclusive puedan llegan a los establecimientos
lejanos de manera tal que esta condición obliga al personal a que se continúe laborando con
información empírica transmitida de generación en generación por los profesionales que
laboran en dichos establecimientos.
La necesidad actual de los pacientes en los laboratorios clínicos requieren la obtención de
resultados precisos que permitan coadyuvar a la función de los profesionales en la rama, para
determinar diagnósticos y tratamientos precisos, basados en metodologías eficaces y efectivas
a realizar y no de manera empírica.
Hoy en día existen laboratorios clínicos que no cuentan con equipos automatizados, por lo
que aún deben de manejar métodos manuales para realizar los exámenes que proporcionan a
los pacientes.
Los valores de estas pruebas permiten determinar el estado de salud de una persona, la
normalidad o anormalidad de la misma, se establece en base a rangos referenciales que se

1
manejan tanto en los laboratorios clínicos como en los consultorios médicos; estos rangos
referenciales utilizados en nuestro medio son obtenidos de investigaciones realizados en otros
países, hasta la actualidad no existe un criterio unánime en el momento de aplicar los
mismos.
Poniendo énfasis en el área de hematología, se encuentran disponibles diferentes
metodologías manuales de las cuales solo una técnica esta estandarizada para laboratorios no
automatizados con recursos limitados, resaltando que por falta de economía y por la premura
del tiempo la mayoría de ellos utilizan diferentes técnicas sin un respaldo científico.
Teniendo en cuenta que, la prueba rutinaria y más solicitada dentro del área de hematología
es el examen de hemograma completo ya que este es uno de los estudios que mayor
información aporta al médico, sobre la homeostasis de un individuo, siendo éste sujeto a
varias modificaciones a través del tiempo en cuanto a los parámetros que lo componen, la
forma de obtenerlos (metodología de procesamiento), los grados de precisión y de exactitud y
la manera de interpretarlo. Este examen se define como el análisis cuantitativo y cualitativo
de los componentes celulares de la sangre periférica, básicamente de los glóbulos rojos,
glóbulos blancos y las plaquetas.
Al realizar el recuento de plaquetas, el método más utilizado por su bajo costo y rapidez es el
indirecto, en el cual se utiliza una lámina portaobjetos con un extendido adecuado de la
muestra, coloreada con Wright o Giemsa, aunque existen otros procedimientos como el
método directo que utiliza cámara de Neubauer la cual esta estandarizada, siendo uno de sus
principales inconvenientes el tiempo de procesamiento.
Para el recuento de plaquetas existen diversas metodologías en la literatura como el método
de Brecher & Cronkite, método de Masper y Jamra, método de Dameshek y el método de
Fonio, cada una presenta una serie de inconvenientes que, ya sea por tiempo, costo,
manipulación, etc., no son utilizadas por los responsables encargados de realizar dicho
examen, por lo que recurren al uso del método más viable a sus posibilidades dejando de lado
la importancia de la eficacia y precisión de cada uno de estos.
En la práctica clínica se observa una variación inter laboratorial, que se ve influenciado por
diversos factores, siendo el más recurrente la lectura o recuento de las plaquetas donde estos
factor son dependientes de la pericia del personal profesional, donde se observa variaciones
de hasta un 25% entre resultados.
En el Hospital Regional del Cusco, para realizar el recuento de plaquetas, se utiliza el método

2
indirecto por su fácil manipulación, bajo costo y rapidez, en el cual se utiliza una lámina
portaobjetos con un extendido adecuado de la muestra coloreada con Wright o Giemsa:
aunque existen otros procedimientos como el método directo que utiliza cámara de Neubauer
la cual esta estandarizada, siendo uno de sus principales inconvenientes el tiempo que demora
en su procesamiento y lectura. Dichas metodologías presentan deficiencias muy perjudiciales
dentro de las cuales resalta la variabilidad de los resultados en la lectura del recuento de
plaquetas según la experiencia determinada de cada personal profesional; sin embargo el
problema no va más allá de hacer hincapié en el adiestramiento y actualización del personal
que lo necesita para fines diagnósticos. De esta manera mejorar la razón de la calidad de
servicios que tienen como objeto todo ente relacionado al sector salud.

1.2. Formulación del problema:

1.2.1. Problema general:

¿Cuál es la relación entre la Metodología Brecher y Cronkite (Gold Estándar), y las

otras Metodologías en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periférica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clínico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017?

1.2.2. Problemas específicos:

PE1 ¿Cuál es la relación entre el Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método
automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017?

PE2 ¿Cuál es la relación entre la Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método
de Maspes y Jamra en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017?

PE3 ¿Cuál es la relación entre la Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método
de Fonio en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en muestras de
pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del Cusco en el
año 2017?

3
 PE4 ¿Cuál es la relación entre la Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método
de Dameshek en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017?

1.3. Objetivos:

1.3.1. Objetivo general:

Determinar la relación entre la Metodología Brecher y Cronkite (Gold Estándar), y
otras metodologías en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periférica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clínico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017.

1.3.2. Objetivos específicos:

• Determinar la relación entre el Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el

método automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017.
• Establecer la relación entre la Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el
método de Maspes y Jamra en la precisión del recuento de plaquetas en sangre
periferica en muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital
Regional del Cusco en el año 2017.

• Especificar la relación entre el Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el

método de Fonio en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017.

• Determinar la relación entre el Método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el

método de Dameshek en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en
muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del
Cusco en el año 2017.

4
1.4. Justificación e importancia del estudio:

El presente trabajo de investigación científica realizada en el Hospital Regional del

Cusco, pretende conocer la relación que existe en la aplicación del método Gold Estándar
entre el método automatizado y los métodos manuales para el recuento de plaquetas,
considerando la precisión, la reproducibilidad y confiabilidad de los resultados obtenidos en
el recuento de plaquetas en sangre periférica humana, además determinar y reconocer cuál de
las metodologías será el más adecuado, económico, de procesamiento rápido y fácil con
resultados dentro de los valores esperados y semejantes entre las metodologías antes
mencionadas, definiendo cuál de ellas será importante utilizarla para tal fin.

Se ha observado que en la actualidad existen laboratorios clínicos con pocos recursos

económicos, motivo por el que no cuentan con equipos automatizados, siendo esta una gran
desventaja en la obtención de resultados precisos, ya que la automatización hoy en día es
fundamental para una mejor precisión en la calidad de los exámenes realizados y evitar
resultados aproximados.

El resultado de otros laboratorios que utilizan métodos manuales para realizar sus exámenes,
muestran un coeficiente de variación interlaboratoriales de hasta un 25%, lo cual nos dará
como consecuencia resultados poco precisos.

Dando énfasis al recuento de plaquetas se ha visto por conveniente realizar una comparación
entre distintos métodos manuales, para analizar cuál de ellos presentará un menor rango de
variación, identificando el grado de correlación de cada uno, permitiéndonos determinar la
mejor metodología para los laboratorios no automatizados dando énfasis al laboratorio del
área de estudio.

1.4.1. Justificación teórica.

Este estudio contribuirá a ampliar el conocimiento de los métodos para el recuento de

plaquetas y la eficacia de cada uno de estos, teniendo en cuenta el coeficiente de correlación
de cada uno, resaltando el tiempo de procesamiento y lectura de cada uno de estos métodos.
Pues como producto de los resultados obtenidos las conclusiones conformaran un soporte
teórico que permitirá tener mayores horizontes sobre el problema, por consiguiente,
permitirá determinar que método (automatizado y manual) es el más adecuado para el conteo

5
de plaquetas en muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio del Hospital Regional del
Cusco – 2017.

1.4.2. Justificación práctica.

Los resultados obtenidos de este estudio nos permitieron conocer la precisión, la

varianza y el coeficiente de correlación de cada método manual con el método automatizado
utilizado en el recuento de plaqueta, y de esta manera reconocer la eficacia de cada uno, lo
que nos ayudara a identificar cuál de estos métodos será el más adecuado para su utilización
teniendo en cuenta también su tiempo de procesamiento y lectura| de cada muestra,
cumpliendo de esta manera con un control de calidad adecuado en cada resultado del
recuento de plaquetas.

1.4.3. Justificación metodológica.

Los resultados metodológicos del presente trabajo de investigación en el campo de

laboratorio clínico – área de hematología, se realizó recopilando información de los
resultados de cada método manual y el método automatizado en una ficha de evaluación para
posteriormente interpretar dichos resultados y así poder determinar el método manual más
eficaz para su utilización en el laboratorio del Hospital Regional del Cusco, que también
podrá ser de gran valor para otros trabajos de investigación, por aplicarse métodos de
investigación científica adecuados y sustentados con documentos válidos y con grados de
confiabilidad aprobados.

1.5. Delimitación del problema de investigación

1.5.1. Delimitación espacial:

Considerando que la delimitación espacial se refiere a la especificación del área o

lugar geográfico en el que se llevara a cabo la investigación, delimitando espacio
institucional, región, país. (Gómez - 2012)

La delimitación espacial del trabajo de investigación se realizó en el laboratorio clínico del

Hospital Regional del Cusco- Perú.

6
1.5.2. Delimitación temporal:

Considerando que la delimitación temporal es determinar el tiempo en que se realizó

la investigación, señalando los intervalos de tiempo. (Gómez - 2012)
El presente trabajo de investigación se desarrolló en los meses de Octubre y Noviembre del
año 2017.

1.5.3. Delimitación social:

Considerando que la delimitación social es indicar las personas que serán objeto de
estudio. (Gómez - 2012)
El presente trabajo de investigación utilizo las muestras de personas en edad adulta joven (20
– 40 años de edad) que fueron atendidas en el laboratorio clínico del Hospital Regional del
Cusco en los meses de Octubre y Noviembre del año 2017.

1.6. Limitaciones de la investigación

• Adquirir el formol al 40% ya que este es una sustancia quimica controlada

• Adquirir oxalato de amonio no es tan sencillo ya que pocas casas comerciales lo venden.

• No todos los laboratorios cuentan con una cámara de Neubauer.

• El tiempo de procesamiento en los métodos directos es muy extenso ya cada uno con
lleva alrededor de 30 minutos.

• No cuenta con personal especializado en dicha área.

• Los resultados se obtienen empíricamente.

• No cuentan con todos los insumos necesarios.

• No cuentan con un protocolo para el recuento de plaquetas

• No hay un control científico por un personal capacitado.

7
 CAPÍTULO II

MARCO TEÓRICO Y CONCEPTUAL

2.1. Antecedentes del trabajo de investigación:

2.1.1. Antecedentes internacionales:

NORIELIS ZABALA GARCIA en su tesis: “COMPARACIÓN DEL CONTAJE

PLAQUETARIO EMPLEANDO DIFERENTES METODOLOGÍAS, EN PACIENTES
CON PÚRPURA TROMBOCITOPÉNICA Y SÍNDROMES MIELODISPLÁSICOS”, (2013
- Venezuela). CONCLUSIONES: Los valores del contaje plaquetario de los pacientes con
Síndrome Mielodisplasico y Purpura Trombocitopeniaca obtenidos por los analizadores
automáticos con distintos principios fueron similares, demostrando que el análisis por
cualquiera de los equipos puede ser válido para los contajes bajos de plaquetas, siempre y
cuando se mantengan bien calibrados y controlados.

El recuento de plaquetas por el método manual en pacientes con purpura trombocitopenica y

síndrome mielodisplasico, arrojó una correlación positiva y diferencia significativa (p <
0,05), al compararlo con la metodología automatizada, pudiéndose aceptar los valores por
este método.

La revisión de los frotis sanguíneos permitió corroborar el tamaño, morfología y distribución

de las plaquetas en todos los pacientes, considerándose como una herramienta útil para la
confirmación de estas y otras patologías.

El valor del volumen plaquetario medio para los grupos en estudio, no obtuvo diferencias al
ser determinado por los tres analizadores automáticos con distinto principio (impedancia,
citometría de flujo y combinado) (2).

8
 MARIA TERESA DANTES DE MEDEIROZ, en su trabajo de investigación sobre:
“ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE METODOS DE RECUENTO DE PLAQUETAS”,
(2010 – Brasil). CONCLUSIONES: No hubo diferencias estadísticamente significativas
entre los recuentos de plaquetas en sangre total, obtenidas por el método automatizado y
método manual tanto para las muestras normales como para las muestras plaquetopenicas,
independiente de la zona contada.

Considerando el recuento de plaquetas en las muestras no plaquetopenicas, en todo el retículo

central de la cámara de Neubauer, se observó diferencia entre el método automatizado y los
recuentos obtenidos en el plasma después de 120 minutos de sedimentación espontanea.

No hubo diferencias estadísticamente significativa entre los recuentos realizados en 1 mm 2 y

en 1/5 mm2 del retículo central de la cámara, tanto en la sangre total como en los diferentes
plasmas de las muestras no plaquetopenicas (3).

2.1.2. Antecedentes nacionales:

RICARDO CONDE SANABRIA, LUCIA RODRIGUEZ RUIZ en su trabajo de

investigación: “CONCORDANCIA EN EL RECUENTO E IDENTIFICACIÓN
MORFOLÓGICA DE PLAQUETAS EN FROTIS SANGUÍNEO ENTRE TECNÓLOGOS
MÉDICOS DE HOSPITALES E INSTITUTOS ESPECIALIZADOS DE LIMA
METROPOLITANA Y CALLAO,OCTUBRE 2017 – MARZO 2018”, (Lima).
CONCLUSIÓN: Para garantizar la confiabilidad del estudio de frotis sanguíneo, se debe
considerar una buena toma de muestra, un frotis que cumpla con las especificaciones del
CLSI, una coloración óptima, una buena técnica de revisión, un analista experimentado y
realizar programas de control de calidad que aseguren los procesos. Es necesario e importante
promover y llevar a cabo un consenso sobre cito morfología hemática, con el propósito de
uniformizar los distintos y variados criterios usados en la actualidad (4).

DORIAS MARIA DEL PILAR GUEVARA PACHECO, FANNY ADA

PERALTA GUTARRA, con la tesis: “ESTUDIO DE LOS METODOS:
AUTOMATIZADO, FACTOR DE ESTIMACION 20 000 Y DE DAMESHEK EN
COMPARACION AL METODO EN CAMARA PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS

9
EN SANGRE VENOSA”, (1999 – Lima). CONCLUSIÓN: Demostraron el grado de
importancia del conteo de plaquetas en tiempo óptimo considerando además el menor error,
menor dispersión y mayor correlación con el método referencial de recuento en cámara para
plaquetas, fue el método de Dameshek. Hubo menor exactitud en los intervalos bajos y muy
bajos, especialmente para el método automatizado (5).

2.2. Bases teóricas científicas

2.2.1. SERVICIOS DE SALUD

Los servicios de salud, son cánones que brindan asistencia sanitaria y que constituye
un sistema de atención que se encarga del mantenimiento, la rehabilitación y la promoción de
la salud de las personas.

Es por ello que los servicios de salud contemplan el diagnóstico y el tratamiento de

enfermedades o trastornos, y todo lo referente a la prevención de los males, promoviendo
todo aquello que ayuda a desarrollar una vida saludable.

Teniendo en cuenta que la mayoría de los países cuenta con servicios de salud públicos y
privados; donde los servicios públicos de salud son gestionados y financiados por el Estado,
mientras que los servicios de salud privados serán gestionados y brindados por empresas que
buscan beneficios monetarios.

En el Perú, no sólo el Estado está encargado de “controlar” lo que son los servicios de salud
en muchos aspectos sino que los gobiernos de cada uno de sus departamentos son las que al
final tienen la gestión más directa de los mismos, por lo que deben velar porque los
ciudadanos cuenten con mayor calidad en pro de su bienestar.
Brindando una lista de especialidades médicas al paciente, garantizando su atención
específica según los males que presente, sin prestar atención a su situación económica (6).

2.2.2. SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD EN SALUD

El Sistema de Gestión de la Calidad en Salud está definido como el conjunto de

elementos interrelacionados que tendrán como finalidad conducir, regular, brindar asistencia
técnica en búsqueda del bienestar de la salud, evaluando la función y desempeño de las
entidades de salud del Sector público dentro de sus tres niveles (nacional, regional y local),

10
para garantizar la calidad de la atención y de la gestión.

La gestión de la calidad es un mecanismo que se rige por los Lineamientos de Política del
Sector Salud, las que fueron formuladas por la Alta Dirección del MINSA implantando
normas para su cumplimiento respectivo, las que deberán de ser desarrolladas de manera
creativa y siguiendo las especificaciones correspondientes a todas las instituciones y
entidades del Sector, según sus niveles de su jerarquía organizativa.

Dentro del Sistema están incluidos los mecanismos de planificación, organización, garantía y
mejora de la calidad e información para la calidad dentro de la dirección estratégica de la
institución, en la perspectiva de diseñar, gestionar y mejorar los procesos institucionales hacia
una cultura de calidad (6).

2.2.3. LABORATORIO CLÍNICO

Es una especialidad perteneciente al grupo de las que se denominan comúnmente

medios de diagnóstico.

En este se realizan procedimientos de análisis de especímenes biológicos de origen humano,

como apoyo a las actividades de diagnóstico, prevención, tratamiento, seguimiento, control y
vigilancia de las enfermedades, de acuerdo con los principios básicos de calidad, oportunidad
y racionalidad (7).

a) Objetivos y funciones del laboratorio clínico:

En cuanto a la asistencia médica, los exámenes de laboratorio tienen como objetivos:

• Implantar un pronóstico, confirmando o descartando un posible diagnóstico.

• Vigilar la mejora de la enfermedad y los efectos del tratamiento para la evolución
efectiva o de control de esta, dejando entre ver posibles complicaciones o mejorías.
• Permitir estudios epidemiológicos y de grupos de riesgo.
• Ser parte esencial de los protocolos de investigación científica y de los ensayos clínicos
en nuevos medicamentos.
El valor diagnóstico de la mayoría de las investigaciones de laboratorio está limitado
porque, los cambios que se observa en la función de los órganos y de los sistemas, son
inespecíficos. Por lo tanto, estas investigaciones detectan la presencia de una alteración

11
patológica, pero no identifican la enfermedad concreta, dirigiendo la atención del médico
hacia un diagnóstico particular (incluso en el caso de que los resultados sean considerados
normales), o permiten excluirlo; complementándose con el interrogatorio y el examen
físico. Para una adecuada interpretación de los resultados en los análisis de laboratorio será
de suma importancia la sensibilidad, especificidad nosografía y su valor predictivo.

En el pasar de los años las ciencias médicas experimentaron un gran desarrollo acumulando
un vasto caudal de experiencia en el estudio de las alteraciones humorales, que tiene lugar
durante la evolución de una enfermedad o como consecuencia de un tratamiento.
Conllevando a una demanda creciente de pruebas para el diagnóstico, originando
situaciones complejas, tales como:

• Incremento en la variedad de análisis e incremento de las investigaciones que se realiza

en los laboratorios.
• El propio progreso científico-técnico (el desarrollo de nuevas técnicas de diagnóstico
rápido, la difusión y perfeccionamiento de los equipos automatizados).
• El trabajo del laboratorio se ha hecho en pocos años tan complejo y la cantidad de
información que brinda es tan considerable, que muchos profesionales no han tenido
tiempo de adaptarse a esos cambios y de asimilar esa información (8).

b) Exámenes que se realizan en el laboratorio clínico:

Hoy en día, existe una gran variedad de exámenes que se realiza en el laboratorio clínico.
Según la política de salud de cada país, estos establecen los exámenes que se han de realizar
en los laboratorios de la red de salud pública. Por el contrario en el sector privado los
exámenes que han de realizar deberán de ser controladas mediante la acreditación de los
laboratorios de este sector, como son las asociaciones médicas nacionales, en coordinación
con los organismos gubernamentales que regulan la actividad sanitaria. Para determinar
algún analito investigado en el laboratorio es necesario recopilar toda la información básica
del paciente vaya a ser desde la fisiología, fisiopatología, y la importancia clínica de estas.

Como también el conocer las características de los métodos de análisis, sus limitaciones y
las posibles interferencias que pudieran tener, la preparación de paciente, además de realizar
los cálculos de costo-beneficio de su prólogo (8).

12
2.2.4. HEMATOLOGÍA

Área de laboratorio clínico, la cual se ocupa del estudio de los componentes de la

sangre (glóbulos rojos, eritrocitos, plaquetas, leucocitos, hemoglobina, plasma, etc.) y de los
mecanismos de los mismos.

En esta área se agrupan los exámenes denominados básicos o habituales como son
hemoglobina, hematocrito, recuento diferencial de las células sanguíneas, lamina periférica,
cálculo de las constantes corpusculares, velocidad de sedimentación globular, estudios de
hemostasia, etc.) y pruebas especializadas, como los estudios de anemias hemolíticas y
nutricionales, el examen de las extensiones coloreadas de médula ósea (medulograma), las
coloraciones cito químicas y algunos estudios realizados con el empleo de radionúclidos,
sondas moleculares o microscopia electrónica (9).

2.2.5. HEMOGRAMA

El hemograma, también conocido como cuadro hemático, biometría hemática o

recuento de células sanguíneas, se define como el análisis cuantitativo y cualitativo de los
componentes celulares de la sangre periférica, siendo esta una de las pruebas más solicitadas
y uno de los estudios que aporta mayor información sobre la homeostasis de un individuo. A
través del tiempo, el hemograma ha sufrido múltiples modificaciones en cuanto a los
parámetros que lo componen, la forma de obtenerlos, los grados de precisión y de exactitud y
la manera de interpretarlo.

El hemograma junto a otros exámenes realizados en el laboratorio clínico, deberá permanecer

atento al desarrollo tecnológico para incorporar los aspectos de mayor relevancia desde el
punto de vista clínico, como una herramienta de rutina que le permita tener pruebas cada vez
más exactas, más precisas, a un costo razonable y, sobretodo, de mayor utilidad clínica (9)
(10).

De acuerdo con la metodología utilizada y los parámetros que lo componen, se diferencian

seis tipos de hemograma, definidos por el Colegio Americano de Patólogos que a su vez, son
reconocidos por la Asociación Médica Americana.

13
 • Tipo I: Dentro de este tipo de hemograma se realizara los exámenes de recuento de
eritrocitos, índices eritrocitarios (volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular
media, concentración de la hemoglobina corpuscular media), hematocrito, hemoglobina,
recuento total de leucocitos, y recuento diferencial de leucocitos y morfología por
métodos manuales.
• Tipo II: hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, índices eritrocitarios
(volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, concentración de la
hemoglobina corpuscular media), recuento total de leucocitos, recuento diferencial de
leucocitos, recuento de plaquetas y morfología por métodos manuales.
• Tipo III: hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, índices eritrocitarios,
recuento total de la serie blanca, y recuento diferencial de leucocitos, recuento de
plaquetas por métodos semi automátizados y revisión de la morfología utilizando
métodos manuales.
• Tipo IV: hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, índices eritrocitarios,
amplitud de la distribución de los eritrocitos, recuento total de leucocitos, recuento
diferencial de leucocitos, recuento de plaquetas y morfología de sangre periférica por
métodos automatizados y manuales.
• Tipo V: hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, índices eritrocitarios, ancho
de distribución de los eritrocitos, recuento total de leucocitos, recuento diferencial de
leucocitos, recuento de plaquetas, índices plaquetarios (volumen medio plaquetario,
ancho de distribución de las plaquetas, plaquetocrito) y morfología de sangre periférica
por métodos automatizados y manuales.
• Tipo VI: hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, índices, ancho de
distribución de los eritrocitos, recuento de reticulocitos, índices reticulocitarios,
hemoglobina reticulocitaria, recuento total de leucocitos, recuento diferencial de
leucocitos, recuento de plaquetas, índices plaquetarios (volumen medio plaquetario,
ancho de distribución de las plaquetas, plaquetocrito), plaquetas reticuladas y morfología
de sangre periférica por métodos automatizados y manuales.
El hemograma está conformado por tres grupos de parámetros, los cuales son: estudio de la
serie roja, seria blanca y el plaquetograma (11).

14
2.2.6. PRODUCCIÓN DE PLAQUETAS

• MEGACARIOPOYESIS
Proceso por el cual las células madre hematopoyéticas pluripotentes derivan los
megacariocitos teniendo como función la producción de plaquetas (trombopoyesis) las cuales
intervienen en la hemostasia.
Un adulto normal, produce alrededor de 100.000 millones de plaquetas (11) (12).

• EL MEGACARIOCITO
Las células madre hematopoyéticas primitivas derivan el megacariocito, que son
multilobuladas y su núcleo es poliploide con un diámetro de 50 a 100 μm, llegando a ser la
célula más grande del organismo. Los precursores de los megacariocitos presentan sucesivas
replicaciones del ADN sin dividirse en células hijas, duplicándose en cada ciclo el número de
cromosomas presentes en el núcleo, a este fenómeno se le llama “endomitosis”, y origina
células con 2, 4, 8, 16, 32 y muy raras veces hasta 64 más ADN que una célula somática
(llamadas 2N, 4N, 8N, etc). Al mismo tiempo que aumentan el tamaño del núcleo, se
incrementa la cantidad de citoplasma y la capacidad de producir plaquetas. Por su gran
núcleo, estas células son reconocidas como megacariocitos. Los megacariocitos 8N y
mayores se diferencian, adquiriendo un gran número de gránulos azurófilos, originando hasta
10 000 plaquetas durante la vida de un megacariocito maduro (13).

Figura 01: Ilustración de la producción de plaquetas

15
2.2.7. LAS PLAQUETAS

Las plaquetas son fragmentos citoplasmáticos a nucleados, no células como

erróneamente se hace referencia a ellas, se producen como consecuencia de la ruptura y
liberación del citoplasma de los megacariocitos de la médula ósea. Miden aproximadamente
3 μm de diámetro, tiene forma de disco biconvexo (discocitos), un volumen (volumen medio
plaquetario) de 8,3 a 11,6 fL y 10 pg de peso, su tiempo de vida media en la sangre será de 7
a 10 días con una concentración a próximamente entre 150.000 y 450.000 por milímetro
cubico (mm3). En su citoplasma contienen glucógeno que les suministra energía, y ribosomas
en las plaquetas jóvenes; y, similar a los eritrocitos, carecen de síntesis proteica. Están
conformadas por organelas inespecíficas, como mitocondrias, lisosomas y peroxisomas con
características y funciones similares a las de otras células, pero a diferencia de las otras
aportan organelas específicas, como son los gránulos α y los gránulos densos. Los gránulos α
son organelas esféricas (en número de 35 a 45) de 140 a 400 nm de diámetro, ricos en
macromoléculas, y con alta cohesión de electrones, que constituyen un 15 % del volumen
total de las células; los gránulos densos se caracterizan por su alta densidad electrónica que le
confieren el elevado contenido en calcio y fósforo inorgánico. Con la incorporación, cada vez
mayor, a los laboratorios clínicos de estos instrumentos, las plaquetas y los parámetros con
ellas relacionadas hacen parte integral de los hemogramas, al menos los considerados de alta
tecnología como los tipos V y VI (1) (14).

Figura 02: Fotografía de las Plaquetas

16
2.2.8. ANOMALÍAS PLAQUETARIAS

La alteración en número de plaquetas por encima de los Valores normales se

denomina trombocitosis. En estos casos es poco común que los valores excedan los 1000*
103/ul, si no se encuentran presentes otros factores de riesgo es rara la derivación hacia una
trombosis. Valores aún más altos que los mencionados anteriormente (por encima de 3000*
103/ul) se pueden encontrar en desordenes de tipo mieloproliferativo, con aumentos
persistentes del número de plaquetas, y pueden estar asociados con complicaciones
trombociticas y/o sangrado. La trombocitopenia se encuentra presente en casos donde el
recuento de plaquetas es inferior a 130* 103/ul, por debajo de 20* 103/ul se produce sangrado
espontaneo. Las causas de este desorden pueden deberse a: disminución de la producción de
la vida media de estos elementos, atrapamiento (como en varios casos de esplenomegalia) o
después de transfusiones de sangre. Pseudo trombocitopenia se produce en algunos casos en
donde la sangre del paciente se aglutina a pesar de estar anti coagulada con EDTA. En esta
situación se produce un falso recuento a partir del extendido de sangre capilar.

Existen alteraciones de tamaño de las plaquetas, cuando se encuentran elementos de este

origen con diámetro mayor de 5 um. Estas son llamadas plaquetas gigantes (macroplaquetas),
morfológicamente son redondas, con una fina granulación de color azul violeta en su interior
y con bordes indefinidos , al no tener las características de una plaqueta normal no serán
detectadas en los analizadores automáticos, dando lugar a una reducción en el recuento con
respecto a los valores normales. La presencia de estas se da por un acrecentamiento de
cariotopoyesis a partir de los megacariocitos medulares lo que se debe a un incremento del
consumo de plaquetas en enfermedades como la trombocitopenia inmunitaria o por el
incremento de la producción a nivel medular en la trombocitemia esencial. También se
encuentra encuentran junto con neutrófilos con granulación Basofilica en pacientes con
anomalía de May-Hegglin y en el síndrome de Bernard-Soulier. Cuando nos encontramos
frente a una modificación cualitativa y debe considerarse alterado cualquier elemento cuyo
diámetro excede los 4 um, las causas se deben al incremento de la generación a nivel medula
ósea y esta modificación puede deberse al mismo origen de los casos comentados para las
plaquetas gigantes.

En extendidos de sangre es posible encontrar remanentes de megacariocitos, estos se

distinguen por su forma redondeada, granulación gruesa de color violeta a azul oscuro debido

17
a la presencia de cromatina, pero carentes de núcleo y citoplasma residual escaso con las
tinciones panópticas habituales (14) (15).

2.2.9. LAS PLAQUETAS EN EL EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA

El estudio de las plaquetas en extendido sangre periférica es indispensable realizar,

cuando el auto analizador de hematología informe trombocitopenia, trombocitosis, o
cualquier alteración en la morfología plaquetaria como presencia de macrotrombocitos y
agregados de plaquetas; como también cuando se observa otras alteraciones como
componentes eritrocitarios como microcitosis y fragmentación de eritrocitos y leucocitosis,
ya que estos por su tamaño y características pueden ser considerados erróneamente como
plaquetas para descartar una seudotrombocitopenia o una seudotrombocitosis (14).

a) RECUENTO DE PLAQUETAS

En los laboratorios de escasos recursos, los recuentos manuales se utilizan rutinariamente

con muestras de sangre que contienen una proporción significativa de plaquetas gigantes, lo
que es necesario incluso en los laboratorios bien equipados. Sin embargo, para el resto de las
muestras los aparatos de recuento automáticos de sangre completa consiguen recuentos
plaquetarios con una precisión mucho más elevada que con el método manual de recuento de
plaquetas.

Los recuentos plaquetarios se realizan mejor en sangre anti coagulada con ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) obtenida mediante venopunción. También se pueden llevar
a cabo con sangre obtenida mediante pinchazo cutáneo, pero los resultados son menos
satisfactorios que los de sangre venosa. El recuento plaquetario por punción cutánea es
significativamente más bajo que el recuento de sangre venosa y menos constante;
probablemente, en el punto de punción de la piel se pierden un número variable de plaquetas.

Los recuentos plaquetarios manuales se realizan por examen visual de sangre completa
diluida y lisada mediante una cámara de recuento de Neubauer o mediante un frotis
sanguíneo de sangre periférica teñida con el colorante de Wright (16).

18
2.2.10. MÉTODOS PARA EL RECUENTO MANUAL DE PLAQUETAS

a) MÉTODOS DIRECTOS

• MÉTODO DE BRECHER & CRONKITE (Método de referencia establecido por el

ICSH HASTA 2001)
Fundamento: Para un conteo adecuado de plaquetas será necesario lisar los eritrocitos
para lo cual se utilizara una solución hipotónica, lo que nos permitirá determinar el
número de plaquetas por mm3 de sangre, haciendo uso de el hemocitometro de Neubauer
(Anexo N° 06).
Muestra: Sangre total en tubo con EDTA.
Solución hipotónica: Oxalato de amonio al 1% (Anexo 07).
Pesar 0,1g de oxalato de amonio; disolver en csp 100 ml de agua destilada o des
ionizada; filtrar a través de papel filtro con 0,22 um y acondicionar a 4°C.
Protocolo A: Para muestras no plaquetopenicas.
Se diluirá de sangre total 20 ul en 380 ul (400 ul) de diluyente (o 100 ul de sangre en 1,9
ml de diluyente) para un tubo de hemodiálisis (dilución 1:20). Tener el cuidado de
limpiar la parte externa de la punta con papel absorbente para solo entonces mezclar por
aspiración y expulsión la sangre en el diluyente; llenar el hemocitometro de Neubauer y
colocarlo en reposo por 20 minutos en cámara húmeda (deposito cerrado en el que se
coloca en su interior un copo de algodón embebido en agua); hacer lectura,
preferiblemente en microscopio de contraste de fase o en microscopio óptico común en
aumento de 400x; determinar el número total de plaquetas (P) observadas en los cinco
cuadrados del cuadrante central del retículo (mismo lugar destinado al recuento de
hematíes) en el que: P= (H1+ H2+ H3+ H4+ H5).

Cálculos
Plaquetas/mm3 sangre= P*fd+fv
P= ∑ (H1+ H2+ H3+ H4+ H5); total de plaquetas en los 5 cuadrados del cuadrante
central de la cámara.
Fd= factor de dilución= 20;
Fv= factor de corrección para el volumen (área * altura del retículo) de la muestra,
presente en el área utilizada para recuento = 1/5* 1/10= 1/50 => fv=50;

19
plaquetas/mm3 sangre= P* 20* 50=> plaquetas/mm3 sangre= P*1000

Observación: Un buen criterio de calidad para la obtención de resultados reproductibles

es obtener el recuento de por lo menos 150 (200) plaquetas al final del recuento de cinco
cuadrantes del cuadrado central de la cámara.

Protocolo B: para muestras plaquetopenicas: podrán ser utilizados los protocolos que
incluyan diluciones de 1:10 (20 ul de sangre para 180 ul de diluyente) o (100 ul de
sangre para 900 ul de diluyente).

Protocolo C: para casos graves de plaquetopenia en que incluso con la utilización de la

dilución de 1:10 no sea posible contar por lo menos 150 plaquetas, hacer el recuento en
todo el retículo central.

Protocolo A: plaquetas/mm3 sangre = ∑(H1+H2+H3+H4+H5)* 1000

Protocolo B: plaquetas/mm3 sangre = ∑(H1+H2+H3+H4+H5)* 500

Protocolo C: plaquetas/mm3 sangre = ∑(H1+H2+H3+H4+H5)* 100

Valores referenciales: 140 000 a 4000 000 plaquetas/mm3 sangre (16) (17).

Figura 03: Lectura en cámara en hemocito metro o cámara de Neubauer

20
• METODO DE MASPES & JAMRA (1955), MODIFICADO POR OLIVEIRA &
BARRETO (2003)

Fundamento: Durante la separación de los eritrocitos del plasma por sedimentación

espontanea o baja fuerza centrífuga, cuando la capa plasmática separada corresponde de
10 a 20% del volumen total de la muestra, las plaquetas quedan uniformemente
distribuidas en el plasma y se mantienen en valores constantes, aunque buena parte del
plasma libre de plaquetas quede retenido entre los eritrocitos sedimentos, lo que hace al
plasma sobrenadante súper concentrado en plaquetas. Por esto, para hacer la conversión
correcta de la cantidad de plaquetas por volumen de sangre, se debe utilizar no solo el
hematocrito sino, además un factor relativo a la cantidad de plasma libre de plaquetas
presente entre los eritrocitos sedimentados, lo que traduce el valor exacto de plaquetas
por volumen de sangre.

De este modo, para cada valor del hematocrito existe un factor de corrección
correspondiente (traducido por la función matemática: Y= 0,982- 0,014 X), que puede
ser simplificada por la fórmula: plaquetas/mm3 sangre= plaqueta/ mm3 plasma *(100-
(Ht+ Ht/2)/ 100). Esta función matemática o formula convierte el número de plaquetas/
mm3 de plasma a plaqueta/ mm3 de sangre, para cada valor de hematocrito, teniendo en
cuenta el fenómeno de la retención de plasma libre de plaquetas entre los eritrocitos en
sedimentación (fenómeno de Bagnold, descrito en 1954).

Por lo tanto: Plaqueta/mm3 sangre= plaqueta/mm3 sangre * FC

Donde FC puede ser obtenido (ver tabla 1).

Por la función: (Y= 0,982 – 0,014X), o por la fórmula: ((100 – (Ht+ Ht/2))/ 100)

Muestra: plasma

Liquido diluyente: 1,0 ml de formol (al 40%); solución NaCl a 0,9% csp 100,0 ml.

Técnica: Determinar el hematocrito del paciente por microcentrifugacion o

automatización.

Obtener el plasma rico en plaquetas, sometiendo cerca de 2,5 ml a 4,0ml de sangre total a
la sedimentación espontanea de 1.000 rpm/min.

21
Protocolo de acuerdo con el grado de plaquetopenia de la muestra:

o Protocolo A (muestras no plaquetopenicas): Aspirar 20 ul de plasma sobrenadante,

limpiar la parte externa de la punta y diluir en 980 ul (1,0 ml) de líquido diluyente en
un tubo de hemolisis (dilución 1:50).

o Llenar el retículo de Neubauer, dejar en cámara húmeda por 20 minutos y proceder al

recuento de las plaquetas en los cinco cuadrantes secundarios del cuadrante central
destinado al recuento de hematíes.
o Observación: Un buen criterio de calidad para obtener resultados reproducibles es
obtener el recuento de por lo menos 150 plaquetas al final de los cinco cuadrantes del
cuadrado central de la cámara de Neubauer.
o Para muestras plaquetopenicas: podrán utilizarse los protocolos alternativos:

o Protocolo B: dilución de 1:20 (20 ul de la muestra para 380 ul de diluyente).

o Protocolo C: dilución de 1:10 (20 ul de la muestra para 180ul de diluyente).

o Protocolo D: casos gravemente plaquetopenicos, en los cuales incluso con la

utilización de la dilución 1:10 no sea posible contar por lo menos 150 plaquetas, hacer
el recuento en todo el retículo central (17).

Cálculos:

Plaquetas/ mm3

Protocolo A: Plaquetas/ mm3= ∑(H1+ H2+ H3+ H4+ H5)*2.500

Protocolo B: Plaquetas/ mm3= ∑(H1+ H2+ H3+ H4+ H5)*1.000

Protocolo C: Plaquetas/ mm3= ∑(H1+ H2+ H3+ H4+ H5)* 500

Protocolo D: Plaquetas /mm3= ∑(H1+ H2+……+ H24+ H25)* 100

22
 Tabla 01: Factores de conversión plaquetas/mm3 plasma para plaquetas/ mm3
sangre, por hematocrito.

Figura 04: Lectura en cámara en Neubauer por el método de Masper y Jamra

23
b) MÉTODOS INDIRECTOS

Estos métodos utilizan un frotis de sangre periférica (procedimiento en lazado en los

Anexos N°08, N°09), coloreada con la tinción de Wright (procedimiento en lazado en el
Anexo N°10), la que aportara una evaluación cualitativa (normal, bajo o alto) en el
conteo de plaquetas. Permitiendo evaluar la posible presencia de agregación plaquetaria
producida por el anticoagulante EDTA, el cual podrá asociar a un falso recuento
disminuido de plaquetas; así como también el satelitismo plaquetario (plaquetas
adheridas alrededor del neutrófilo), identificación de la presencia interferentes como
bacterias, fragmentos de leucocitos, microcitos, crioglobulinas, lípidos, fragmentos de
hematíes, que nos conducirán a inexactitudes del recuento. Además, nos da información
de anormalidades en la morfología de estos elementos como las macroplaquetas
presentes en algunas neoplasias mieloproliferativas crónicas y macrotrombocitopenia,
plaquetas agranulares en el síndrome de plaquetas grises. Por lo tanto, aunque es menos
exacto que un método automatizado, tiene mucha utilidad en identificar alteraciones
(18).

Figura 05: Representación gráfica del procesamiento de frotis de sangre periférica

24
• MÉTODO DE DAMESHEK

Preparar frotis de muestra de sangre venosa o capilar (de no contar con la sangre venosa),
eliminando la primera gota. Teñir el frotis con Wright

Observar el frotis con lente de inmersión, en una zona en que los eritrocitos no se
encuentren sobrepuestos y lejos de los márgenes del frotis.

Se cuentan 1000 hematíes (en 4 campos) y se procede a establecer un factor de acuerdo

al hematocrito del paciente (19).

Si: Hto <= 35%; F = 5

Hto 36% – 39%; F = 3

Hto >=40%; F = 0

Cálculo:

Plaquetas= N° plaquetas contadas * (F+Hto)*100

Figura 06: Fotografía de la observación de plaquetas por el método de Dameshek

25
• MÉTODO DE FONIO

Procedimiento: Realizar un frotis de sangre periferia de la muestra (sangre total). Teñir

el frotis con May Grünwald – Giemsa o Wright.

Se hace la correlación de la proporcionalidad entre número de eritrocitos y plaquetas por

campos y el número de eritrocitos y plaquetas por mm3. Para ello se cuentan 10 campos
y se determina en promedio cuantas plaquetas se ven por campo con número específico
de eritrocitos., realizar el conteo en 10 campos, en las zonas donde las plaquetas no estén
sobrepuesta (17).

Por ejemplo, al final de 10 campos de aproximadamente 150 eritrocitos se observan en

promedio, 6.0 plaquetas. Con base en el recuento total de eritrocitos (eritrocitos/mm3 –
ya previamente conocida, por ejemplo, 2.500.000/mm3), y por regla de tres simple, se
obtiene el número de plaq /mm3. plaq/mm3 = 6.0 x 2.500.000/150 = 100.000 plaq / mm3

Observaciones: Este método requiere de un frotis muy bien extendido.

La obtención de muestra capilar tiene hasta un 24% de variación, por lo que es poco
confiable.
Para una buena evaluación del número de plaquetas, se recomienda el uso simultáneo del
recuento por el frotis y el recuento por hemocitometro de Neubauer o automatizado.
Cuando hay una sospecha de trombocitopenia se debe de verificar la presencia de grumo
de plaquetas lo que podría llevar a una pseudo trombocitopenia, o presencia de
satelitismo lo que nos llevaría a identificar un falso resultado de trombocitopenia (17)
(20).
Figura 07: Fotografía de la observación de plaquetas por el método de Fonio

26
2.2.11. MÉTODO AUTOMATIZADO

Tanto el método óptico como la impedancia han permitido investigar diversos interferentes
en el recuento plaquetario, como es el caso de la agregación plaquetaria (21).
En la década de los noventa, los marcadores inmunológicos fueron utilizados para reconocer
antígenos específicos que están presentes en la superficie de las plaquetas lo cual ayudara
para su identificación por citometría de flujo. Más tarde esto permitió el desarrollo de un
método de referencia para el recuento de plaquetas usando CD41 y CD61 basado en la razón
entre hematíes/plaquetas (22).

• MÉTODO BASADO EN IMPEDANCIA

O también llamado “Principio Coulter”, fue descrito por Wallace Coulter.
Esta técnica de sistema de flujo ha sido desarrollada para detectar la alta frecuencia de
cambios de resistencia y capacitancia en un orificio sensor debido al paso de células a
través del orificio (23).

En este método, las células son consideradas como partículas completamente resistivas y
no conductoras. Cuando las células están suspendidas en una solución electrolítica y
pasan a través de una apertura, el cambio en la impedancia eléctrica es detectado en esa
zona. Cada célula da una señal de impedancia, el cual es proporcional al volumen de las
células detectadas, y así, este método puede ser usado para obtener tanto el tamaño como
el número de células. Al inicio este método solo fue aplicado para el recuento de
hematíes y leucocitos, más tarde se aplicó para el recuento de plaquetas, pero se hacía
uso de plasma rico en plaquetas. Posteriormente, se mejoró esta tecnología mediante el
enfoque hidrodinámico y para la corrección de doble coincidencia, lo que condujo a la
discriminación de hematíes y plaquetas, obteniendo un recuento más exacto de plaquetas
en sangre periférica.

El software del analizador tiene integrado una fórmula para que la coincidencia sea
corregida. Sin embargo, la corrección del recuento no determina si el pulso grande se
debe al paso de dos células pequeñas o una célula, ya que no es el camino para corregir
el volumen celular. Los pulsos obtenidos permiten representarlos en una distribución
normal y visualizarlos como histogramas en el analizador hematológico.

27
 En este método, las partículas menores a 20 fL, los cuales incluye fragmentos de
glóbulos rojos, fragmentos de células leucémicas, microcitos y crioglobulinas pueden ser
contadas como plaquetas, resultando en un recuento elevado (24) (25).

Figura 08: Esquema grafico del principio de Coulter

• MÉTODOS DE RECUENTO ÓPTICO

Recuento óptico unidimensional y bidimensional.

En el análisis de plaquetas unidimensional, las plaquetas son contadas y medidas por un
sistema de citometría de flujo en el cual las células en un diluyente adecuado pasa a
través de un estrecho haz de luz (laser de helio-neón).

La iluminación y la dispersión de luz por cada célula es medida en un ángulo. Esto

conduce a la evaluación del número de pulsos eléctricos generados en proporción al
número y volumen de células. Para mejorar la discriminación de la exactitud de
plaquetas y otras partículas diferentes a esta, se introdujo la dispersión de luz láser en dos
dimensiones. La medida de las dos dispersiones de luz son convertidas en información de
volumen (medida del tamaño) e índice de refractividad (densidad de la plaqueta)

28
 obtenidas mediante el uso de la teoría Mie de la dispersión de luz de esferas
homogéneas.

El análisis integrado es usado para distinguir plaquetas, macroplaquetas, hematíes,

fragmentos de células y desechos. Las plaquetas identificadas serán graficadas en un
dispersograma, basándose en el volumen e índice de refractividad.

Los fragmentos de hematíes y microcitos con el mismo rango de volumen tienen mayor
índice de refractividad que las plaquetas. Y por el contrario las células fantasmas
conocidas como “debris” presentaran menor índice de refractividad que las plaquetas.

La introducción del recuento óptico de plaquetas ha mejorado la exactitud en muestras

con macroplaquetas (24) (26).

• RECUENTO ÓPTICO DE PLAQUETAS FLUORESCENTES POR CITOMETRIA DE

FLUORESCENCIA
El recuento de plaquetas ópticas fluorescentes utiliza una tinción de polimetina para teñir
los ácidos nucleicos de células reticuladas, membrana de plaquetas y gránulos.

Esta tecnología lleva un recuento simultáneo de reticulocitos, hematíes y plaquetas

fluorescentes. En la celda de flujo, cada célula pasa a través de un rayo de luz de un láser
semiconductor. La intensidad de la fluorescencia de cada célula es analizada, lo cual
conduce la separación de plaquetas de eritrocitos y reticulocitos. La tinción fluorescente
de las plaquetas no solo lleva a la exclusión de partículas no plaquetarias, sino también
conduce la inclusión de plaquetas gigantes (21) (26).

2.2.12. INTERFERENTES QUE PUEDEN AFECTAR EL RECUENTO

AUTOMATIZADO DE PLAQUETAS

• MACROPLAQUETAS
En situaciones patológicas o no, algunas plaquetas demuestran un alto volumen, por esta
razón los analizadores consideren partículas hasta de 30 o 36 fL de volumen.

29
 Existe la posibilidad que las plaquetas gigantes no sean discriminadas de microcitos, por
lo cual son excluidas del recuento y resulta en un falso recuento disminuido de plaquetas.
La presencia de estas macroplaquetas es frecuente en pacientes con mielodisplasia,
enfermedades mieloproliferativas crónicas y trombocitopenia autoinmune el cual afecta
aquellos analizadores que usan el principio de la impedancia (27).

• FRAGMENTOS DE LEUCOCITOS

Los pacientes bajo terapia cito tóxica pueden presentar, en sus muestras, fragmentos de
leucocitos seguidos de las apoptosis los cuales se tiñen con el colorante fluorescente y
son incluidos en el recuento de citometría de fluorescencia, debido a las características
compartidas del interferente con el tamaño y la intensidad de fluorescencia de las
plaquetas. Estas partículas provienen de la fase leucémica de un linfoma pobremente
diferenciado, durante la quimioterapia. Además, reconocer los fragmentos en un frotis de
sangre periférica es dificultoso pero es más fácil demostrarlo por microscopia electrónica
(28)

• MICROCITOS

Los contadores hematológicos basados en impedancia no pueden discriminar plaquetas

de hematíes muy pequeños; y, macroplaquetas de hematíes de tamaño normal (29).

El actual método de referencia también hace uso de la impedancia para realizar el

recuento de hematíes con la finalidad de obtener un ratio con las plaquetas, sin embargo,
si la muestra tiene microcitos (por ejemplo, en una anemia por deficiencia de hierro,
microesferocitos en quemaduras agudas) esto debería ser analizado con precaución
porque probablemente sea inexacto, y en consecuencia producir una sobrestimación de
plaquetas (30).

• SATELITISMO PLAQUETARIO

Al fenómeno en que las plaquetas presentan adheridas alrededor de leucocitos se

denomina satelitismo plaquetario (31), el cual genera falsos recuentos disminuidos. En
casos extremos los neutrófilos se presentan agregados quizá por plaquetas adherentes.

30
 Además se ha comprobado que en el almacenamiento de la sangre completa el recuento
de plaquetas tiende aumentar las plaquetas a partir de las 8 horas, la hipótesis que se
maneja es que cuando la muestra es fresca las plaquetas tienen una alta expresión de
CD62P (un marcador de activación plaquetaria), por lo que son más activas y tienden a
formar complejos con leucocitos, por lo que hay una sub estimación en el recuento (32).

• AGREGADOS PLAQUETARIOS (PLATELET CLUMPS)

Los agregados se forman debido al contacto prolongado del anticoagulante EDTA (etilen
diamino tetra acetico) con las plaquetas, por una mala homogenización de la muestra al
ser obtenida o por una mala venopuncion. Se asocian frecuentemente a un falso recuento
sub estimado de plaquetas. Un diagnostico falso de trombocitopenia se puede dar por
presencia de EDTA que está relacionada a la circulación de (auto) anticuerpos dirigidos
contra epitopes del complejo glicoproteico IIb/IIIa que se expresan en la membrana de la
plaqueta solo en presencia del EDTA (Zandecki y col). Los agregados se comienzan a
formar a los pocos minutos del contacto con el EDTA, y se hace más notorio cuando las
muestras son guardadas a temperatura ambiente, los analizadores no la identifican como
una población definida y la reportan mediante alarmas (flag): PLT clumps, large or giant
PLT)

Las plaquetas anormales de enfermedades mieloproliferativas muestran ser mucho más

sensibles que plaquetas normales para formar agregados en presencia de EDTA (33)

• AGREGADOS PLAQUETARIOS (PLATELET CLUMPS)

Los agregados se forman debido al contacto prolongado del anticoagulante EDTA (etilen
diamino tetra acetico) con las plaquetas, por una mala homogenización de la muestra al
ser obtenida o por una mala venopuncion. Se asocian frecuentemente a un falso recuento
sub estimado de plaquetas. Un diagnostico falso de trombocitopenia se puede dar por
presencia de EDTA que está relacionada a la circulación de (auto) anticuerpos dirigidos
contra epitopes del complejo glicoproteico IIb/IIIa que se expresan en la membrana de la
plaqueta solo en presencia del EDTA (Zandecki y col). Los agregados se comienzan a
formar a los pocos minutos del contacto con el EDTA, y se hace más notorio cuando las
muestras son guardadas a temperatura ambiente, los analizadores no la identifican como

31
 una población definida y la reportan mediante alarmas (flag): PLT clumps, large or giant
PLT)
Las plaquetas anormales de enfermedades mieloproliferativas muestran ser mucho más
sensibles que plaquetas normales para formar agregados en presencia de EDTA (34).
Los analizadores tienen la capacidad para detectarlos mediante la generación de “flag” o
alarmas pero la sensibilidad y especificidad varia (35).

• PLAQUETAS AGRANULARES

En el síndrome de plaquetas grises se presentan plaquetas con la característica de ser

agranulares el cual es una alteración que afecta al recuento basado en citometría de
fluorescencia debido a lo disminución en la intensidad fluorescente de las plaquetas (30).

• BACTERIAS

Estos microorganismos pueden generar aumentos en el recuento plaquetario, ocurre en

raras situaciones (cuando el paciente esta es sepsis).El histograma es afectado y produce
una agregación hacia la izquierda del mismo, donde se ubican las partículas más
pequeñas. No solo es el caso de bacterias, sino también por hongos como el caso de
Candida sp, o pequeños hematíes afectados por trofozoitos de Plasmodium falciparum
(35).

• CRIOGLOBULINAS

Las crioglobulinas posiblemente generen un falso recuento elevado de plaquetas si estos

son los suficientemente pequeños, y en pocos casos alterar el recuento de hematíes (30).

• LÍPIDOS

En pacientes con hiperquilomicronemia, en muestras después de las comidas, o después

de la terapia de nutrición parenteral, lo lípidos quizá formen pequeñas gotitas in vitro,

32
 que interfieren el recuento plaquetario, de igual forma los pacientes leucémicos tratados
con Laspariginasa, una droga conocida por inducir anormalidades en los lípidos. Los
lípidos poseen un alto índice de refractividad y puede generar señales anormales
localizadas cerca al de las plaquetas (30).

• FRAGMENTOS DE HEMATÍES

Los fragmentos son generados producto de la hemolisis de los hematíes, estos tienen un
tamaño que varía entre las 2Tm y 4Tm. Al tener origen en los hematíes estos son
fragmentos citoplasmáticos carecen de contenido de ácido nucleico. Su
semicuantificacion mediante el método manual se realiza en lámina periférica tenida con
colorante Wright, y se obtiene al realizar el recuento en mil hematíes. De igual manera
estos se pueden informar de manera cualitativa mediante el uso de cruces.

Se postula que estos fragmentos o esquistocitos generan falsos recuentos (presentes por
ejemplo, en la anemia microangiopatica) produciendo una sobreestimación del número
real de plaquetas en los contadores celulares basados en impedancia.

La influencia como interferente de los fragmentos de hematíes surge cuando su

frecuencia es alta y caen en el histograma de plaquetas, siendo contadas falsamente como
tal. El porcentaje de fluorescencia y tamaño sigue el siguiente patrón: Hematíes
>fragmentos de hematíes > plaquetas. Esto permite discriminar mejor las plaquetas (36).

Sin embargo en determinadas enfermedades que cursan con microcitos como es el caso
de la anemia asiderocitica los microcitos.

• PARTÍCULAS DE LÁTEX

Las partículas de látex no fluorescentes del tamaño de 1 um afectan el recuento en modo

óptico, lo cual produce una sobrestimación en el recuento de plaquetas. Estas no son
partículas fisiológicas pero ofrecen la posibilidad de controlar experimentos con
muestras, mediante la adición de una concentración conocida de una sola partícula en las
muestras de sangre. La impedancia no es afectada debido a que la superficie es sólida de
la partícula de látex, que causa señales de impedancia diferente a la de las plaquetas (37).

• DISTRIBUCIÓN ANORMAL PLAQUETARIA

33
 El analizador hematológico SYSMEX XE 2100 en modo impedancia, muestra el
recuento de plaquetas sobre la base del análisis del histograma obtenido. Sin embargo,
cuando la presencia de interferentes es muy elevada, la curva se altera y por tanto el
recuento plaquetas (37).

2.3. Marco conceptual

• Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA).- Sustancia utilizada como agente

quelante que se adhiere a los iones de ciertos metales como el calcio, magnesio, plomo e
hierro. Se usa en medicina para prevenir los coágulos de sangre y para extraer el calcio y
el plomo del cuerpo (35).

• Agua desionizada.- Es aquella a la que se le han extraído cationes como el sodio,

el calcio, el hierro, el cobre y otros, y aniones tales como el carbonato, el fluoruro,
el cloruro y otros, mediante un proceso de intercambio iónico. Esto significa que al agua
se le han quitado todos los iones, excepto el ion hidrógeno (H+) o, expresado con
términos más rigurosos, el H3O+ y el OH-, pero puede contener pequeñas cantidades de
impurezas no iónicas, como compuestos orgánicos (1).

• Constantes corpusculares.- Los índices hematimétricos son los parámetros que

relacionan el índice hematocrito, la hemoglobina y el número de hematíes o glóbulos
rojos (38).
• Eritrocitos.- Es la célula sanguínea especializada en el transporte de oxígeno y dióxido
de carbono unidos a hemoglobina (1).

• Eritrograma.- Es el análisis de la serie roja. Consta de recuento de glóbulo rojos,

hematocrito, hemoglobina, Índices eritrocitarios en el cuadro hemático. (24).

• Exactitud.- Se refiere a cuán cerca del valor real se encuentra el valor medido (18).

• Fibrinólisis.- La fibrinolisis consiste en la degradación de las redes de fibrinaformadas

en el proceso de coagulación sanguínea, evitando la formación de trombos (39).

34
• Hematocrito.- Volumen de glóbulos con relación al total de la sangre; se expresa de
manera porcentual (27).

• Hemocito metro o cámara de Neubauer.- Dispositivo consistente en una cámara plana

de vidrio, reticulada a intervalos de 0.1 mm, que se utiliza para contar las células de la
sangre (23).

• Hemostasia.- Contención o detención de una hemorragia mediante los mecanismos

fisiológicos del organismo o por medio de procedimientos manuales, químicos,
instrumentales o quirúrgicos (39).

• Histogramas.- Es una representación gráfica de una variable en forma de barras, donde

la superficie de cada barra es proporcional a la frecuencia de los valores representados
(26).

• Macro trombocitos.- Son un grupo heterogéneo de enfermedades que

asocian trombocitopenia y plaquetas gigantes (27).

• Megacarioblasto.- Primer precursor distinguible de los megacariocitos. Son células

redondeadas u ovales de un diámetro aproximado de entre 15 y 25 micras (25).

• Micro centrifugación.- Es una centrífuga de muy reducidas dimensiones diseñada para

la centrifugación de tubos y viales pequeños. Con la centrifugación se consigue separar
los elementos sólidos dispersos en el líquido. La separación se basa en las distintas
velocidades de rotación de los elementos sólidos y líquidos (3).

• Plaquetocrito.- Porcentaje del volumen de plaquetas sobre el volumen total de sangre

(24).

• Plaquetopenia.- Disminución de las plaquetas que participan en la coagulación, la cual

puede ser ocasionada por diversas enfermedades (23).

• Plasma rico en plaquetas.- Es un producto que se obtiene por centrifugación diferencial

de sangre autóloga, es decir, extraída del mismo paciente, logrando un producto

35
 concentrado de plaquetas (600.000 a 1.500.000 x mm3), que al combinarse con Cloruro
de Calcio comienza su activación (24).

• Precisión.- Se refiere a la dispersión del conjunto de valores obtenidos de mediciones

repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la dispersión mayor la precisión (40).

• Oxalato de amonio.- Fabricado a partir de la neutralización del ácido oxálico por

el amoníaco, el oxalato de amonio corresponde a un elemento químico en forma de polvo
que se caracteriza por su transparencia y su ausencia de olor. En medicina, este
compuesto se utiliza por sus propiedades anticoagulantes (17).

• Solución hipotónica.- Es aquella que tiene menor concentración de soluto en el medio

exterior en relación al medio interior de la célula, es decir, en el interior de la célula hay
una cantidad de sal mayor que de la que se encuentra en el medio en la que ella habita
(17).

• Solución NaCl.- Es una disolución acuosa de sustancias compatibles con los organismos
vivos debido a sus características definidas, pH y fuerza iónica (9).

• Trombocitemia.- Trastorno caracterizado por una presencia excesiva de plaquetas (o

trombocitos) en la sangre (9).
• Trombocitopenia.- Es cualquier situación de disminución de la cantidad de plaquetas
circulantes en el torrente sanguíneo por debajo de los niveles normales, es decir, con un
recuento plaquetario inferior a 100.000/mm³ (6).

• Valor predictivo.- Probabilidad de no tener la enfermedad si el resultado de la prueba

diagnóstica es negativo (3).

• Venopunción.- Es la recolección de sangre de una vena. En la mayoría de los casos, se

realiza para análisis de laboratorio (8).

36
 CAPÍTULO III

HIPÓTESIS Y VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN

3.1. Hipótesis de la investigación

3.1.1. Hipótesis general

La comparación de las metodologías para el recuento de plaquetas en sangre periférica

(método Brecher y Cronkite, método de Maspes y Jamra, método de Fonio, método de
Dameshek y la metodología automatizada) en muestras de pacientes atendidos en el servicio
de Laboratorio Clínico del Hospital Regional del Cusco en el año 2017, tendrán una relación
positiva muy alta en la mayoría de las metodologías aplicadas.

3.1.2. Hipótesis específicas:

HE1 Si existe relación entre el método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método
automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del Cusco en el
año 2017

HE2 Si existe una relación moderada entre la método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y
el método de Maspes y Jamra en la precisión del recuento de plaquetas en sangre
periferica en muestras de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital
Regional del Cusco en el año 2017.

HE3 Si existe relación entre la método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método de
Fonio en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en muestras de
pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del Cusco en el año
2017.

37
HE4 Si existe relación entre la metodo Brecher y Cronkite (Gold Estándar) y el método de
Dameshek en la precisión del recuento de plaquetas en sangre periferica en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio Clinico del Hospital Regional del Cusco en el
año 2017.

3.2. Variables del trabajo de investigación

3.2.1. Variable

Comparación correlativa de métodos para el recuento de plaquetas (Precisión en el

recuento).Dimensiones: - Metodología manual
- Metodología automatizada

Indicadores: - Cámara de Neubauer

- Frotis sanguíneo
- Impedancia eléctrica

Unidad de medida: Número de plaquetas por mm3

3.2.2. Representación esquemática de operacionalización de las variables de estudio

38
 VARIABLE DEL DEFINICION DEFINICION
DIMENSIONES INDICADORES UNIDAD VALOR
ESTUDIO CONCEPTUAL OPERACIONAL

Comparación Se usa para indicar Tomada la muestra sanguínea Metodología • Recuento de • Correlación
en tubo de ensayo con aditivo
correlativa de la variación del anticoagulante EDTA de 3 ml, manual: Plaquetas positiva baja
métodos para el recuento de se procede a realizar el • Met. Brecher & Manuales en • Correlación
recuento de plaquetas por 03
recuento de plaquetas utilizando metodologías,02 manuales Cronkite cámara Neubauer positiva
plaquetas (Precisión diferentes formas de (Directa e Indirecta) y 01
automatizada las cuales
• Mét. Maspes y • Recuento de Número de moderada
en el recuento). realizar; para detallamos: MÉTODOS Jamra Plaquetas Plaquetas • Correlación
DIRECTOS; Son los que
determinar el utilizan una solución • Mét. Fonio Manuales en contadas positiva alta
número de hipotónica para lisar (Romper) • Mét. Dameshek Frotis sanguíneo definidas por • Correlación
los eritrocitos o Glóbulos Rojos
trombocitos de la muestra sanguínea el cual de sangre milímetro positiva muy
presentes en un permitirá únicamente el Metodología periférica cubico alta
recuento de Plaquetas por
determinado microscopia con el uso de la
automatizada: • Recuento de (mm3) • Correlación
volumen de sangre cámara de Neubauer; Plaquetas positiva
MÉTODOS INDIRECTOS;
(plaquetas por mm3) Son los que utilizan un frotis automatizado por grande y
sanguíneo coloreada con metodología de
tinción de Wrigth, el cual va a
perfecta
permitirla observación y Impedancia
recuento de plaquetas por
microscopia.
eléctrica.
METODOLOGÍA
AUTOMATIZADA; Apoyado
en la Impedancia eléctrica,
técnica automatizada con el
que cuenta el equipo
hematológico automatizado de
5 estirpes celulares
(MINDRAYBC 5380).

39
 CAPITULO IV

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

4.1. Tipo, nivel y diseño de investigación

4.1.1. Tipo de investigación

El trabajo de investigación desarrollado es de tipo basico correlacional, esto se da

porque busca describir los fenomenos observados especificando y determinando las
propiedades, caracteristicas y rasgos importantes del fenomeno, identificando la variable,
determinando las dimensiones del problema, sin explicar las relaciones causales entre ellas.
Sera de enfoque cuantitativo por que los resultados obtenidos del trabajo de investigacion son
de carácter concluyente.

4.1.2. Nivel de investigación

El presente estudio plantea un de nivel descriptivo, correlativo, cuantitativo y

analítico, ya que el investigador mide las reacciones de ambos grupos con precisión y
controlara deliberadamente las variables para delimitar relaciones entre ellas, basado en la
método científico el mismo que se observara en el resultado final tal y como se dan en su
contexto natural, para después analizarlos mediante dos métodos recuento manual de
plaquetas.

4.1.3. Diseño de investigación

El presente trabajo será no experimental, puesto que no pretende manipular

deliberadamente las variables independientes, ya que solo se observara los fenómenos tal
como se dan en su ambiente natural para después ser analizados.

40
[Link]. Diseño esquemático de la investigación.

El diseño de la investigación será longitudinal, esto es debió a que se realizara en

periodos constantes con determinada cantidad de muestras, además la evaluación pasaba por
los dos métodos (manual y automatizado) de las muestras de pacientes atendidos en el
laboratorio del Hospital Regional del Cusco – 2017.

4.2. Universo, población y muestra de estudio

4.2.1. Universo
Pacientes de la Región Cusco que acuden al servicio de Laboratorio Clínico del
Hospital Regional del Cusco.

4.2.2. Población
Muestras de pacientes procesadas en el servicio de Hematología del Laboratorio del
Hospital Regional del Cusco en el periodo de Octubre a Noviembre del 2017.

4.2.3. Muestra
En el trabajo de investigación se utilizara 138 muestras de pacientes con órdenes de
hemograma que pertenecen a la edad adulta joven, atendidos en el laboratorio del Hospital
Regional. Cantidad que se determinó al utilizar la técnica de muestreo sistemático mediante
la fórmula estadística de determinación de muestra para una proporción.

[Link]. Muestreo de la investigación

El tipo de muestreo para la selección de los participantes fue de forma aleatoria

simple, donde se realizó una división simétrica previa a la población de estudió en grupos que
son homogéneos con respecto al sexo en etapa de edad adulta joven y al número total de
atenciones al mismo que se le asignó un número determinado de miembros el que van a
determinar y componer la muestra final.

Para la cual se utilizó la técnica de muestreo sistemático, una de las técnicas de selección más
usados para ser exactos y según la cantidad de elementos de la muestra que se han de elegir
de un determinado estrato, se usó la variante de muestreo estratificado de asignación
proporcional donde finalmente el tamaño de la muestra de un determinado estrato es

41
proporcional al tamaño de la muestra dentro de la población.

Donde para la obtención del tamaño muestral de este estudio, se determinó mediante la
fórmula estadística de determinación de muestra para una proporción, utilizando el número
de pacientes con órdenes de hemograma atendidos en el laboratorio del Hospital Regional
durante el periodo de Octubre a Noviembre del 2017, buscando cumplir los criterios de
inclusión y exclusión especificados; de este modo se calculó el tamaño muestral cuya
fórmula estadística es:
Z2 P Q N
n=
E2 (N-1) + Z2 P Q

N= 200 Z= 95 P = 5% Q = 0.95 E= 3%

Dónde:

• N = Tamaño de la población

• Z = Grado de confianza

• E = Error absoluto o precisión de la estimación de la proporción

• P = Proporción de unidades que poseen el atributo de interés

• Q = resto aritmético de P.

Obteniéndose:

n= (0.96)2 * 0.005*0.95*0.003

0.0032 (200-1) + (0.96)2 *0.005* 0.95

n= 138

Para el estudio se obtuvo 138 muestras con órdenes de hemograma, así se logró

obtener una muestra estadísticamente significativa.

42
[Link]. Criterios de selección de la muestra

a. Criterios de inclusión
• Muestras de pacientes ambulatorios y hospitalizados que sean procesados en el servicio
de Hematología del Laboratorio del Hospital Regional del Cusco.
• Muestras que incluyan dentro de su solicitud el examen de hemograma completo
(Anexo N°10) o recuento de plaquetas.
• Muestras de sangre en tubo con anticoagulante EDTA tripotásico.
• Muestras que fueron procesadas en el equipo hematológico del servicio de hematología.

• Edad adulta joven ( 20 a 40 años de edad)

b. Criterios de exclusión

• Muestras de pacientes transfundidos.

• Muestras de pacientes que reciben cloruro de sodio o rehidratantes al momento de la
toma de muestra.
• Muestras de pacientes que están tomando ácido acetilsalicílico u otros medicamentos
que alteren la producción de plaquetas.
• Muestras de pacientes que estén tomando antidepresivos o antiinflamatorios no
esteroides, por lo menos en los últimos 7 días.
• Pacientes mayores de 40 años
• Pacientes menores de 20 años

4.3. Métodos, técnicas e instrumentos de colecta de datos

4.3.1. Diseño y elaboración de los instrumentos de recojo de información

a) Se diseñó y elaboro el instrumentó de recojo de resultados según los datos requeridos en
el trabajo de investigación (Anexo 1).
b) Se seleccionó 138 muestras, las cuales habrán cumplido con nuestros criterios de
inclusión.
c) Codificar las muestras seleccionadas.
d) Se realizó el procedimiento de recuento de plaquetas según el método de Brecher &
Cronkite, método de Maspes y Jamra, método de Dameshek y el método de Dameshek

43
 modificado por Fonio mencionados para la investigación.
e) El resultado de cada método fue ingresado en la ficha de recolección de datos (Anexo 1),
junto con el resultado del equipo automatizado.
f) El resultado de cada método manual fue comparado con el resultado del equipo,
obteniendo el error relativo (Anexo 1).
g) Diseño y elaboración del instrumento de interpretación de correlación de resultados de los
métodos.( Anexo 2)
h) Cada valor de correlación estuvo clasificado según la escala de interpretación del valor de
correlación.
i) Se ingresó el coeficiente de variación al instrumento de interpretación (Anexo 2), que
mediante la escala de interpretación, se obtuvo el grado de correlación de los métodos
manuales, respecto al método automatizado para el recuento de plaquetas.
Tabla 2 Escala de interpretación del valor de Correlación de Karl Pearson

Valor Significado

-1 Correlación negativa grande y perfecta

-0,9 a -0,99 Correlación negativa muy alta

-0,7 a -0,89 Correlación negativa alta

-0,4 a -0,69 Correlación negativa moderada

-0,2 a -0,39 Correlación negativa baja

-0,01 a -0,19 Correlación negativa muy baja

0 Correlación nula

0,01 a 0,19 Correlación positiva muy baja

0,2 a 0,39 Correlación positiva baja

0,4 a 0,69 Correlación positiva moderada

0,7 a 0,89 Correlación positiva alta

0,9 a 0,99 Correlación positiva muy alta

1 Correlación positiva grande y perfecta

44
4.3.2. Validación de los instrumentos de recojo de información

La validación del instrumento de recojo de información de la presente investigación

que tiene como título: “Comparacion de metodos para el recuento manual de plaquetas en
muestras de pacientes atendidos en el Hospital Regional del Cusco – 2017”, fue revisado y
validado por un experto Lic. Tecnologo Medico, entendido en el Area cuya experiencia y
grado academico correspondiente le confiere la posibilidad de evaluar, revisar y dar
conformidad del uso de los instrumentos para la recoleccion de los datos de esta
investigacion, el mismo que plasma su sello y rubrica en señal de conformidad.

4.3.3. Aplicación y recojo de la información requerida

La aplicación de este proyecto de investigación fue realizada en el periodo de Octubre

a Noviembre del 2017 según cronograma.

4.3.4. Técnicas e instrumentos de colecta de información

Se utilizó la técnica de la observación e identificación de los resultados obtenidos en el

método de Brecher & Cronkite, método de Maspes y Jamra, método de Dameshek, el
método de Fonio y el método automatizado, procesados para el recuento de plaquetas,
utilizando como instrumento una tabla de recolección de datos.

4.4. Técnicas de análisis de los datos obtenidos

Se utilizara el programa de Excel del paquete de Microsoft office 2010, que es un
paquete estadístico, nos permitirá obtener el factor de correlación en cada método manual
respecto al método automatizado, que por medio de cálculos matemáticos podremos
identificar el grado de correlación de cada método.

4.5. Aspectos Éticos

La salud integral de los participantes no se expuso a riesgo alguno. La
confidencialidad de la información se garantizó mediante la restricción de acceso solo al
personal del equipo de investigación.
Dado la excepción estipulada del caso, de acuerdo a los criterios éticos de las normas de
“Helsinki”, la presentación del trabajo de investigación por ser un estudio de tipo

45
retrospectivo solo se limita a la obtención de datos estadísticos de manera que su uso es único
y exclusivo para fines de estudio, sin exponer riesgo ni integridad de la persona per se, por lo
que es justificable la omisión de consentimiento informado de algún donante que hizo su
intervención en fechas anteriores.

El comité de Ética al ser una organización Independiente integrada por la institución, el

investigador, el docente asesor, el personal de Laboratorio Clínico y el área de hematología
así como la Universidad donde se presenta el presente estudio mantiene la responsabilidad de
garantizar la protección de los derechos, seguridad y bienestar de los sujetos de investigación
por medio de la evaluación, aprobación y revisión constante del protocolo, enmiendas,
métodos y materiales usados para obtener y documentar los resultados de los sujetos del
estudio, permitiendo que la elaboración de la investigación sea sostenida dentro del marco de
la protección del participante así como el personal implicado en el presente estudio.

46
 CAPÍTULO V

ANÁLISIS DE RESULTADOS

5.1. Resultados

En el presente estudio, se evaluaron un total de 138 muestras de pacientes de ambos

sexos y diferentes grupos etarios entre 20 a 40 años, que fueron procesados en el
servicio de Hematología del Laboratorio del Hospital Regional del Cusco – 2017, que
cumplen con los criterios de inclusion requeridos por esta investigacion

47
Tabla 3: Comparacion del coeficiente de correlacion, media, desviacion estandar y el coeficiente de variacion obtenidos en el recuento
plaquetario con los metodos manuales y el equipo automatizado, de las muestras procesadas en el servicio de Hematología de pacientes
atendidos en el laboratorio del Hospital Regional del Cusco – 2017.

TIEMPO DE INTERPRETACION
COEF. DE COEF.
METODOS PROCESAMIENTO Y RECUENTO MEDIA D.S VARIACION DE LA
CORRELAC.
LECTURA CORRELACION
Automat. 293007 133448 0.00338
Correlación positiva
AUTOMATIZADO 01 minuto 30 segundos 0.98
318123 141987 muy alta
B&C 0.00323

MASPER & Manual 263098 126843 0.00349

40 minutos 0.84 Correlación positiva
JAMRA B&C 318123 141987 0.00323 alta

Manual 295948 142886 0.00350

Correlación positiva
FONIO 20 minutos 0.97
318123 141987 muy alta
B&C 0.00323

Manual 284014 128106 0.00326

Correlación positiva
DAMESHEK 20 minutos 0.93
318123 141987 muy alta
B&C 0.00323

48
Interpretación:

• Podemos evidenciar que el método Automatizado tiene un tiempo de procesamiento y

medición que fluctúa entre 1 minuto con 30 segundos aproximadamente, y frente al
análisis estadístico arroja un coeficiente de correlación de 0.98, con una media de 293007,
cuya desviación estándar es de 133448, existiendo un coeficiente de variación de 0.00338,
lo que nos permite interpretar el coeficiente de correlación con una: “correlación positiva
muy alta”.

• Mostramos tambien que el método de Masper & Jamra tiene un tiempo de procesamiento
y medición que fluctúa entre los 40 minutos aproximadamente, el mismo que utiliza el
recuento en forma manual y frente al análisis estadístico arroja un coeficiente de
correlación de 0.84, con una media de 263098, cuya desviación estándar es de 126843,
existiendo un coeficiente de variación de 0.00349, lo que nos permite interpretar el
coeficiente de correlación con una: “correlación positiva alta”.

• Denotamos que el método de Fonio tiene un tiempo de procesamiento y medición que

fluctúa entre los 20 minutos aproximadamente, el mismo que utiliza el recuento en forma
manual y frente al análisis estadístico arroja un coeficiente de correlación de 0.97, con una
media de 295948, cuya desviación estándar es de 142886, existiendo un coeficiente de
variación de 0.00350, lo que nos permite interpretar el coeficiente de correlación con una:
“correlación positiva muy alta”.

• Exponemos que el método de Dameshek tiene un tiempo de procesamiento y medición

que fluctúa entre los 20 minutos aproximadamente, el mismo que utiliza el recuento en
forma manual y frente al análisis estadístico arroja un coeficiente de correlación de 0.93,
con una media de 284014, cuya desviación estándar es de 128106, existiendo un
coeficiente de variación de 0.00326, lo que nos permite interpretar el coeficiente de
correlación con una: “correlación positiva muy alta”.

49
Gráfico 01 Regresión lineal del equipo automatizado en comparación con el método de
Brecher y Cronkite – Coeficiente de correlación: 0.98

800000

700000
Rango Metodologia Automatizaada

600000

500000

400000

300000

200000

100000

0
0 200000 400000 600000 800000 1000000
Rango Metodologia Brecher & Cronkite

Interpretación.- En el grafico N° 01 que representa la regresión lineal comparativa entre la

metodología automatizada y la metodología de Brecher & Cronkite se aprecia una dispersión
que nos muestra que efectivamente no existe una relación numérica exacta entre las dos
variables expuestas ya que no toda la variación en los valores hallados del método
automatizado puede ser explicada por la variación en los valores hallados con el método
Brecher y Cronkite, sin embargo si entre estas variables existiera una relación lineal perfecta,
entonces todos los puntos caería a lo largo de la recta de regresión, si no que están
“dispersos” en torno a ello, esta dispersión representa la variación en los valores hallados por
el método automatizado que no puede atribuirse a la variación en los valores hallados con el
método Brecher & Cronkite, pero que denotan cercanía entorno a la línea de regresión
apoyados en el valor hallado del coeficiente de correlación que está por encima de los valores
esperados (<-1.0 y > 1.0) lo que permite interpretar al estudio comparativo como una
correlación lineal directa es decir existe correlación positiva muy alta entre las dos variables
comparadas.

50
 Gráfico 02: Regresión lineal del método de Masper y Jamra en comparación con el
método de Brecher & Cronkite - Coeficiente de correlación: 0.84

800000

700000
Rango Metodologia Masper & Jamra

600000

500000

400000

300000

200000

100000

0
0 200000 400000 600000 800000 1000000
Rango Metodologia Brecher & Cronkite

Interpretación.- En el grafico N° 02 que representa la regresión lineal comparativa entre la

metodología Masper & Jamra y la metodología de Brecher & Cronkite se aprecia una
dispersión que nos muestra que efectivamente no existe una relación numérica exacta entre
las dos variables expuestas ya que no toda la variación en los valores hallados del método
Masper & Jamra puede ser explicada por la variación en los valores hallados con el método
Brecher y Cronkite, sin embargo si entre estas variables existiera una relación lineal perfecta,
entonces todos los puntos caería a lo largo de la recta de regresión, si no que están
“dispersos” en torno a ello, esta dispersión representa la variación en los valores hallados por
el método Masper & Jamra que no puede atribuirse a la variación en los valores hallados con
el método Brecher & Cronkite, pero que denotan cercanía entorno a la línea de regresión
apoyados en el valor hallado del coeficiente de correlación que está por encima de los valores
esperados (<-1.0 y > 1.0) lo que permite interpretar al estudio comparativo como una
correlación lineal directa es decir existe correlación positiva alta entre las dos variables
comparadas.

51
 Gráfico 03: Regresión lineal del método de Fonio en comparación con el método de
Brecher & Cronkite - Coeficiente de correlación: 0.97

900000

800000
Rango Metodologia de Fonio

700000

600000

500000

400000

300000

200000

100000

0
0 200000 400000 600000 800000 1000000
Rango Metodologia Brecher & Cronkite

Interpretación.- En el grafico N° 02 que representa la regresión lineal comparativa entre la

metodología Fonio y la metodología de Brecher & Cronkite se aprecia una dispersión que nos
muestra que efectivamente no existe una relación numérica exacta entre las dos variables
expuestas ya que no toda la variación en los valores hallados del método Fonio puede ser
explicada por la variación en los valores hallados con el método Brecher & Cronkite, sin
embargo si entre estas variables existiera una relación lineal perfecta, entonces todos los
puntos caería a lo largo de la recta de regresión, si no que están “dispersos” en torno a ello,
esta dispersión representa la variación en los valores hallados por el método Fonio que no
puede atribuirse a la variación en los valores hallados con el método Brecher & Cronkite,
pero que denotan cercanía entorno a la línea de regresión apoyados en el valor hallado del
coeficiente de correlación que está por encima de los valores esperados (<-1.0 y > 1.0) lo que
permite interpretar al estudio comparativo como una correlación lineal directa es decir existe
correlación positiva muy alta entre las dos variables comparadas.

52
Gráfico 04: Regresión lineal del método de Dameshek en comparación con el método
de Brecher & Cronkite - Coeficiente de correlación: 0.93

900000

800000
Rango Metodologia de Dameshek

700000

600000

500000

400000

300000

200000

100000

0
0 200000 400000 600000 800000 1000000
Rango Metodologia Brecher & Cronkite

Interpretación.- En el grafico N° 02 que representa la regresión lineal comparativa entre la

metodología Dameshek y la metodología de Brecher & Cronkite se aprecia una dispersión
que nos muestra que efectivamente no existe una relación numérica exacta entre las dos
variables expuestas ya que no toda la variación en los valores hallados del método Dameshek
puede ser explicada por la variación en los valores hallados con el método Brecher &
Cronkite, sin embargo si entre estas variables existiera una relación lineal perfecta, entonces
todos los puntos caería a lo largo de la recta de regresión, si no que están “dispersos” en torno
a ello, esta dispersión representa la variación en los valores hallados por el método Dameshek
que no puede atribuirse a la variación en los valores hallados con el método Brecher &
Cronkite, pero que denotan cercanía entorno a la línea de regresión apoyados en el valor
hallado del coeficiente de correlación que está por encima de los valores esperados (<-1.0 y >
1.0) lo que permite interpretar al estudio comparativo como una correlación lineal directa es
decir existe correlación positiva muy alta entre las dos variables comparadas.

53
 Gráfico 05 Campana de Gaus del método automatizado en comparación con el
método de Brecher & Cronkite

La mayoría de los resultados del recuento plaquetario por cada metodología han variado
discretamente respecto a su media y desviaciones estándar hallados previamente a la limpieza
de aquellos valores demasiado alejados de los rangos estimados. En esta grafica todo los
valores hallados coinciden con los criterios de gaussianidad permitiendo así demostrar la
precisión de los valores hallados con el uso de la metodología automatizada para el recuento
de plaquetas utilizando +- 2.0 D.S al intervalo de confianza al 98%, teniendo como límite
inferior un valor de 26111 y como límite superior el valor de 396455. Tras la ejecución de la
evaluación estadística descriptiva hallada, los resultados obtenidos por esta metodología
revelan cierta diferencia con respecto a otras metodologías, la medida de posición central
permitió conocer que todos los valores característicos obtenidos de la distribución no son
valores centrales sin embargo se hallan ubicados dentro del porcentaje del intervalo de
confianza, así como dentro de las deviaciones estándar, demostrando así que la distribución
del recuento de plaquetas por metodología automatizada es normal respecto a su media
(293007) y su desviación estándar (133448).

54
Gráfico 06 Campana de Gaus del método de Masper &a Jamra en comparación con el
método de Brecher & Cronkite

La mayoría de los resultados del recuento plaquetario por cada metodología han variado
discretamente respecto a su media y desviaciones estándar hallados previamente a la limpieza
de aquellos valores demasiado alejados de los rangos estimados. En esta grafica todo los
valores hallados coinciden con los criterios de gaussianidad permitiendo así demostrar la
precisión de los valores hallados con el uso de la metodología de Masper & Jamra para el
recuento de plaquetas utilizando +- 2.0 D.S al intervalo de confianza al 98%, teniendo como
límite inferior un valor de 9412 y como límite superior el valor de 389941. Tras la ejecución
de la evaluación estadística descriptiva hallada, los resultados obtenidos por esta metodología
revelan cierta diferencia con respecto a otras metodologías, la medida de posición central
permitió conocer que todos los valores característicos obtenidos de la distribución no son
valores centrales sin embargo se hallan ubicados dentro del porcentaje del intervalo de
confianza, así como dentro de las deviaciones estándar, demostrando así que la distribución
del recuento de plaquetas por metodología automatizada es normal respecto a su media
(263098) y su desviación estándar (126843).

55
 Gráfico 07 Campana de Gaus del método de Fonio en comparación con el método de
Brecher & Cronkite

La mayoría de los resultados del recuento plaquetario por cada metodología han variado
discretamente respecto a su media y desviaciones estándar hallados previamente a la limpieza
de aquellos valores demasiado alejados de los rangos estimados. En esta grafica todo los
valores hallados coinciden con los criterios de gaussianidad permitiendo así demostrar la
precisión de los valores hallados con el uso de la metodología de Fonio para el recuento de
plaquetas utilizando +- 2.0 D.S al intervalo de confianza al 98%, teniendo como límite
inferior un valor de 10176 y como límite superior el valor de 438834. Tras la ejecución de la
evaluación estadística descriptiva hallada, los resultados obtenidos por esta metodología
revelan cierta diferencia con respecto a otras metodologías, la medida de posición central
permitió conocer que todos los valores característicos obtenidos de la distribución no son
valores centrales sin embargo se hallan ubicados dentro del porcentaje del intervalo de
confianza, así como dentro de las deviaciones estándar, demostrando así que la distribución
del recuento de plaquetas por metodología automatizada es normal respecto a su media
(295948) y su desviación estándar (142886).

56
Gráfico 08 Campana de Gaus del método de Dameshek en comparación con el método
de Brecher & Cronkite

La mayoría de los resultados del recuento plaquetario por cada metodología han variado
discretamente respecto a su media y desviaciones estándar hallados previamente a la limpieza
de aquellos valores demasiado alejados de los rangos estimados. En esta grafica todo los
valores hallados coinciden con los criterios de gaussianidad permitiendo así demostrar la
precisión de los valores hallados con el uso de la metodología de Dameshek para el recuento
de plaquetas utilizando +- 2.0 D.S al intervalo de confianza al 98%, teniendo como límite
inferior un valor de 27802 y como límite superior el valor de 412120. Tras la ejecución de la
evaluación estadística descriptiva hallada, los resultados obtenidos por esta metodología
revelan cierta diferencia con respecto a otras metodologías, la medida de posición central
permitió conocer que todos los valores característicos obtenidos de la distribución no son
valores centrales sin embargo se hallan ubicados dentro del porcentaje del intervalo de
confianza, así como dentro de las deviaciones estándar, demostrando así que la distribución
del recuento de plaquetas por metodología automatizada es normal respecto a su media
(284014) y su desviación estándar (128106).

57
5.2. COMPROBACIÓN DE HIPÓTESIS

PRUEBA DE NORMALIDAD

Ho: Los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper & Jamra, Fonio,
Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio del Hospital Regional del Cusco Tiene una
distribución normal.

Ha: Los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper & Jamra, Fonio,
Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio del Hospital Regional del Cusco. No Tiene una
distribución normal.

Nivel de significancia: 0.05 (5%).

Pruebas de normalidad: Kolmogorov-Smirnov

Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadístico Gl Sig. Estadístico gl Sig.
AUTOMAT
,165 138 ,000 ,881 138 ,000
.
B&C ,177 138 ,000 ,888 138 ,000
M&J ,163 138 ,000 ,880 138 ,000
FONIO ,161 138 ,000 ,868 138 ,000
DAMESHEK ,138 138 ,000 ,897 138 ,000

a. Corrección de significación de Lilliefors

Los resultados de los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper
& Jamra, Fonio, Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de
plaquetas tienen un p - valor inferior a 0,05 en ambas variables e consecuencia se rechaza
la hipótesis nula (Ho) y aceptamos la hipótesis alterna (H1) en la población de estudio no
presento una distribución de normalidad.

58
59
PRUEBA DE HOMOGENEIDAD DE VARIANZA

Prueba de homogeneidad de varianzas

Estadístico de
Levene gl1 gl2 Sig.
AUTOMAT
,059 1 136 ,808
.
B&amp;C ,047 1 136 ,829
M&amp;J 2,927 1 136 ,089
FONIO ,001 1 136 ,972
DAMESHE
,366 1 136 ,546
K

Ho: Los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper & Jamra, Fonio,
Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio del Hospital Regional del Cusco No Tiene
homogeneidad en las varianzas.

Ha: Los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper & Jamra, Fonio,
Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de plaquetas en muestras
de pacientes atendidos en el Laboratorio del Hospital Regional del Cusco. Tiene diferencia en
las varianzas.

Nivel de significancia: 0.05 (5%).

60
Pruebas de homogeneidad de varianzas: Levene

Los resultados de los métodos manuales de Brecher & Cronkite (Gold estándar), Masper
& Jamra, Fonio, Dameshek y el método automatizado en la precisión del recuento de
plaquetas tienen un p - valor mayor a 0,05 en ambas variables e consecuencia se rechaza la
hipótesis alterna (H1) y aceptamos la hipótesis nula (Ho) en la población.

61
 DISCUSIÓN

1. El presente trabajo de investigación determinó una correlación positiva entre los métodos
de estudio (metodología de Brecher y Cronkite, el mismo que es considerado el método
Gold Estándar según el MINSA, la metodología automatizada y las metodología manuales
de Masper & Jamra, Fonio y Dameshek) para el recuento de plaquetas, obteniéndose un
valor máximo de correlación de 0.98 y un mínimo de 0.84, con respecto al valor de
p<0.05 , demostrando asi la utilidad de estas metodologías estadísticamente expresadas.

2. La relación que existe en la aplicación del método manual y el método automatizado para
la precisión del conteo de plaquetas arroja un coeficiente de correlación alto, directo y
significativo por lo tanto el recuento de plaquetas utilizando el método manual es
reproducible y confiable, así mismo se debe señalar que dentro de los métodos manuales,
el método de Fonio brindó mejores resultados tanto por la precisión como por el tiempo de
procesamiento y lectura.

3. Según los resultados hallados bajo la estadística operacional apoyados en el coeficiente de

correlación obtenido, se ha demostrado que el recuento de Manual de plaquetas y el
método de Fonio muestran una correlación positiva muy alta con respecto al método de
Brecher y Cronkite, (Metodología Gold estándar MINSA) los cuales utilizan para el
conteo a la cámara de neubauer y el extendido en lámina, respectivamente, así también
debemos señalar que el método de Fonio cobra vital importancia en nuestro medio local
puesto que existen muchos laboratorios clínicos que no cuentan con metodología
automatizada ni cámara de neubauer para la confirmación del número de plaquetas.

4. El método de Dameshek contrasto con el método de Brecher & Cronkite determinando un

coeficiente de correlación de 0.98 (p<0.05) demostrando así una correlación positiva,
significativa.

5. El método de Masper & Jamra, a comparación de los otros métodos, no tiene un uso muy
habitual, a pesar de tener una correlación positiva alta, esto debido posiblemente a la
dificultad de contar con el reactivo diluyente (formol, quimico controlado por las

62
 autoridades sanitarias) y al tiempo de procesamiento prolongado de aproximadamente 40
minutos que demanda.

6. El método de Dameshek presenta una correlación positiva muy alta, hallando así un
coeficiente de correlación es de 0.91, lo que demuestra que a comparación de la
correlación de los métodos de “Brecher & Cronkite” y “Fonio”, este método será menos
preciso con respecto al índice establecido según la estadistica

7. Los estudios descritos en el trabajo de investigación: “COMPARACIÓN DEL

CONTEO PLAQUETARIO EMPLEANDO DIFERENTES METODOLOGÍAS, EN
PACIENTES CON PÚRPURA TROMBOCITOPÉNICA Y SÍNDROMES
MIELODISPLÁSICOS”, escrito por Zabala (2013 - Venezuela), determino que para el
recuento de plaquetas por el método manual en pacientes con purpura trombocitopenica y
síndrome mielodisplasico, arrojó una correlación positiva y diferencia significativa (p <
0,05), al compararlo con la metodología automatizada, pudiéndose aceptar los valores por
este método.

8. En la investigación de Guevara - Peralta 1999, demuestra el grado de importancia del uso

de metodologías basádas en la correlación del método de Dameshek relacionado al método
referencial (método de Brecher & Cronkite) que presenta menor error y menor dispersión
dando una importancia significativa a la metodología de estudio.

9. A nuestro criterio, el método manual de “Fonio” es el más eficiente, tanto por su

coeficiente de correlación que es 0.95, como por su tiempo de procesamiento y lectura (20
minutos aproximadamente), lo que demuestra que su procesamiento se realiza con un
presupuesto mínimo por debajo de las otras metodologías propuestas y en menor tiempo
posible.

63
 CONCLUSIONES

1. Las metodologías existentes para el recuentro de plaquetas en sangre periférica humana

comparadas al Gold estándar ( metodología de Brecher y cronkite) mostraron resultados
con una similitud estrecha en cuanto a sus valores, los mismos que fueron evidenciados
por la resultante en el coeficiente de correlación y demostrados bajo los criterios de
Gaussianidad que permiten determinar la precisión y la cercanía de sus resultados con
respecto a sus medias y desviaciones típicas por cada metodología.

2. La comparación en la aplicación del método Brecher & Cronkite versus el método

automatizado para hallar la correlación del recuento de plaquetas arrojo un resultado
directo y significativo según la estadística utilizada con el uso del Valor P para estas dos
metodologías destacando su efectividad y precisión, determinados también por el
coeficiente de correlación y demostrados bajo los criterios de Gaussianidad.

3. Según el coeficiente de correlación hallado para el método automatizado y para método

de Fonio, estos demuestran resultados mucho más cercanos a la metodología de Brecher
y Cronkite (Gold Estándar). Cabe resaltar que no todos los laboratorios cuentan con
automatización para el procesamiento de sus muestras en el área de hematología, es por
lo que el método de Fonio (método manual) cobra relevancia para laboratorios de pocos
recursos tecnológicos.

4. Con los resultados hallados en la presente investigación científica, podemos afirmar que
el método manual de Automatizado muestra la mayor cercanía, efectividad, confianza y
precisión al método Brecher y Cronkite (Gold Estándar), considerando su tiempo de
procesamiento de 1 min 30 seg por automatización.

5. Con los resultados hallados en la presente investigación científica, podemos afirmar que
el método manual de Fonio muestra también cercanía , efectividad, confianza y precisión
con respecto al método Brecher y Cronkite (Gold Estándar) teniendo en cuenta también
su tiempo de procesamiento y lectura (20 minutos aproximadamente).

6. Con los resultados hallados en la presente investigación científica, podemos afirmar que
el método Masper & Jamra muestra una menor precisión y menor cercanía, efectividad,
confianza y precisión con respecto al método Brecher y Cronkite (Gold Estándar)

64
 teniendo en cuenta también su tiempo de procesamiento y lectura (20 minutos
aproximadamente) y un tiempo de procesamiento es prolongado de aproximadamente 40
minutos.

7. El método de Masper & Jamra, presento una menor precisión a comparación de los otros
métodos, esto probablemente podría estar influenciado por el uso del insumo diluyente
(formol), que solo actúa como conservante celular mas no como lisante.

8. Con los resultados hallados en la presente investigación científica, podemos afirmar que
el método Dameshek muestra una menor precisión y menor cercanía, efectividad,
confianza y precisión con respecto al método Brecher y Cronkite (Gold Estándar).

9. El método de Dameshek presento una menor precisión la cual puede estar influenciada
por que se utiliza otros parámetros más al momento de hallar el resultado final en el
recuento de plaquetas, por lo cual presenta mayor variablidad en los resultados.

10. Es importante recordar que en casos de trombocitopenia y trombofilia, el uso de ambos

métodos manuales, tanto los directos (recuento en cámara) e indirectos (frotis
sanguíneo), darían un mayor valor diagnóstico ya que no solo permitirán el recuento de
plaquetas sino también corroborar el tamaño, morfología y distribución de las plaquetas
en todos los pacientes, considerándose como una herramienta útil para la confirmación
de posibles patologías.

11. Debido a que existen diversas elementos que pueden interferir en el recuento plaquetario
por el método automatizado, como fragmentos eritrocitarios, agregados lipídicos y
proteicos, sobreestimando su recuento al presentar un tamaño similar a las plaquetas, y
con el fin de asegurar los valores reales de los resultados, se podría utilizar un método
manual de muy alta correlación como es el “Método de Fonio” el que demostró tener una
correlación muy alta positiva, lo cual lo hace favorable para su uso tanto por el tiempo de
procesamiento y lectura como por la precisión de su recuento.

65
 RECOMENDACIONES

• Por existir una alta relación entre el método automatizado y el método manual, se debería
de propiciar la capacitación del personal en el uso de dichos métodos manuales, ya que la
gran mayoría de centro de salud no cuentan con la metodología para el método
automatizado.

• Siendo el método manual de “Fonio” el más eficaz, tanto en la precisión de recuento de

plaquetas y el tiempo de procesamiento de muestra, por lo que sería el más recomendable
para su uso, y por ello se debe brindar mayor información y capacitación al personal
encargado especialistas en realizar dicho examen, por lo menos hasta que se pueda contar
con metodología más precisa como es el caso de los sistemas automatizados por ejemplo.

• Es importante destacar que los laboratorios automatizados, deben establecer sus criterios
propios para el empleo de un método alternativo como el manual y la revisión profesional
de los extendidos de sangre, basada en los principios descritos en las normas
internacionales, las señalizaciones del instrumento y las limitaciones pre-analíticas propias
de las técnicas.

• Participar en programas de evaluación externa de la calidad (PEEC) que lleven a mejorar

la variabilidad en los reportes y garantizar la confiabilidad del proceso analítico, con el fin
de obtener el máximo beneficio de las metodologías aplicadas.

• Es necesario indicar que todo el personal encargado de realizar este examen sea capacitado
en la identificación de plaquetas para poder adecuarse de manera eficiente al método
manual propuesto.

• Incidir en la inclusión de planes anuales presupuestales de las diversas unidades ejecutoras

a nivel nacional inmersos en el MINSA a ejecutar planes estratégicos en la
implementación de metodologías automatizadas en los laboratorios clínicos que lo
ameritan por la carga laboral existente así como la complejidad que lo sugiere por ser
garantía de trabajo, rapidez y bajo costo así como la cercana relación a los resultados
obtenidos en el recuento de plaquetas en sangre periférica humana con respecto a la
metodología Gold Estándar ya establecida.

66
 BIBLIOGRAFÍA

1. Campuzano Maya G. Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. La

Clínica y el Laboratorio. 2013; 13(65).

2. Zabala N. Comparación del contaje plaquetario empleando diferentes metodologías, en

pacientes con púrpura trombocitopénica y síndromes mielodisplásicos. Revista
Multidisciplinaria del Consejo de Investigación de la Universidad del Oriente. 2013;
25(3).

3. Terrazas M. Estudio comparativo entre metodos de conteo de plaquetas. Newslab.

2010;(98).

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41. Campuzano Manya j. .

69
ANEXOS

70
Anexo N° 01:

FICHA DE EVALUACION

“COMPARACION DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS EN MUESTRAS DE PACIENTES ATENDIDOS EN

EL HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO – 2017”
METODOS MANUALES
Met. Automatizado Met. De Masper & Jamra Met. De Fonio Met. De Dameshek
CODIGO RECUENTO % de % % de % de
DEL DEL MET. variación Variación variación variación
PACIENTE B&C RECUENTO entre M. RECUENTO entre M. RECUENTO entre M. RECUENTO entre M.
B&C y B&C y M. B&C. y B&C y M.
M.A M&J M.F D.

71
Anexo N° 02:

CUADRO DE INTERPRETACION DE LA CORRELACION DE LOS RESULTADOS

TIEMPO DE COEF. DE
COEF. INTERPRETACION DE LA
MET. PROCESAMIENT RECUENTO CORRELAC MEDIA D.S VARIACION CORRELACION
O Y LECTURA .
AUTOMATIZAD Automat.
O B&C

MASPER & Manual

JAMRA B&C
Manual
FONIO
B&C
Manual
DAMESHEK
B&C

72
Anexo N° 03

RECOPILACION DE DATOS

“COMPARACION DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS EN MUESTRAS DE PACIENTES ATENDIDOS EN

EL HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO – 2017”

METODOS MANUALES
Met. Automatizado Met. De Masper & Jamra Met. De Fonio Met. De Dameshek
CODIGO RECUENTO % % de % de
DEL DEL MET. % de
Variación variación variación
PACIENTE B&C variación
RECUENTO RECUENTO entre M. RECUENTO entre M. RECUENTO entre M.
entre M.
B&C y M. B&C. y B&C y M.
B&C y M.A
M&J M.F D.
1 669000 630000 5.8 700000 -4.6 695800 -4.0 646800 3.3
2 507000 464000 8.5 670000 -32.1 477480 5.8 460600 9.2
3 90000 81000 10.0 82500 8.3 79800 11.3 84000 6.7
4 120000 98000 18.3 152500 -27.1 121110 -0.9 128700 -7.3
5 802000 753000 6.1 395000 50.7 843200 -5.1 843200 -5.1
6 525000 459000 12.6 532500 -1.4 470290 10.4 510900 2.7
7 219000 188000 14.2 327500 -49.5 233280 -6.5 211500 3.4
8 498000 399000 19.9 565000 -13.5 464400 6.7 420000 15.7
9 60000 53000 11.7 62500 -4.2 53500 10.8 68600 -14.3
0.0

73
10 103000 103000 0.0 80000 22.3 97200 5.6 108000 -4.9
11 226000 195000 13.7 160000 29.2 250160 -10.7 238500 -5.5
12 295000 226000 23.4 190000 35.6 319200 -8.2 267900 9.2
13 369000 296000 19.8 197500 46.5 365540 0.9 352000 4.6
14 458000 372000 18.8 280000 38.9 440550 3.8 405900 11.4
15 324000 312000 3.7 237500 26.7 341880 -5.5 356700 -10.1
16 304000 271000 10.9 185000 39.1 339980 -11.8 356000 -17.1
17 808000 670000 17.1 597500 26.1 737000 8.8 748000 7.4
18 266000 245000 7.9 197500 25.8 258300 2.9 239200 10.1
19 232000 231000 0.4 192500 17.0 201960 12.9 228000 1.7
20 171000 152000 11.1 167500 2.0 165880 3.0 171600 -0.4
21 448000 447000 0.2 395000 11.8 414100 7.6 404000 9.8
22 673000 655000 2.7 490000 27.2 575050 14.6 620000 7.9
23 304000 277000 8.9 177500 41.6 277200 8.8 337500 -11.0
24 624000 551000 11.7 597500 4.2 565610 9.4 537900 13.8
25 456000 449000 1.5 390000 14.5 439200 3.7 423000 7.2
26 89000 73000 18.0 110000 -23.6 85840 3.6 81000 9.0
27 215000 173000 19.5 220000 -2.3 188760 12.2 204600 4.8
28 253000 225000 11.1 242500 4.2 233730 7.6 253700 -0.3
29 260000 222000 14.6 245000 5.8 265880 -2.3 243800 6.2

30 242000 208000 14.0 230000 5.0 226860 6.3 175500 27.5

31 250000 251000 -0.4 245000 2.0 200260 19.9 178600 28.6
32 231000 225000 2.6 225000 2.6 233310 -1.0 256200 -10.9
33 279000 204000 26.9 260000 6.8 240580 13.8 225600 19.1
34 350000 298000 14.9 305000 12.9 245000 30.0 357000 -2.0
35 241000 249000 -3.3 237500 1.5 178340 26.0 237600 1.4

74
36 295000 247000 16.3 255000 13.6 256500 13.1 288100 2.3
37 220000 231000 -5.0 215000 2.3 147400 33.0 211500 3.9
38 738000 690000 6.5 525000 28.9 767520 -4.0 478800 35.1
39 707000 643000 9.1 530000 25.0 763560 -8.0 453600 35.8
40 310000 255000 17.7 287500 7.3 257300 17.0 390100 -25.8
41 373000 314000 15.8 307500 17.6 414030 -11.0 466200 -25.0
42 308000 260000 15.6 287500 6.7 203280 34.0 303600 1.4
43 317000 244000 23.0 297500 6.2 221900 30.0 336000 -6.0
44 285000 278000 2.5 265000 7.0 259350 9.0 409500 -43.7
45 391000 359000 8.2 345000 11.8 340170 13.0 408900 -4.6
46 115000 102000 11.3 107500 6.5 114000 0.9 105000 8.7

47 301000 298000 1.0 245000 18.6 276330 8.2 256200 14.9

48 289000 255000 11.8 180000 37.7 285090 1.4 239700 17.1
49 298000 247000 17.1 172500 42.1 294020 1.3 286700 3.8
50 337000 347000 -3.0 232500 31.0 325470 3.4 302100 10.4
51 183000 173000 5.5 147500 19.4 194800 -6.4 184000 -0.5
52 377000 359000 4.8 412500 -9.4 338000 10.3 350000 7.2
53 225000 189000 16.0 212500 5.6 199120 11.5 182400 18.9
54 279000 246000 11.8 160000 42.7 267840 4.0 264600 5.2

55 623000 643000 -3.2 442500 29.0 541620 13.1 550800 11.6

56 315000 314000 0.3 302500 4.0 261300 17.0 268000 14.9
57 767000 655000 14.6 717500 6.5 765260 0.2 697200 9.1
58 403000 359000 10.9 445000 -10.4 380000 5.7 326800 18.9
59 207000 189000 8.7 252500 -22.0 216240 -4.5 204000 1.4
60 287000 255000 11.1 385000 -34.1 246470 14.1 215600 24.9

75
61 347000 359000 -3.5 240000 30.8 316800 8.7 309600 10.8
62 424000 449000 -5.9 452500 -6.7 384640 9.3 307200 27.5
63 202000 189000 6.4 162500 19.6 188600 6.6 184000 8.9
64 266000 247000 7.1 297500 -11.8 232800 12.5 211200 20.6

65 269000 255000 5.2 280000 -4.1 298240 -10.9 275200 -2.3

66 213000 208000 2.3 185000 13.1 176400 17.2 176400 17.2
67 358000 364000 -1.7 415000 -15.9 422060 -17.9 404200 -12.9
68 447000 449000 -0.4 447500 -0.1 476100 -6.5 441000 1.3
69 228000 223000 2.2 210000 7.9 232630 -2.0 206400 9.5
70 274000 278000 -1.5 135000 50.7 234080 14.6 228800 16.5
71 354000 347000 2.0 222500 37.1 357420 -1.0 303600 14.2
72 260000 251000 3.5 272500 -4.8 220480 15.2 259700 0.1
73 368000 364000 1.1 292500 20.5 373750 -1.6 338000 8.2
74 420000 376000 10.5 247500 41.1 452320 -7.7 369600 12.0
75 341000 347000 -1.8 275000 19.4 259680 23.8 220800 35.2
76 293000 298000 -1.7 327500 -11.8 323360 -10.4 267900 8.6
77 282000 278000 1.4 242500 14.0 271950 3.6 249900 11.4
78 115000 102000 11.3 132500 -15.2 86320 24.9 88400 23.1
79 276000 278000 -0.7 345000 -25.0 240300 12.9 211500 23.4
80 367000 314000 14.4 450000 -22.6 300150 18.2 289800 21.0
81 283000 278000 1.8 222500 21.4 175440 38.0 166600 41.1
82 252000 255000 -1.2 190000 24.6 284400 -12.9 270000 -7.1
83 247000 244000 1.2 215000 13.0 262880 -6.4 233200 5.6
84 297000 298000 -0.3 270000 9.1 251160 15.4 230100 22.5
85 603000 643000 -6.6 465000 22.9 616280 -2.2 444000 26.4
86 337000 347000 -3.0 275000 18.4 423940 -25.8 385400 -14.4

76
87 326000 314000 3.7 350000 -7.4 299720 8.1 225400 30.9
88 308000 298000 3.2 290000 5.8 246950 19.8 242000 21.4
89 357000 366000 -2.5 257500 27.9 328800 7.9 396000 -10.9
90 314000 314000 0.0 305000 2.9 270510 13.9 284000 9.6
91 314000 298000 5.1 157500 49.8 273920 12.8 180400 42.5
92 481000 490000 -1.9 242500 49.6 365160 24.1 357000 25.8
93 119000 121000 -1.7 100000 16.0 115010 3.4 132500 -11.3
94 289000 298000 -3.1 157500 45.5 295120 -2.1 272000 5.9

95 56000 52000 7.1 45000 19.6 53600 4.3 54400 2.9

96 489000 469000 4.1 270000 44.8 388300 20.6 407000 16.8
97 262000 214000 18.3 217500 17.0 210900 19.5 203500 22.3
98 189000 152000 19.6 137500 27.2 171680 9.2 162800 13.9
99 256000 234000 8.6 132500 48.2 226590 11.5 273900 -7.0
100 283000 231000 18.4 225000 20.5 272500 3.7 255000 9.9
101 113000 95000 15.9 115000 -1.8 114400 -1.2 104000 8.0
102 249000 245000 1.6 117500 52.8 241200 3.1 220500 11.4
103 316000 288000 8.9 260000 17.7 260700 17.5 242000 23.4
104 314000 267000 15.0 235000 25.2 281010 10.5 244800 22.0
105 203000 190000 6.4 162500 20.0 207940 -2.4 188700 7.0
106 263000 236000 10.3 187500 28.7 205410 21.9 205000 22.1
107 267000 193000 27.7 212500 20.4 236380 11.5 233200 12.7
108 397000 366000 7.8 257500 35.1 364080 8.3 303400 23.6
109 300000 294000 2.0 217500 27.5 292640 2.5 279000 7.0
110 212000 210000 0.9 167500 21.0 190800 10.0 180000 15.1
111 160000 146000 8.8 115000 28.1 139740 12.7 149600 6.5
112 267000 247000 7.5 145000 45.7 200760 24.8 189000 29.2

77
113 559000 489000 12.5 272500 51.3 490880 12.2 416000 25.6
114 359000 269000 25.1 225000 37.3 303240 15.5 310800 13.4
115 254000 217000 14.6 210000 17.3 226380 10.9 210000 17.3
116 271000 273000 -0.7 167500 38.2 229400 15.4 251600 7.2
117 256000 223000 12.9 132500 48.2 237120 7.4 223600 12.7
118 285000 218000 23.5 207500 27.2 311860 -9.4 285200 -0.1
119 198000 172000 13.1 115000 41.9 173250 12.5 157500 20.5
120 424000 362000 14.6 272500 35.7 353580 16.6 333700 21.3
121 287000 223000 22.3 212500 26.0 242950 15.3 232200 19.1
122 286000 234000 18.2 212500 25.7 271200 5.2 249600 12.7
123 198000 187000 5.6 145000 26.8 181670 8.2 177600 10.3
124 268000 234000 12.7 165000 38.4 276460 -3.2 243800 9.0

125 249000 254000 -2.0 272500 -9.4 225450 9.5 211500 15.1
126 200000 165000 17.5 142500 28.8 215280 -7.6 218400 -9.2
127 262000 251000 4.2 235000 10.3 261360 0.2 237600 9.3
128 374000 324000 13.4 375000 -0.3 313200 16.3 270000 27.8
129 378000 299000 20.9 332500 12.0 372000 1.6 328000 13.2
130 382000 329000 13.9 285000 25.4 320250 16.2 292800 23.4
131 275000 268000 2.5 215000 21.8 227040 17.4 202100 26.5
132 318000 296000 6.9 177500 44.2 285450 10.2 275000 13.5
133 334000 295000 11.7 230000 31.1 285000 14.7 273600 18.1
134 307000 300000 2.3 267500 12.9 264680 13.8 244400 20.4
135 305000 299000 2.0 277500 9.0 317840 -4.2 278400 8.7
136 322000 301000 6.5 307500 4.5 290700 9.7 290700 9.7
137 212000 217000 -2.4 237500 -12.0 201280 5.1 192400 9.2
138 200000 210000 -5.0 192500 3.8 184470 7.8 168300 15.9

78
Anexo N° 04

“Resultados de la Interpretación de la correlación de los resultados de los métodos

manuales y automatizado”
TIEMPO DE INTERPRETACION
RECUENT COEF. DE COEF.
METODOS PROCESAMIENTO Y MEDIA D.S VARIACION DE LA
O CORRELAC.
LECTURA CORRELACION
Automat. 293007 133448 0.00338
Correlación positiva
AUTOMATIZADO 01 minuto 30 segundos 0.98
318123 141987 muy alta
B&C 0.00323

MASPER & Manual 263098 126843 0.00349

Correlación positiva
40 minutos 0.84
JAMRA B&C 318123 141987 0.00323 alta

Manual 295948 142886 0.00350

Correlación positiva
FONIO 20 minutos 0.97
muy alta
B&C 318123 141987 0.00323

Manual 284014 128106 0.00326

Correlación positiva
DAMESHEK 20 minutos 0.93
318123 141987 muy alta
B&C 0.00323

79
Anexo N° 05

“Resultados de la Interpretación de la correlación de los resultados patológicos de los métodos

manuales y automatizado”
TIEMPO DE INTERPRETACION
COEF. DE COEF.
METODOS PROCESAMIENTO Y RECUENTO MEDIA D.S VARIACION DE LA
CORRELAC.
LECTURA CORRELACION
Automat. 348708 244982 0.00621
Correlación positiva
AUTOMATIZADO 01 minuto 30 segundos 0.98
354292 263818 muy alta
B&C 0.00601

MASPER & Manual 268958 220807 0.00608

40 minutos 0.81 Correlación positiva
JAMRA B&C 354292 263818 0.00601 alta

Manual 329787 262805 0.00644

Correlación positiva
FONIO 20 minutos 0.96
354292 263818 muy alta
B&C 0.00601

Manual 311408 233457 0.00594

Correlación positiva
DAMESHEK 20 minutos 0.95
354292 263818 muy alta
B&C 0.00601

80
Anexo N° 06

CAMARA DE NEUBAUER

81
Anexo N° 07

OXALATO DE AMONIO

82
Anexo N°08

FROTIS DE SANGRE PERIFERICA

83
ANEXO N° 09

REQUERIMIENTOS PARA UN ACEPTABLE EXTENDIDO DE SANGRE

PERIFÉRICA SEGÚN LA GUIA H20 - A2 DEL “CLINICAL AND LABORATORY
STANDARS INSTITUTE (CLSI)”

Calidad deseable del extendido de sangre periférica:

1. Suficiente área de trabajo

2. Mínimo 2.5 cm de longitud terminando en mínimo 1 cm del final de la lámina.

3. Transición gradual entre zonas gruesas hacia áreas delgadas, terminación en un corte recto.

4. Morfología aceptable dentro del área de trabajo.

5. Limitando que la lámina en la cual se realiza el extendido con el borde del portaobjetos
extensor liso continuo, posea márgenes para poder examinar fácilmente los bordes con el área
de inmersión.

6. No debe haber artefactos introducidos por la técnica.

7. Mínima distorsión en la distribución de las células.

8. Un lejano termino que disminuye gradualmente en grosor hasta zonas delgadas, sin
ralladuras, grumos o escollos, todo lo que indicaría un alto número de leucocitos en ésta área.

9. Se reconoce que la calidad óptima de los extendidos de sangre disminuye en casos de

anemia, policitemia o en casos con proteínas plasmáticas anormales (mieloma, enfermedad
por aglutininas frías).

84
ANEXO N° 10

TINCIÓN SEGÚN WRIGHT

Principio:
El típico color de los núcleos celulares, mayormente rojo púrpura, se basa en la interacción
molecular de la eosina y un complejo azur B - ADN. Ambos colorantes forman el complejo.
La intensidad de la coloración depende del contenido de azur B y de la relación entre azur B
y eosina amarilla. El resultado de tinción puede ser influido por diferentes factores como el
valor del pH de la solución colorante y de la solución tampón, las sustancias tampón
(amortiguadores), el tiempo de tinción y la fijación.
Resultados:

Control de calidad:
El control de calidad de los extendidos sanguíneos fue realizado por profesional experimentado
que validó la buena calidad de los extendidos, distribución de las células y coloración.
Trabajar con los tiempos de coloración establecidos por el laboratorio.

85
ANEXO N° 11

ORDEN DE EXAMENES PARA LABORATORIO CLINICO

86
Anexo N° 12

EQUIPO HEMATOLOGICO AUTOMATIZADO DE 05 ESTIRPES CELULARES-

MINDRAY BC 5380

87
Anexo N° 13

FROTIS SANGUINEO TEÑIDO Y TINCION WRIGHT

88
Anexo N° 14

RECUENTO DE PLAQUETAS EN CÁMARA DE NEUBAUER

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA 20X

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA 40X

89
Anexo N° 15

SATELITISMO Y AGREGACIÓN PLAQUETARIO

MACROPLAQUETAS

RECUENTO DE PLAQUETAS NORMALES

0
9
Anexo N° 16

RESULTADOS DE HEMOGRAMAS DEL EQUIPO AUTOMATIZADO

MINDRAY BC 5380

91
92
 MATRIZ DE CONSISTENCIA DE LA INVESTIGACIÓN
“COMPARACIÓN DE MÉTODOS PARA EL RECUENTO DE PLAQUETAS EN MUESTRAS DE
PACIENTES ATENDIDOS EN EL HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO – 2017”
PROBLEMA OBJETIVOS HIPOTESIS VARIABLES/DIMENSIONES
General General General
¿Cuál es la relación entre la Determinar la relación entre la La comparación de las Métodos para el recuento de plaquetas (Precisión
metodología Brecher y metodología Brecher y Cronkite metodologías para el recuento de en el recuento).
Cronkite (Gold Estándar), y (Gold Estándar), y otras plaquetas en sangre periférica
otras metodologías en la metodologías en la precisión del Dimensiones: - Metodología manual
(método Brecher y Cronkite,
precisión del recuento de recuento de plaquetas en sangre - Metodología automatizada
método de Maspes y Jamra,
plaquetas en sangre periférica periférica en muestras de método de Fonio, método de
en muestras de pacientes pacientes atendidos en el Indicadores: - Cámara de Neubauer
Dameshek y la metodología - Frotis sanguíneo
atendidos en el Laboratorio Laboratorio Clínico del Hospital automatizada) en muestras de
Clínico del Hospital Regional Regional del Cusco en el año - Impedancia eléctrica
pacientes atendidos en el servicio
del Cusco en el año 2017? 2017. de Laboratorio Clínico del Unidad de medida: Número de plaquetas por
Hospital Regional del Cusco en el mm3
año 2017, tendrá una relación
positiva muy alta en la mayoría de
las metodologías aplicadas.

SUBPROBLEMAS OBJETIVOS ESPECIFICOS SUBHIPOTESIS

PE1 ¿Cuál es la relación entre • Determinar la relación entre el HE1 Si existe relación entre el
el método Brecher y método Brecher y Cronkite método Brecher y Cronkite
Cronkite (Gold Estándar) (Gold Estándar) y el método (Gold Estándar) y el método
y el método automatizado automatizado en la precisión automatizado en la precisión
en la precisión del del recuento de plaquetas en del recuento de plaquetas en
recuento de plaquetas en sangre periferica en muestras sangre periferica en
sangre periferica en de pacientes atendidos en el muestras de pacientes
muestras de pacientes Laboratorio Clinico del atendidos en el Laboratorio
atendidos en el Hospital Regional del Cusco Clinico del Hospital
Laboratorio Clinico del en el año 2017. Regional del Cusco en el
Hospital Regional del

93
 Cusco en el año 2017? • Establecer la relación entre la año 2017
método Brecher y Cronkite
PE2 ¿Cuál es la relación entre (Gold Estándar) y el método HE2 No existe una relación
la método Brecher y de Maspes y Jamra en la moderada entre la método
Cronkite (Gold Estándar) precisión del recuento de Brecher y Cronkite (Gold
y el método de Maspes y plaquetas en sangre periferica Estándar) y el método de
Jamra en la precisión del en muestras de pacientes Maspes y Jamra en la
recuento de plaquetas en atendidos en el Laboratorio precisión del recuento de
sangre periferica en Clinico del Hospital Regional plaquetas en sangre
muestras de pacientes del Cusco en el año 2017. periferica en muestras de
atendidos en el pacientes atendidos en el
Laboratorio Clinico del • Especificar la relación entre el Laboratorio Clinico del
Hospital Regional del método Brecher y Cronkite Hospital Regional del Cusco
Cusco en el año 2017? (Gold Estándar) y el método en el año 2017.
de Fonio en la precisión del
PE3 ¿Cuál es la relación entre recuento de plaquetas en HE3 Si existe relación entre la
la método Brecher y sangre periferica en muestras método Brecher y Cronkite
Cronkite (Gold Estándar) de pacientes atendidos en el (Gold Estándar) y el
y el método de Fonio en Laboratorio Clinico del método de Fonio en la
la precisión del recuento Hospital Regional del Cusco precisión del recuento de
de plaquetas en sangre en el año 2017. plaquetas en sangre
periferica en muestras de periferica en muestras de
pacientes atendidos en el • Determinar la relación entre pacientes atendidos en el
Laboratorio Clinico del el método Brecher y Cronkite Laboratorio Clinico del
Hospital Regional del (Gold Estándar) y el método Hospital Regional del Cusco
Cusco en el año 2017? de Dameshek en la precisión en el año 2017.
PE4 ¿Cuál es la relación entre del recuento de plaquetas en
sangre periferica en muestras HE4 Si existe relación entre la
la método Brecher y método Brecher y Cronkite
de pacientes atendidos en el
Cronkite (Gold Estándar) (Gold Estándar) y el método
Laboratorio Clinico del
y el método de Dameshek de Dameshek en la
Hospital Regional del Cusco
en la precisión del precisión del recuento de
en el año 2017.
recuento de plaquetas en plaquetas en sangre
sangre periferica en periferica en muestras de
muestras de pacientes pacientes atendidos en el
atendidos en el

94
Laboratorio Clinico del Laboratorio Clinico del
Hospital Regional del Hospital Regional del Cusco
Cusco en el año 2017? en el año 2017.

95
96