MANUAL
DE CALIBRACIONES
Y CONTROLES
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIONES Y CONTROLES
ELABORADO POR REVISADO POR APROBADO POR
María Mercedes Ramos Perez Gladys Caballero Cano Juan Carlos Díaz Silva
INTRODUCCION
La calibración es el proceso mediante el cual determinamos el resultado que
medimos cuando analizamos una muestra de concentración conocida. Las
muestras problema se compararán frente a ese resultado mediante un cálculo de
proporciones que nos devolverá la concentración de la muestra en las mismas
unidades en las que hayamos expresado el calibrador.
El control (o control interno) es un procedimiento por el cual verificamos que la
calibración es válida. Para ello usamos una muestra de concentración conocida y
estable a lo largo del tiempo (que puede ser una muestra propia conservada
especialmente para servir de control, o un control comercial para la que, en las
condiciones de calibración que queremos usar, comprobemos que el resultado
obtenido está dentro del rango de valores esperados.
Es importante no controlar con la misma muestra con la que se calibra, ya que
siempre obtendremos un resultado «correcto» independientemente del estado
funcional del mismo. Controles y calibradores deben ser, necesariamente,
muestras independientes y diferentes.
La calibración debe realizarse cuando existe la posibilidad de que el
comportamiento de los reactivos haya cambiado y los resultados no sean
comparables a los que se tenían hasta el momento. Se debe realizar una
calibración si:
Cambio del kit de reactivo: El nuevo kit puede tener un estado de
conservación diferente, o ser de un lote distinto.
Cambio del reactivo de trabajo: Aunque el reactivo proceda de un mismo
kit, el nuevo reactivo de trabajo es diferente al anterior y podría tener alguna
característica distinta (por ejemplo, el valor de blanco de reacción en el
caso de R1 o la cantidad de enzima de R2).
Cuando se recomienda tras la apertura: Los reactivos abiertos van
degradándose debido a su exposición al aire, o por efecto de la temperatura
ambiente. Los fabricantes pueden definir unos periodos para los cuales la
calibración se mantiene dentro de unos valores razonables; más allá de ese
tiempo, el riesgo de que el reactivo sea diferente en sus características
aumenta y se recomienda una nueva calibración que «ponga a cero» el
sistema.
Cuando se tienen evidencias de que los controles no dan el valor esperado:
El utilizar controles dentro de todas las series de trabajo nos permite
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detectar cualquier alteración del reactivo si el control se desvía del valor
esperado (por ejemplo, más allá de un 15% por encima o por debajo del
valor central). Hay reglas para seguir la evolución de los valores de control
que indican la necesidad o no de recalibrar el sistema.
Cuando los valores de blanco y/o de incrementos de aborbancia son
significativamente diferentes de los resultados anteriores: Una señal de
deterioro del reactivo se obtiene cuando el valor de blanco es muy
diferente, o la variación de absorbancia en la reacción es claramente
inferior a lo esperado.
Si no se dan ninguna de estas circunstancias, es muy posible que la calibración
sea innecesaria.
Por regla general, cuanto más se parezca la muestra problema al calibrador, más
fiabilidad tendremos en el resultado. Sin embargo, hay factores propios de la
muestra que son imposibles de replicar en un calibrador, principalmente porque la
composición de la muestra es más compleja que la de un calibrador.
Uno de los más habituales es el color de la muestra, por ejemplo debido a una
concentración elevada de bilirrubina. Los calibradores habituales no tienen una
intensidad de color elevada y por tanto están libres de interferencias que sí existen
en la muestra.
Otro elemento de interferencia frecuente en las muestras es la presencia de
partículas (turbidez), que introduce fenómenos de dispersión de la luz indeseados.
Finalmente, uno de los factores externos más difíciles de detectar, pero que
pueden ser críticos en muchos parámetros, es el agua destilada utilizada en el
sistema (como agua para lavar, para diluir, etc.). El agua destilada es un
componente teóricamente neutro pero que en realidad puede contener
concentraciones de iones (calcio, magnesio, fósforo, nitratos, cloruros…) que son
relevantes para el análisis. Asegúrate de utilizar siempre una fuente de agua
destilada fiable tanto en la calibración como en el análisis y dilución de las
muestras.
La gestión correcta del estado de calibración permite ahorrar costes innecesarios
de recalibración o segundos análisis, al tiempo que asegura la veracidad de los
resultados.
A continuación se detalla los procedimientos a seguir para la calibración y corrida
de controles de pruebas, según las áreas de procesamiento.
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BIOQUIMICA
Se emplearán el CALIBRADOR y CONTROLES (NORMAL Y PATOLOGICO), de
acuerdo a la marca de los reactivos VALTEK y MONLAB, teniendo en cuenta la
fecha de vencimiento y el número de Lote.
La preparación y/o reconstitución de Calibradores y Controles, se debe realizar de
acuerdo a las indicaciones del fabricante, establecidas en sus insertos contenidos
en los kit de los mismos. Asimismo se tomará en consideración la tabla de los
valores y rangos de cada Calibrador y Control.
PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE CALIBRADORES Y CONTROLES
Los Calibradores y Controles deben mantenerse en refrigeración hasta el
momento de su reconstitución
Los Calibradores y Controles deben alcanzar temperatura ambiente, antes
de la reconstitución, la cual se realizará con agua estéril, de acuerdo al
volumen indicado en cada frasco
Una vez que se ha reconstituido los Calibradores y Controles, se
dispensarán en crioviales, en volumen de 500 uL, rotulando la fecha de
preparación y el tipo de Calibrador y/o Control.
Los crioviales rotulados, se mantendrán en congelamiento hasta su uso
El tiempo de viabilidad de los Calibradores y Controles reconstituidos, es de
60 días, después de ese tiempo se debe preparar un nuevo lote
CALIBRACIÓN
El proceso de Calibración se aplica para equipos semiautomatizados y
automatizados
Coger un criovial de Calibrador y dejar que alcance temperatura ambiente,
protegido de la luz
Rotular la cubeta o tubo como calibrador
Realizar la programación en el equipo (según sea el caso), la opción de
calibración según la prueba a realizar
Si es un lote nuevo de Calibrador, anotar el número de Lote y Fecha de
Vencimiento en el Registro de Controles Bioquímicos
Ingresar en el equipo el valor de la concentración del Calibrador indicado en
el inserto, si se trata del mismo lote empleado anteriormente, no es
necesario modificar
Realizar el procedimiento de lectura del Calibrador y anotar el Factor
obtenido (según el tipo de equipo)
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Anotar la fecha de la Calibración en el Registro de Controles Bioquímicos
El sobrante de Calibrador, se congelará inmediatamente luego de su uso
MEDICION DE CONTROLES
La medición de Controles se aplica para equipos semiautomatizados y
automatizados
Coger un criovial de Control Normal y uno de Control Patológico y dejar que
alcancen temperatura ambiente, protegido de la luz
Rotular la cubeta o tubo como Control Normal y Control patológico
Realizar la programación en el equipo (según sea el caso), para la lectura
de los Controles como si fueras muestras según la prueba a realizar
Si es un lote nuevo de Controles, anotar el número de Lote y Fecha de
Vencimiento en el Registro de Controles Bioquímicos
Anotar en el Registro de Controles Bioquímicos, los valores de las
concentraciones e intervalos o rangos de los Controles indicados en el
inserto
Realizar el procedimiento de lectura de los controles como si fueran
muestras y anotar los resultados en el Registro de Controles Bioquímicos
Verificar si el resultado del Control Normal y Patológico se encuentra dentro
del intervalo o rango indicado para la prueba realizada.
Si el valor obtenido está dentro del rango, se procede a validar y a procesar
las muestras
Si el valor obtenido está fuera del rango, se procede a realizar una
CALIBRACIÓN, siguiendo los pasos detallados anteriormente. Luego se
repite el proceso de Medición de Controles hasta que el resultado obtenido,
esté dentro del rango
El sobrante de los Controles, se congelará inmediatamente luego de su uso
PROCESAMIENTO DE LA INFORMACION
Los datos necesarios para la Calibración y Medición de Controles, se
anotarán de manera física en el Registro de Controles Bioquímicos
Dichos datos se ingresarán digitalmente a un cuadro en Excel para
almacenamiento y cálculo de la Desviación Estándar y Error de las
mediciones a fin de establecer la conformidad al proceso de Calibración y
Verificación de los Controles, garantizando así la confiabilidad de los
resultados de las muestras procesadas
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HEMATOLOGIA
Se aplica para el Analizador Hematológico Automatizado, empelando el kit de
Controles CBC-3D
INGRESO DE DATOS
Se debe ingresar al equipo los datos indicados en el inserto del kit, de
acuerdo al modelo del mismo, LOTE y FECHA DE VENCIMIENTO
Se ingresará de manera correcta los valores de cada parámetro y sus
límites, según el tipo de Control: BAJO, NORMAL y ALTO
CALIBRACION
Seleccionar en el Analizador la opción de CALIBRACION, verificando que
sea con CALIBRADORES
Se ingresan los valores de los parámetros del control NORMAL indicados
en el inserto, los cuales servirán como referencia: WBC, HB, HTO, MCV,
PLT
Se procede a realizar el aspirado del CONTROL NORMAL, hasta la
obtención de los resultados de los parámetros mencionados anteriormente
Se realizarán las repeticiones de la medición según indique el Analizador,
hasta que calcule los nuevos factores
Luego se guarda dichos factores
MEDICION DE CONTROLES
Permitir que los Controles alcancen temperatura ambiente antes de su uso
Mezclar suavemente por inversión, cada tubo antes de la aspiración
Ingresar en el Analizador a la opción de Control o QC, y realizar la medición
de cada control según corresponda
Verificar si el Analizador muestra alguna Alerta o resultado en Rojo o Azul,
que indica que los resultados están fuera del rango o límite de cada
parámetro
Imprimir los resultados de cada Control y colocarlos en el Registro de
Controles Hematológicos
Si se observan resultados de los controles dentro del rango, se valida y se
procesan las muestras normalmente
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Si se observan resultados de los controles fuera de rango, se procederá a
repetir la lectura del control. Si persiste la alerta, se procederá a
CALIBRAR, siguiendo los pasos indicados anteriormente. Luego se repite la
Medición de los Controles hasta que todos los resultados estén dentro del
rango
Una vez usados los controles se vuelven a refrigerar hasta su próximo uso
PROCESAMIENTO DE LA INFORMACION
Los datos necesarios para la Calibración y Medición de Controles, se
anotarán de manera física en el Registro de Controles Hematológicos
Dichos datos se ingresarán digitalmente a un cuadro en Excel para
almacenamiento y cálculo de la Desviación Estándar y Error de las
mediciones a fin de establecer la conformidad al proceso de Calibración y
Verificación de los Controles, garantizando así la confiabilidad de los
resultados de las muestras procesadas
INMUNOLOGÍA
La Aplicación de la Calibración y Medición de Controles se realiza mediante el
empleo de Soluciones Control que dispone cada fabricante de las pruebas a
realizar
INMULOGIA MANUAL (SEROLOGIA)
Aplica para las pruebas: RPR, PCR (CUALITATIVO), FR (CUALITTATIVO), ASO
(CUALITATIVO), AGLUTINACIONES
Los Controles NORMAL y PATOLOGICO, se mantienen en refrigeración
hasta su uso
Llevar a temperatura ambiente los Controles antes de su uso
Procesar los Controles como muestras, y observar la presencia de
Aglutinación o Floculación (según la prueba) en el caso de los
CONTROLES PATOLÓGICOS, y su ausencia en los CONTROLES
NORMALES, lo que indica la eficacia del Reactivo
Si los resultados de aglutinación o floculación NO coinciden con el tipo de
Control, se procede a realizar el cambio del kit, y reportar al proveedor de
las pruebas a fin de realizar el cambio del mismo.
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Si los resultados de aglutinación o floculación coinciden con el tipo de
Control, se procede a validar el procedimiento y se procesan las muestras
normalmente
INMUNOLOGIA ESPECIAL (ELISA)
Aplica para pruebas que se procesan en el Lector de ELISA semiautomatizado,
empleando el set de calibradores y/o controles que se incluyen en los kits de cada
prueba
CALIBRACIÓN
Llevar a temperatura ambiente los calibradores y/o controles
Rotular cada pocillo de acuerdo a la concentración del calibrador, según la
prueba
Proceder a adicionar los volúmenes de los Reactivos y seguir con el
procedimiento de las pruebas
Realizar la lectura de las absorbancias de los pocillos, seguido el equipo
realizará el cálculo de la curva de calibración. Finalmente se guarda dicha
información
MEDICION DE CONTROLES
Los controles se pueden medir inmediatamente después de la calibración,
para verificar la misma
Se escoge uno de los calibradores de concentración conocida empleado en
la calibración y se procesa como muestra
Se obtiene la lectura del resultado del Calibrador/control y se compara con
el valor del frasco
Se anota el resultado en el Registro de Controles de Elisa
Si el valor obtenido es cercano al del frasco seleccionado, se procede a
validar y a procesar las muestras
Si el valor obtenido es muy diferente al del frasco seleccionado, se procede
a realizar una nueva CALIBRACIÓN, siguiendo los pasos detallados
anteriormente. Luego se repite el proceso de Medición de Controles hasta
que el resultado obtenido, se aproxime al valor del frasco seleccionado
PROCESAMIENTO DE LA INFORMACION
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Los datos necesarios para la Calibración y Medición de Controles, se
anotarán de manera física en el Registro de Controles de ELISA
Dichos datos se ingresarán digitalmente a un cuadro en Excel para
almacenamiento y cálculo de la Desviación Estándar y Error de las
mediciones a fin de establecer la conformidad al proceso de Calibración y
Verificación de los Controles, garantizando así la confiabilidad de los
resultados de las muestras procesadas
ANEXOS
ANEXO 1: REGISTRO DE CONTROLES DE ELISA
PRUEBA PRUEBA PRUEBA
CONC. CONC. CONC.
FECHA MICROP RESULTADO FECHA MICROP RESULTADO FECHA MICROP RESULTADO
CALIB. CALIB. CALIB.
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ANEXO 2: REGISTRO DE CONTROLES BIOQUIMICOS
CONTROL NORMAL CONTROL PATOLOGICO
LOTE FECHA DE
FECHA PRUEBA MARCA FECHA DE RESULTAD FECHA DE RESULTADO FACTOR
REACTIVO VENCIMIENTO LOTE LOTE
VENCIMIENTO O (mg/dL) VENCIMIENTO (mg/dL)
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ANEXO 3: REGISTRO DE CONTROLES HEMATOLOGICOS
RESPONSABLE FECHA
N° LOTE FECHA DE CADUCIDAD
CONTROL BAJO CONTROL NORMAL CONTROL ALTO