VALIDACIÓN DE
MÉTODOS
ANALÍTICOS
MAI. CINTHIA ADRIANA PEÑA MARTINEZ
¿Qué es validación?
“La validación de un método analítico es el proceso por el cual se
establece, mediante estudios de laboratorio, que las características
de desempeño del método cumplen con los requisitos para las
aplicaciones analíticas previstas”.
USP 31–NF 26, Capítulo General <1225>
Validación de métodos farmacopéicos
¿Qué es validación?
“La validación de métodos, es el proceso por el cual se
demuestra que los procedimientos analíticos son aptos
para el uso indicado.”
FDA draft guidance – Analytical
Procedures and Methods Validation
¿Cuál es el objetivo de la validación?
“El objetivo de la validación de un procedimiento analítico es
demostrar que es apto para el propósito indicado.”
ICH Guideline Q2A –
Text on Validation of Analytical
Procedures
* DEMOSTRAR CONFIANZA Y CONSISTENCIA
*TRABAJAR MÉTODOS VALIDADOS
* PERMITIR EL CUMPLIMIENTO A LOS
REQUERIMIENTOS NORMATIVOS
ÉNFASIS EN PUNTOS DEL PROTOCOLO DE VALIDACIÓN EN CADA
PARTE QUE LO CONFORMA…
EVALUAR
● Linealidad
● Especificidad
● Limite de Detección
● Límite de cuantificación Precisión
● Exactitud
MÉTODO QUE REQUIERE SER…
Características
Analíticas
VALIDACIÓN
CALIDAD DE LOS DATOS
COMPONENTES
Verificación del Control de
Calidad Calificación de los
(calibración, materiales de instrumentos
referencia) analíticos
Pruebas de aptitud del
Validación de los métodos analíticos
sistema
Componentes del Proceso de validación
¿Por qué es necesaria la validación analítica?
Métodos reproducibles
Métodos confiables
VALIDACIÓN
ANALÍTICA
¿Cuál es el propósito de la validación analítica?
“El método analítico debe estar
normalizado
antes de iniciar el proceso de
validación”
Etapas para desarrollar un método analítico
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VALIDAR
DEFINIR LAS ESTANDARIZAR EL
BUSQUEDA Práctico : tiempo,
CONDICIONES METODO
BIBLIOGRAFÍCA recursos
El equipo Encontrar las
Idóneo: preciso,
Los reactivos condiciones óptimas
exacto
El muestreo
La validación de procedimientos analíticos
requiere:
Instrumentos calificados y calibrados
Métodos documentados
Patrones de referencia confiables
Analistas calificados
Integridad de la muestra
Plan maestro de validación
Protocolo de validación para método analítico
debe especificar:
• El propósito y el alcance
• Responsabilidades y competencias
• Método de ensayo normalizado y documentado
(los pasos del método no pueden ser modificados
durante la validación)
• Lista de materiales y equipos
• Las características de desempeño que se evaluarán
(especificidad, linealidad, etc.) y el Procedimiento para
evaluarlas. experimentos para cada parámetro)
• Análisis estadístico o fórmulas
• Criterio de aceptación para cada parámetro de desempeño
(los criterios de aceptación no pueden ser cambiados para
ajustarse a los datos)
Calificación del instrumento
Marca, modelo y manual del fabricante
Modificaciones
Calificación de la instalación y de la operación
Programas de calibración
Cronogramas de mantenimiento
Diferentes clases de ensayos analíticos
Clase A: Para establecer identidad
Clase B: Para detectar y cuantificar impurezas
Clase C: Para determinar cuantitativamente la
concentración
Clase D: Para evaluar las características, disolución,
uniformidad de contenido
Clasificación OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validación de métodos analíticos)
Extensión de la validación
Métodos nuevos requieren validación completa
Métodos de Farmacopea requieren validación parcial
(o verificación)
Cambios significativos implican revalidación parcial
cambios de equipo
cambios de fórmula
cambios de proveedores de reactivos críticos
Verificación de procedimientos farmacopéicos
Los usuarios de los procedimientos analíticos farmacopéicos no
necesitan validar estos procedimientos cuando los usan por primera
vez, aun cuando debe establecer evidencias documentadas de
aptitud en las condiciones reales, FDA estableció este requisito en el
punto 21 CFR 211.194 a 2 .” Se verificará la aptitud de todos los
métodos de prueba usados bajo las condiciones reales de uso “.
No incluye los microbiológicos
Verificación de procedimientos
farmacopéicos
EL PROCESO DE VERIFICACION, da confianza en que los
procedimientos se llevan a cabo con la aptitud requerida
Si la verificación no es exitosa y la consulta y asistencia del
personal USP, no logra solucionar el problema, se puede concluir
que el procedimiento posiblemente, no es apto para usar en el
artículo que se está evaluando en el laboratorio y entonces se hace
necesario validar el método analítico.
Reporte de Validación
Objetivo y alcance del método, aplicabilidad
Tipo de analito y la matriz sobre la que se hizo la validación,
Detalles del analito, reactivos, estándares de referencia y control y
estabilidad de las muestras preparadas.
Procedimiento para la verificación de la calidad de los estándares y
reactivos químicos usados
Condiciones de seguridad
• Parámetros del método
• Parámetros críticos establecidos a través del test de robustez
• Listado de equipos, funcionamiento, condiciones de desempeño.
IQ,OQ,PQ
• Detalle de las condiciones y cómo fue realizado el proceso, incluyendo
la preparación de la muestra
• Tratatamiento estadístico y cálculos realizados
• Procedimientos de control rutinario
• Registros como cromatogramas, espectros y curvas de
calibración.
•
• test de aceptación de las variables
• Resultados de la incertidumbre de la medición
• Criterios para revalidación
• Persona que desarrolló y validó el
• método inicialmente
• Resumen y conclusiones
Transferencia de métodos analíticos
*Protocolo y procedimiento del método de transferencia :
Precisión
Exactitud
Robustez
*Método científico escrito y aprobado
*Verificación de la competencia
*Aceptación formal por el nuevo laboratorio
Especificidad y Selectividad
Se utilizan en:
Identificación: garantizar la identidad del analito
Pruebas de pureza: declaración exacta del contenido de impurezas de
un analito (sustancias relacionadas, metales pesados, disolventes
residuales,etc.)
Valoración: un resultado exacto que permite la declaración exacta del
contenido o potencia del analito en la muestra
En análisis cualitativos: Debe tener la capacidad de distinguir
compuestos de estructura estrechamente relacionada (productos de
degradación)
USP 31
LdeD, LdeC y RSR
Límite de Cuantificación
Límite de Detección
Relación de Señal a Ruido
LdeD
: “la menor cantidad de analito que puede detectarse
en una muestra, aunque no necesariamente cuantificarse, bajo las
condiciones del experimento indicadas. Así́, las pruebas de límite
confirman simplemente que la cantidad de analito se encuentra por
encima o por debajo de un cierto nivel.”
La ICH cuando hay ruido de fondo recomienda que el cálculo del LD
puede realizarse con un valor con el cual la relación entre señal y
ruido (S/R) es 2:1 ó 3:1.
El LD es una característica de las pruebas límite
LdeC
“La menor cantidad de analito en una muestra que puede
determinarse con precisión y exactitud aceptables bajo las
condiciones del experimento establecidas”. USP 31 <1225>
En esencia, idéntico a ICH Q2A
Límite de cuantificación (LC) = límite de cuantificación (LOQ)
RSR
INTERVALO
El intervalo de un método analítico es la amplitud
entre los niveles superior e inferior del analito
(incluidos estos niveles) que se demostró que se
determinó con un nivel adecuado de precisión,
exactitud y linealidad, utilizando el método según se
describe en el protocolo.
USP 31
LINEALIDAD
La linealidad de un método analítico es su
capacidad para obtener resultados de prueba que
sean proporcionales ya sea directamente, o por
medio de una transformación matemática bien
definida, a la concentración de analito en muestras
en un intervalo dado.
USP 31
Características de los procedimientos
analíticos
Exactitud
Precisión
Repetibilidad
Reproducibilidad
Exactitud
Calculado como el porcentaje de analito
recuperado o
por la diferencia entre el valor obtenido y
el valor real
evaluado estadísticamente
PRECISIÓN
El grado de coincidencia entre los
resultados de las muestras individuales
de una muestra homogénea
La precisión debe evaluarse a través del
intervalo de cuantificación especificado
en el método
Precisión comparada con exactitud
La exactitud se expresa como % de
recuperación
La precisión se expresa como
Desviación Estándar Relativa (RSD)
ROBUSTEZ
La USP 31 la define como “una medida de
la capacidad del método analítico, y
demuestra que no resulta afectado por
pequeñas pero deliberadas variaciones en
los parámetros del método y proporciona
una indicación de su confiabilidad durante
su uso normal”.
APTITUD DEL SISTEMA
“Si las mediciones son susceptibles a variaciones en
condiciones analíticas, éstas deben controlarse
adecuadamente o incluirse en el método una
declaración preventiva.”
“Las pruebas de aptitud del sistema se basan en el
concepto que el equipo, el sistema electrónico, las
operaciones analíticas y las muestras a analizar
constituyen un sistema integral que puede evaluarse
como tal.”