Pruebas
bioquímicas
MIO
Laboratorio de Microbiología
López Carpinteyro Rebeca Iridian - 202043541
Osorio Lima Denisse Arely - 202140438
Sánchez Reyes Paola - 202159991
San Martín Caro María José - 202159055
FUNDAMENTO BIOQUÍMICO
Medio utilizado en la identificación de miembros
de la familia Enterobacteriaceae en base a la
movilidad, producción de indol y actividad
enzimática ornitina decarboxilasa.
Medio de cultivo altamente nutritivo
por la presencia de extracto de
levadura, peptona y tripteína.
FUNDAMENTO BIOQUÍMICO
TRIPTEÍNA ORNITINA AGAR MICROORGANISMOS
Aporta gran Sustrato para la Agente Acidifican el medio
cantidad de detección de la solidificante y le de cultivo y
triptofano enzima ornitina otorga al medio producen viraje del
decarboxilasa propiedad de color púrpura al
ser semisólido, amarillo
Composición del medio:
Composición (gramos/ litro):
Extracto de levadura
3.00 Las peptonas y el extracto de levadura aportan aminoácidos y
Peptona de caseína nutrientes esenciales.
10.00
Triptona
10.00 La dextrosa constituye una fuente de energía al ser un hidrato de
Dextrosa carbono fermentable.
1.00
Clorhidrato de L-Ornitina
5.00 El púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio
Púrpura de Bromocresol: alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo.
0.02
Agar Bacteriológico
2.00
Reactivo de Kovacs (Revelador de prueba indol)
Alcohol Amílico, Isoamílico o Butílico. 150 ml.
pH final medio de cultivo listo para el uso: p-dimetilaminobenzaldehído 10 gr.
6.5 +/-0.2 Ácido clorhídrico concentrado. 50 ml.
CÓMO SE SIEMBRA
Para sembrar este medio se toma
un asa recta o aguja y se toma
una porción de la colonia a
estudiar.
Se hace una punción profunda en el
medio M.I.O. en línea recta. No es
recomendable realizar doble punción ya
que puede dar falsa imagen de motilidad
si las punciones no se realizan en el
mismo sitio.
Incubar por 24 a 48 horas a 37°C en aerobiosis.
Es aconsejable sacar de forma aséptica 2 ml del medio,
trasvasarlo a un tubo estéril y realizar allí la prueba
del indol. Incubar 24 horas más y volver a revelar.
POSIBLES RESULTADOS
OBSERVAR LA MOVILIDAD Y EL COLOR DEL MEDIO DE
CULTIVO. LUEGO REALIZAR LA PRUEBA DE INDOL.
ORNITINA
MOVILIDAD PRUEBA DEL
DESCARBO
INDOL
XILASA
INDICADOR DE pH
En este caso se utiliza púrpura de bromocresol. Al
acidificarse (pH=5.2), el indicador vira a amarillo, y al
alcalinizarse vira a morado (pH=6.2). Medio no inoculado es
color púrpura intenso brillante (pH=6)
POSIBLES RESULTADOS
AD
LID
VI
MO
Positivo: presencia de
turbidez o crecimiento
Negativo:
crecimiento
más allá de la línea de solamente en la
siembra línea de siembra
POSIBLES RESULTADOS
Positivo: color púrpura
La descarboxilación
ORNITINA
de la ornitina como el Mide la capacidad enzimática para
medio tiene una descarbolixar una enzima (ornitina) para formar
pequeña cantidad de una amina.
glucosa.
El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por
la enzima ornitina descarboxilasa para dar la
diamina putrescina (la cual es alcalina y
sobrepasa la acidez dada por la fermentación
resultando el color morado.) y CO2.
Color amarillo en el fondo,
cuando se fermenta la glucosa.
(ornitina descarboxilasa
negativa)
POSIBLES RESULTADOS
INDOL
Positivo: Anillo Negativo: el color del
color rojo en reactivo revelador
la superficie permanece incoloro-
del centro amarillento
Se da cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzoaldehido
(sustancia activa del reactivo de Kovacs)
Se produce en aquellos microorganismos capaces de fermentar los hidratos de
carbono.
PRODUCCIÓN DEL INDOL
Se formará si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima triptofanasa, que
desbordará el triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas
bacterias para formar 3 metabolitos principales
Indol
Escatol
Indolacético
El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indopirúlvico.
La degradación del triptófano libera: indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía.
El indol es incolor pero al reaccionar con el reactivo de Kovacs, que se adiciona
después de que creció la bacteria, toma un color rojo.
A) Tubo MIO inoculado
B) Indol negativo
C) Indol positivo
D) Móvil/Ornitina positivo
E) Inmóvil/ornitina
negativa
F) Inmóvil/Ornitina
positiva
POSIBLES RESULTADOS MIO
GRACIAS POR TU
ATENCIÓN
REFERENCIAS
Medio M.I.O. (Motilidad – Indol – Ornitina). (s. f.). Valtek. Recuperado 5
de marzo de 2023, de [Link]
content/uploads/2020/02/Medio-MIO-Valtek-Versi%C3%[Link]